Projet cigale - Collège Ahuntsic

Projet de fin d’études
en physique/ biologie
Les ailes de cigale et les surfaces antimicrobiennes
Auteure : Lucie Brouillette département de biologie/biotechnologie
Dans le cadre d’un projet de collaboration entre le collège Ahuntsic, le
département de physique de l’université Concordia et la Polytechnique de
l’université de Montréal

Matériel :
ailes de cigale
Surfaces antimicrobiennes (choisies par les étudiants)
Réactifs pour coloration Gram
Lames et lamelles
Microscope et nettoyant à lentilles
Huile à immersion/microscopie
Pipettes stériles et micropipettes avec embouts stériles ou loupes stériles
Tubes stériles
Pétris de microbiologie/ tubes et milieux divers (selon la souche
microbienne)
Souches microbiennes diverses à tester (Gram +, Gram-, levures….)
Solution stérile de PBS pH 7.4
Brûleur
Pot d’alcool
Pinces à bout plat
Scalpel stérile
Spectrophotomètre et cuvettes jetables de cap. 2,5ml (lecture dans le
visible)
Incubateur de microbiologie à 37 oC
Carrés de gaze stérile
Bac de coloration

Méthodes :
Travailler stérilement autour de la flamme lorsque vous prélevez et
ensemencez des microorganismes!!!
1. Coloration Gram :
Cette technique de coloration différentielle permet de diviser les
bactéries en deux grands groupes : les bactéries à Gram positif et les
bactéries à Gram négatif.
Pour procéder à cette coloration, on doit d’abord préparer un frottis.

La préparation du frottis est la première étape des différents
types de coloration. Un bon frottis est une mince couche de
culture bactérienne que l’on laissera sécher sur une lame
propre, avant de le fixer à la chaleur.
Le frottis sera ensuite coloré à l’aide du violet de cristal. Un mordant,
une solution d’iode, sera ensuite ajouté. Un complexe iodine-violet
de cristal (de taille supérieure au violet de cristal seul) sera ainsi
formé. À ce moment, toutes les bactéries sont colorées en violet.
Ensuite, le frottis sera décoloré à l’aide d’une solution d’alcool (ou
d’acétone). À cette étape, une différence est observée : certaines
bactéries gardent le colorant violet de cristal (Gram +), alors que
d’autres le perdent (Gram -). Finalement, de la safranine sera utilisée
afin de contre-colorer en rose les bactéries Gram -.
Il est important de procéder à la coloration de Gram à partir d’une culture
dans laquelle les cellules sont en phase de croissance. En effet, les cellules
mortes avant la préparation du frottis réagissent comme des cellules Gram-
peu importe les propriétés qu’elles avaient de leur vivant. Par ailleurs, en
vieillissant, certains genres de bactéries Gram + réagissent à la coloration
comme si elles étaient Gram –.
Trucs importants/ coloration Gram :
 Éviter de décolorer trop longtemps le frottis : les bactéries Gram+
seraient elles aussi décolorées.
 Éviter de décolorer insuffisamment le frottis : le complexe iode-violet
de cristal ne serait pas complètement éliminé des bactéries Gram
négatives.
 Utiliser des cultures fraîches (18-24 heures).