Le sujet proposé a un caractère pluridisciplinaire

BTS BioAC / E3-U32
2e année - DST n°1
AFBB
Mercredi 18 novembre
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BREVET DE TECHNICIEN SUPERIEUR
BIOANALYSES ET CONTROLES
Epreuve E3 – Unité U32
Microbiologie et technologies d’analyses
Documents et calculatrice interdits
Dictionnaire Anglais-Français autorisé
DUREE DE L’EPREUVE : 2h00

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Listeria monocytogenes
La listériose est une maladie infectieuse d’origine alimentaire provoquée par la bactérie Listeria
monocytogenes. La fréquence de cette maladie augmente depuis plusieurs années sans qu’il soit
possible d’établir s’il s’agit réellement d’une extension ou d’une meilleure détection. La transmission
ayant lieu par voie digestive suite à la consommation d’aliments contaminés, de nombreux tests de
dépistage ont été développés.
1. Position taxonomique de Listeria monocytogenes
Le genre Listeria est classé dans le groupe des bactéries à Gram positif de faible GC%, plus
particulièrement dans la classe des Bacilli.
1.1. Citer deux autres genres appartenant à cette classe.
1.2. La « Tm » d’une souche de Listeria monocytogenes est de 84°C.
1.2.1. Définir la « Tm » et décrire la technique permettant de la déterminer (un graphique
complétera avantageusement cette description).
1.2.2. A l’aide de l’équation suivante, déterminer le GC% de Listeria monocytogenes :
GC% = 2,5 Tm - 172
1.2.3. Justifier le signe du coefficient directeur de l’équation de la droite GC% = (Tm).
1.3. Le GC% d’une espèce appelée Listeria denitrificans est supérieur à 55 %. Des études
d'homologie ADN-ADN révèlent que Listeria denitrificans présente au maximum 20 %
d'homologie avec les autres espèces du genre Listeria.
1.3.1. Définir le degré d’homologie de deux bactéries.
1.3.2. Que suggèrent ces informations ?
2. Recherche de Listeria monocytogenes dans les aliments
En ce qui concerne les préparations en poudre pour nourrissons, le règlement européen 2073/2005
fournit les données suivantes :
Micro-organismes
n
c
m
M
Listeria monocytogenes
10
0
Absence dans 25 grammes
2.1. Donner la signification des paramètres n, c, m et M.
2.2. Le protocole de recherche de L. monocytogenes est fourni dans le document 1.
2.2.1. Qu’est-ce qu’une méthode horizontale ?
2.2.2. S’agit-il d’une méthode normalisée ? Justifier la réponse.
2.2.3. Nommer chacune des étapes et préciser succinctement leur rôle respectif.
2.2.4. Justifier l’emploi des bouillons de Fraser 1/2 et 1/1 (composition donnée document 2)
pour la recherche de L. monocytogenes dans les aliments.

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2.2.5. A l’aide des documents 3 et 4, identifier les deux activités enzymatiques de L.
monocytogenes mises en évidence sur milieu ALOA.
3. Identification biochimique de Listeria monocytogenes
Après isolement sur milieu ALOA, les colonies suspectes peuvent être identifiées sur galerie API®
Listeria.
3.1. Le test « DIM » est lu après ajout du réactif « ZYM B », dont le flacon porte le pictogramme
ci dessous :
Donner la signification du pictogramme de sécurité et citer une précaution à prendre lors de
l’utilisation de ce réactif.
3.2. L’-mannosidase catalyse l’hydrolyse du substrat suivant :
3.2.1. -mannosidase (formules chimiques
exigées).
3.2.2. Quelle coloration correspond à résultat positif ? Justifier.
3.3. Une colonie suspecte a donné le profil biochimique suivant :
3.3.1. A quoi correspondent les valeurs présentes dans le tableau de lecture de la galerie
API® Listeria (document 5) ?
3.3.2. Calculer la probabilité pour que le profil biochimique obtenu expérimentalement
corresponde à l’espèce Listeria monocytogenes.
3.3.3. Le logiciel API® LAB fournit les renseignements suivants :
 %id = 99,8
 T = 0,57
Quelle est la signification de ces deux indices ? Commenter ces valeurs.

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Document 1
Horizontal Method for the detection of Listeria monocytogenes ISO 11290-1

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Document 2
Composition du bouillon de Fraser 1/1
Remarque : dans le bouillon de Fraser 1/2, les concentrations en acide nalidixique et en acriflavine sont diminuées
de moitié (respectivement 10 et 12,5 mg.L-1).
Document 3
Composition du milieu ALOA (Agar Listeria selon Ottaviani et Agosti)