PCR - OIE

Rapports de Laboratoires de référence de l’OIE
Activités de l’année 2010
Nom de la maladie (ou domaine) pour
laquelle vous étiez désigné comme
laboratoire de référence de l’OIE :
Maladie d’Aujeszky
Adresse du laboratoire :
Anses
Zoopôle Les Croix
22440 Ploufragan
Tel. :
(+33[0]2) 96.01.62.22
Fax :
(+33[0]2) 96.01.62.23
e-mail :
[email protected]
site web :
http://www.anses.fr/
Nom du responsable du laboratoire
(Chef de laboratoire) :
Gilles Salvat
Nom de l’expert de l’OIE :
Philippe Vannier
Nom de rédacteur du cette rapport
(si diffèrent de celui du dessus):
Françoise Pol
Daniel Dory
Rapports annuels des Laboratoires de référence et des Centres collaborateurs de l’OIE, 2010
1
Maladie d’Aujeszky
Partie I : Résumé des activités générales liées à la maladie
1.
Tests employés ou disponibles pour cette maladie dans le laboratoire
Contrôles sérologiques de la Maladie d’Aujeszky (MA):
-
ELISA gE : détection d’anticorps dirigés contre la protéine gE du virus de la MA à partir de sérums ;
-
ELISA gB : détection d’anticorps dirigés contre la protéine gB du virus de la MA à partir de sérums ou de
buvards ;
-
Neutralisation virale : détection d’anticorps dirigés contre le virus de la MA dans un sérum par la suppression
du pouvoir cytophatogène du virus dans un système bien défini virus-cellules sensibles.
Contrôle virologique de la MA :
2.
-
Isolement viral : mise en évidence du virus en inoculant un homogénat tissulaire à des cellules sensibles puis
vérification de la spécificité de l’effet cytopathopatique par séroneutralisation Tous les échantillons soumis
étaient prélevés sur carnivores ;
-
PCR : détection du génome du virus de la MA à l’aide de kit commerciaux de PCR temps réel.
Test
Pour
Spécificité
Total
ELISA
Détection anticorps
gE
79
ELISA
Détection anticorps
gB
1
NV
Détection anticorps
gE/gB
4
Culture sur cellules PK15
Isolement du virus
4
PCR
Détection génome viral
91
Production, contrôle et distribution des réactifs diagnostiques
Le laboratoire produit du sérum sous-étalon, calibré sur l’ADV-1 (sérum étalon défini dans la décision
CE/2008/185), ainsi que différents sérums négatifs ou positifs en gE et/ou gB. Il peut également fournir du virus
de la MA.
En 2010, 113 ml de sérums (dont 41 ml de sérum sous-étalon) ont été vendus sur le territoire national (laboratoires
vétérinaires, producteurs de kits français) et 120 ml (dont 84 ml de sérum sous-étalon) ont été vendus à l’étranger
(Belgique, Espagne, Pays-Bas, Pologne, Portugal, Nouvelle Calédonie).
13 kits de diagnostic sérologique pour les deux méthodes ELISA (contrôles lot par lot) ont été contrôlés avant leur
commercialisation sur le territoire français. Deux kits de PCR temps réel ont été validés (validation initiale).
2
Rapports annuels des Laboratoires de référence et des Centres collaborateurs de l’OIE, 2010
Maladie d’Aujeszky
Partie II : Activités spécifiques découlant du mandat des
Laboratoires de référence
(Unité virologie-immunologie porcine : M.F. Le Potier, F. Pol
Unité génétique virale et biosécurité : A. Jestin, D. Dory)
3.
Normalisation et harmonisation internationales des méthodes de diagnostic, ou de la production
et de l’évaluation de vaccins
Le laboratoire a participé avec succès à un essai inter-laboratoires d’aptitude (EILA) organisé par le laboratoire
national de référence belge (CODA-CERVA). Cet EILA concerne les techniques sérologiques ELISA gE et gB.
Il a organisé fin 2010 un EILA pour la PCR temps réel. 26 laboratoires ont participé, dont 4 laboratoires européens
(Autriche, Belgique, Pays-Bas, Royaume-Uni). Cet EILA est en cours d’exploitation.
4.
Préparation et fourniture des réactifs de référence internationaux pour les tests de diagnostic et
les vaccins
36 ml de sérums internationaux (ADV gIG, ADV gIQ et ADV I définis dans la décision CE/2008/185) ont été
fournis gracieusement (Belgique, Espagne, Irlande, Pologne).
5.
Recherche et développement de nouvelles méthodes de diagnostic et de contrôle des maladies
- Deux kits commerciaux de détection du génome du virus de la MA ont été validés en suivant les
recommandations de l’OIE. Les deux kits ont été développés par LSI (TaqVet TM, Laboratoire Service
International, Lissieux, France) et par Adiagène (ADIAVET ® PRV REALTIME, Saint-Brieuc, France).
- Etude de l’intégration de l’ADN plasmidique dans l’ADN génomique porcin après l’injection d’un vaccin à ADN
contre le virus de la maladie d’Aujeszky ;
Notre unité travaille depuis plusieurs années sur la vaccination à ADN contre le virus de la maladie d’Aujeszky
chez le porc. Après avoir étudié l’efficacité vaccinale, nous nous sommes intéressés à la bioscécurité de ce type de
vaccin, et l’étude de l’intégration de l’ADN plasmidique dans le génome de l’hôte représente un enjeu majeur. La
technique de recherche des évènements d’intégration de l’ADN plasmidique dans l’ADN génomique porcin a été
mise au point in vitro. Puis une étude in vivo a été réalisée. Pour cela des plasmides vides ou codant la
glycoprotéine B du virus de la maladie d’Aujeszky ont été injectés en intramusculaire à des porcs de 8 semaines
d’âge. Six semaines après l’injection, les points d’injection ont été prélevés et analysés. Plusieurs évènements
d’intégration ont été caractérisés. Il n’y a aucun point commun entre les séquences des sites d’intégration, ce qui
laisse supposer que l’intégration se fait suivant un processus non spécifique d’une séquence donnée. Il s’agit
d’événements rares ayant une fréquence inférieure au taux naturel de mutation de l’ADN.
- Poursuite de la caractérisation du trafic intracellulaire de la glycoprotéine B du virus de la maladie d’Aujeszky ;
Nous avions montré par le passé que la glycoprotéine B du virus de la maladie d’Aujeszky était capable de
transporter des antigènes étrangers et d’induire la production d’une réponse immunitaire contre cet antigène chez
le porc (Dory D et al, Antiviral Research 2009). Nous avions alors émis l’hypothèse que le trafic intra et extracellulaire de cette glycoprotéine pouvait être responsable de cette propriété. Nous avons alors entrepris l’étude du
trafic de la gB, en nous intéressant dans un premier temps à l’influence de certains sites fonctionnels de cette
glycoprotéine sur ce trafic. L’année 2010 a été consacrée à la mise au point des outils permettant cette étude.
6.
Recueil, analyse et diffusion des données épizootiologiques significatives pour le contrôle
zoosanitaire au niveau international
En Septembre 2010, un foyer de MA a été déclaré dans le département des Pyrénées Atlantiques. Le foyer
primaire, ayant pour origine la faune sauvage (premier cas dans un élevage plein air) était en lien avec 15 foyers
Rapports annuels des Laboratoires de référence et des Centres collaborateurs de l’OIE, 2010
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Maladie d’Aujeszky
liés (dont deux dans le département des Landes). Les élevages concernés étaient en majorité des petits élevages (2
à 4 porcs en général). Le virus n’a pas pu être isolé.
7.
Réalisation d’expertises pour l’OIE ou pour des Membres de l’OIE
Rédaction de l’OIE Manual of Diagnostic Tests and Vaccines for Terrestrial Animals, seventh edition. Chapter on
Aujeszky's disease.
8.
Formation technique et scientifique du personnel d’autres Membres de l’OIE
Sans Objet
9.
Réalisation d’analyses biologiques (test de diagnostic) pour le compte d’autres Membres de
l’OIE
Sans Objet
10. Organisation de réunions scientifiques internationales au nom de l’OIE ou d’autres
organisations internationales
Sans Objet
11. Participation à des études scientifiques internationales effectuées en collaboration
Sans Objet
12. Publication et diffusion des informations relatives au travail de l’OIE (notamment liste des
publications scientifiques, activités de publication sur internet, présentations à des conférences
internationales)

