Bac S 2015 Nouvelle Calédonie Session de remplacement mars

Bac S 2015 Nouvelle Calédonie Session de remplacement mars 2016 http://labolycee.org
EXERCICE II – SÉPARATION D’ACIDES -AMINÉS PAR ÉLECTROPHORÈSE (6 points)
Les progrès de la chimie et de la biologie moléculaire sont étroitement liés à l’évolution
des techniques de séparation des constituants d’un mélange. Le XXe siècle a été une
période très féconde dans le domaine du développement de ces techniques, avec
notamment l’invention de méthodes de séparation basées sur la migration des
constituants d’un mélange sur un support, à des vitesses différentes.
Ainsi l’électrophorèse a été développée à partir de 1931 par le chimiste suédois
Arne Tiselius (Prix Nobel de chimie en 1948), dans le but de séparer les protéines du
sérum sanguin.
Dans cet exercice, on s’intéresse au principe de séparation des protéines par
électrophorèse.
À propos de la technique d’électrophorèse
La technique d’électrophorèse consiste à séparer les constituants d’un mélange de protéines déposé sur
un support horizontal (papier à acétate de cellulose, gel d’amidon ou d’agarose, etc.) en le soumettant à
un champ électrique
E
supposé uniforme. La séparation repose essentiellement sur les différences de
charge électrique et de taille des constituants du mélange.
Les constituants sont supposés immobiles avant que la tension ne soit appliquée.
Quelques fractions de seconde après le début de l’application du champ électrique, pour chaque
constituant du mélange, la force de frottement
f
, modélisée par
..f k Rv
, compense la force
électrique avec :
 k : constante positive caractéristique du constituant et du milieu où s’effectue la migration ;
 R : rayon de Stockes du constituant. Ce rayon est d’autant plus grand que le constituant est
volumineux ;
v
: vecteur vitesse du constituant.
1. Migration des constituants lors de l’électrophorèse
1.1. Justifier que le mouvement de la migration des constituants du mélange est rectiligne uniforme.
1.2. Montrer que la vitesse de migration d’un constituant de charge q est donnée par :
.
.
qE
vkR
.
1.3. Tous les constituants se déplacent-ils à la même vitesse ? Justifier.
On choisit une durée de 40 min pour réaliser l’électrophorèse. Pour un constituant tel que
k.R = 2,2×10–12 N.s.m-1 et portant une charge élémentaire q = 1,6×10–19 C placée dans un champ
électrique de valeur E = 7,5×102 V.m-1.
1.4. Calculer la durée nécessaire pour obtenir une migration de 10 cm. Conclure sur la durée choisie
initialement.
2. Séparation d’un mélange d’acides -aminés
On modélise un mélange, noté M, de protéines par une solution aqueuse de quatre acides -aminés : la
lysine, la glycine, l’acide aspartique et l’acide glutamique.
À partir des documents ci-après, représenter les domaines de prédominance des quatre acides -aminés
évoqués ci-dessus. À partir des réponses aux questions précédentes et des connaissances acquises,
associer à chaque tache obtenue lors de l’électrophorèse du mélange M, l’acide -aminé qui lui
correspond.
Le candidat est invité à prendre des initiatives et à présenter la démarche suivie même si elle n’a pas
abouti. La démarche suivie est évaluée et nécessite d’être correctement présentée.
Arne Tiselius

Protocole et résultats de l’électrophorèse du mélange M d’acides -aminés
 Le dispositif utilisé pour réaliser l’électrophorèse du mélange M est représenté ci-après.
 Le support de migration est une feuille de papier de type acétate de cellulose. Celui-ci est
imprégné d’une solution tampon de pH = 6,0.
 Quelques gouttes du mélange M sont déposées au centre de la feuille de papier, marqué d’une
croix (voir figure ci-dessus).
 Le générateur de tension, réglé sur la tension U = 150 V est mis en fonctionnement pendant
plusieurs heures. Il permet de produire le champ électrique
E
, supposé uniforme, dont la direction
et le sens sont représentés sur la figure ci-dessus.
 Le générateur est éteint puis on vaporise sur la feuille de papier, sous hotte, du réactif à la
ninhydrine lequel colore les acides -aminés afin de rendre visible leur position sur le papier après
migration.
 La feuille de papier fait apparaître alors quatre taches, notées A, B, C et D. Les taches C et D sont
seulement légèrement séparées. Chaque tache correspond à un des acides -aminés du
mélange. La feuille de papier est représentée ci-dessous :

Quelques données physico-chimiques concernat les acides -aminés
De par les propriétés acido-basiques de ses groupes fonctionnels, un acide -aminé peut se trouver sous
plusieurs formes acides ou basiques en solution aqueuse, chaque forme pouvant porter une charge totale
positive, négative ou nulle. Un acide -aminé est ainsi représenté par plusieurs couples acide/base.
Acide -aminé
Glycine
Lysine
Couple acide/base n°1
et pka
noté GLY+/GLY+ –
pKa1 = 2,3
noté LYS+ +/LYS+ + –
pKa1 = 2,2
Couple acide/base n°2
et pka
noté GLY+ –/GLY–
pKa2 = 9,6
noté LYS+ + –/LYS+ –
pKa2 = 9,0
Couple acide/base n°3
et pka
Aucun
noté LYS+ –/LYS–
pKa3 = 10,5
Acide -aminé
Acide aspartique
Acide glutamique
Couple
acide/base
n°1 et pka
Noté ASP+/ASP+ –
pKa1 = 2,2
Noté GLU+/GLU+ –
pKa1 = 2,2
Couple
acide/base
n°2 et pka
Noté ASP+ –/ASP+ – –
pKa2 = 3,9
Noté GLU+ –/GLU+ – –
pKa2 = 4,3
Couple
acide/base
n°3 et pka
Noté ASP+ – –/ASP– –
pKa3 = 9,8
Noté GLU+ – –/GLU– –
pKa3 = 10,5