BTS BioAC / E3-U32 Mercredi 18 novembre 2e année - DST n°1 BREVET DE TECHNICIEN SUPERIEUR BIOANALYSES ET CONTROLES Epreuve E3 – Unité U32 Microbiologie et technologies d’analyses Documents et calculatrice interdits Dictionnaire Anglais-Français autorisé DUREE DE L’EPREUVE : 2h00 AFBB Page 1 / 6 BTS BioAC / E3-U32 Mercredi 18 novembre AFBB Page 2 / 6 2e année - DST n°1 Listeria monocytogenes La listériose est une maladie infectieuse d’origine alimentaire provoquée par la bactérie Listeria monocytogenes. La fréquence de cette maladie augmente depuis plusieurs années sans qu’il soit possible d’établir s’il s’agit réellement d’une extension ou d’une meilleure détection. La transmission ayant lieu par voie digestive suite à la consommation d’aliments contaminés, de nombreux tests de dépistage ont été développés. 1. Position taxonomique de Listeria monocytogenes Le genre Listeria est classé dans le groupe des bactéries à Gram positif de faible GC%, plus particulièrement dans la classe des Bacilli. 1.1. Citer deux autres genres appartenant à cette classe. 1.2. La « Tm » d’une souche de Listeria monocytogenes est de 84°C. 1.2.1. Définir la « Tm » et décrire la technique permettant de la déterminer (un graphique complétera avantageusement cette description). 1.2.2. A l’aide de l’équation suivante, déterminer le GC% de Listeria monocytogenes : GC% = 2,5 Tm - 172 1.2.3. Justifier le signe du coefficient directeur de l’équation de la droite GC% = (Tm). 1.3. Le GC% d’une espèce appelée Listeria denitrificans est supérieur à 55 %. Des études d'homologie ADN-ADN révèlent que Listeria denitrificans présente au maximum 20 % d'homologie avec les autres espèces du genre Listeria. 1.3.1. Définir le degré d’homologie de deux bactéries. 1.3.2. Que suggèrent ces informations ? 2. Recherche de Listeria monocytogenes dans les aliments En ce qui concerne les préparations en poudre pour nourrissons, le règlement européen 2073/2005 fournit les données suivantes : Micro-organismes Listeria monocytogenes n c 10 0 m M Absence dans 25 grammes 2.1. Donner la signification des paramètres n, c, m et M. 2.2. Le protocole de recherche de L. monocytogenes est fourni dans le document 1. 2.2.1. Qu’est-ce qu’une méthode horizontale ? 2.2.2. S’agit-il d’une méthode normalisée ? Justifier la réponse. 2.2.3. Nommer chacune des étapes et préciser succinctement leur rôle respectif. 2.2.4. Justifier l’emploi des bouillons de Fraser 1/2 et 1/1 (composition donnée document 2) pour la recherche de L. monocytogenes dans les aliments. BTS BioAC / E3-U32 Mercredi 18 novembre AFBB Page 3 / 6 2e année - DST n°1 2.2.5. A l’aide des documents 3 et 4, identifier les deux activités enzymatiques de L. monocytogenes mises en évidence sur milieu ALOA. 3. Identification biochimique de Listeria monocytogenes Après isolement sur milieu ALOA, les colonies suspectes peuvent être identifiées sur galerie API® Listeria. 3.1. Le test « DIM » est lu après ajout du réactif « ZYM B », dont le flacon porte le pictogramme ci dessous : Donner la signification du pictogramme de sécurité et citer une précaution à prendre lors de l’utilisation de ce réactif. 3.2. L’-mannosidase catalyse l’hydrolyse du substrat suivant : -mannosidase (formules chimiques 3.2.1. exigées). 3.2.2. Quelle coloration correspond à résultat positif ? Justifier. 3.3. Une colonie suspecte a donné le profil biochimique suivant : 3.3.1. A quoi correspondent les valeurs présentes dans le tableau de lecture de la galerie API® Listeria (document 5) ? 3.3.2. Calculer la probabilité pour que le profil biochimique obtenu expérimentalement corresponde à l’espèce Listeria monocytogenes. 3.3.3. Le logiciel API® LAB fournit les renseignements suivants : %id = 99,8 T = 0,57 Quelle est la signification de ces deux indices ? Commenter ces valeurs. BTS BioAC / E3-U32 Mercredi 18 novembre 2e année - DST n°1 Document 1 Horizontal Method for the detection of Listeria monocytogenes ISO 11290-1 AFBB Page 4 / 6 BTS BioAC / E3-U32 Mercredi 18 novembre 2e année - DST n°1 AFBB Page 5 / 6 Document 2 Composition du bouillon de Fraser 1/1 Remarque : dans le bouillon de Fraser 1/2, les concentrations en acide nalidixique et en acriflavine sont diminuées de moitié (respectivement 10 et 12,5 mg.L-1). Document 3 Composition du milieu ALOA (Agar Listeria selon Ottaviani et Agosti) BTS BioAC / E3-U32 Mercredi 18 novembre 2e année - DST n°1 Document 4 Aspect des colonies suspectes sur milieu ALOA (Agar Listeria selon Ottaviani et Agosti) Document 5 AFBB Page 6 / 6