Présentations à l’occasion de conférences ou de réunions internationales
Présentations orales au cours de congrès internationaux :
-
4
Le Moigne V, Jestin A, Dory D. "Characterization of plasmid DNA integrations into porcine genomic DNA
following DNA vaccination.". Oral presentation at the "Epizone Theme 5 “Intervention Strategies” Annual
Meeting", Copenhagen, Denmark, 3-5 November. 2010.
Rapports annuels des Laboratoires de référence et des Centres collaborateurs de l’OIE, 2010
Maladie d’Aujeszky
-
Le Moigne V, Jestin A, Dory D. "Characterization of plasmid DNA integrations into porcine genomic DNA
following DNA vaccination.". Oral presentation at the "Modern Veterinary Vaccines and Adjuvants" meeting,
Budapest, Hungary, 17-19 November. 2010.
Présentations affichées au cours de congrès internationaux :
-
Faurez F, Dory D, Jestin A. In vitro and in vivo studies of a Porcine Circovirus (PCV) 2-derived replicative
plasmid. 4th Annual Epizone Meeting, Saint-Malo, France, 7-10 June 2010
Présentations affichées au cours de congrès nationaux :
-
Faurez F, Dory D, Jestin A. Etude in vivo d'un plasmide vaccinal réplicatif chez le porc. XIIèmes Journées
Francophones de Virologie. Institut Pasteur, Paris, 18 et 19 mars 2010.
-
Guellec J, Dory D, Jestin A. Etude de l'influence du trafic intracellulaire de la glycoprotéine B de l'herpesvirus
de la pseudorage porcine sur ses propriétés immunisantes, XIIèmes journées francophones de virologie, Institut
Pasteur, Paris, 18 et 19 mars. 2010.
-
Le Moigne V, Dory D, Jestin A. Détection d'évènements d'intégration de plasmides vaccinaux chez le porc.
XIIèmes Journées Francopohones de Virologie, Institut Pasteur, Paris, 18 et 19 mars 2010.

Publications scientifiques
-
Faurez F, Dory D, Henry A, Bougeard S, Jestin A. Replication efficiency of rolling-circle replicon-based
plasmids derived from porcine circovirus 2 in eukaryotic cells. J Virol Methods 2010;165:27-35.
-
Faurez F, Dory D, Le Moigne V, Gravier R, Jestin A. Biosafety of DNA vaccines: New generation of DNA
vectors and current knowledge on the fate of plasmids after injection. Vaccine 2010;28:3888-95.

Autres communications
Présentation orale au cours du conseil de filière porcine en France
- Dory D. "La vaccination à ADN plasmidique chez le porc". Ploufragan le 10 décembre 2010.
13. Inscription de kits de diagnostics au registre de l’OIE
i)
Avez-vous participé à des panels d’experts visant à valider des kits de diagnostic candidats
au registre de l’OIE ? Si oui, lesquels ?
Non
ii)
Avez-vous soumis à l’OIE la candidature de kits pour leur inscription au registre de l’OIE ?
Si oui, lesquels ?
Non
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