in vitro - Development

J. Embryo/, exp. Morph., Vol. 14, Part 2, pp. 119-128, October 1965
Printed in Great Britain
Differentiation des epitheliums du tube digestif
in vitro
par
LUIS SORIANO 1
Institut d'Embryologie et Teratologie experimentales du College de France
et du C.N.R.S. (Directeur: Professeur Etienne Wolff)
AVEC TROIS PLANCHES
Nous avons demontre que l'epithelium de l'oesophage de l'embryon de Souris,
preleve a 12 jours de gestation et cultive in vitro, montre une differentiation
acceleree par rapport a celle observee dans le developpement normal (Soriano
et coll., 1964). Ces resultats ont ete obtenus en utilisant une modification de la
methode de Trowell (1954).
Nous nous sommes d'abord demandes si cette acceleration de la differenciation
etait due a l'utilisation d'une methode particuliere de culture, ou si elle etait
independante de la methode utilisee. Nous avons alors refait ces experiences
avec une autre methode (Wolff et Haffen, 1952) pour voir si on obtiendrait les
memes resultats.
D'autre part, nous avons fait des experiences de dissociation et reassociation
des ebauches embryonnaires a l'aide de la trypsine et de la hyaluronidase. Dans
une premiere partie, nous avons utilise les ebauches cesophagiques d'embryon
de Souris prelevees a 12 et 19 jours de gestation et celles de la trachee explantees
a 19 jours de gestation. Dans la deuxieme partie du travail, nous avons preleve
les ebauches du tube digestif d'embryon de Souris a differents stades du
developpement embryonnaire: a 16,15,14 et 13 jours de gestation. Nous avons
choisi les ebauches d'oesophage, celles de l'estomac anterieur et posterieur et de
l'intestin parce que les epitheliums de ces organes sont de types differents. Ainsi
l'epithelium d'oesophage montre les premiers signes de keratinisation apres
4 a 5 jours de culture, comme le fait d'ailleurs l'epithelium de l'estomac anterieur
(Wolfsberg, 1964). Par contre, l'epithelium de l'estomac posterieur et celui de
l'intestin montrent une structure cylindrique avec fonction secretoire, quand ils
sont cultives dans les memes conditions et pendant la meme periode. Done avec
ces deux groupes differents d'organes on peut realiser des associations heterologues, qui pourront nous permettre de savoir si la destinee originale d'un
epithelium a ete modifiee par le contact avec un mesenchyme etranger.
1
Adresse de Vauteur: Institut d'Embryologie et Teratologie experimentales du College de
France et du C.N.R.S., 49 bis Avenue de la Belle Gabrielle, Nogent-sur-Marne (Seine),
France.
120
L. SORIANO
MATERIEL ET METHODES
La dissociation des ebauches embryonnaires a ete faite a l'aide de la trypsine
(Trypsine Difco) a 2 % dans le Tyrode sans Ca ni Mg (Moscona, 1952) en ajoutant
encore 0,4 g de hyaluronidase (Zwilling, 1955). Les ebauches sont immergees
pendant 10 a 15 min. dans cette solution a 37° C. La dissociation est ensuite
poursuivie mecaniquement avec des pinces fines. Pour inactiver la trypsine, les
explants sont ensuite deposes dans un melange 1/1 de Tyrode et de serum de
Cheval.
Les ebauches sont cultivees pendant 5 a 12 jours selon la methode de culture
d'organes mise au point par Wolff et Haffen (1952). Le milieu est compose de:
Gelose a 1,5 % dans le liquide de Gey
Extrait embryonnaire
Serum de Cheval
7 parties
3 parties
2 parties
Les explants sont enveloppes dans la membrane vitelline de l'ceuf de Poule non
incube, selon une technique mise au point par Wolff (1960).
RESULTATS DE LA PREMIERE PARTIE
Developpement in vitro de Ve'bauche cesophagique
Apres 5 jours de culture les ebauches cesophagiques d'embryon de Souris de
12 jours de gestation, presentent un epithelium epaissi, c'est-a-dire forme de 3
ou 4 couches de cellules (Planche 1, Fig. A). Cet epaississement correspond au
debut de la keratinisation.
Experiences de dissociation et reassociation
La dissociation de l'cesophage preleve a 19 jours de gestation, et la reassociation
des fragments qui ensuite sont cultives pendant 5 jours, determine la keratinisation
de l'epithelium oesophagique (Planches 1, Fig. B et C).
L'association du mesenchyme de trachee de 19 jours de gestation avec l'epithelium d'cesophage du meme age, determine apres 7 a 12 jours de culture la
keratinisation de l'epithelium oesophagique (Planches 1 et 2, Fig. D, E, F et G).
L'association complexe du mesenchyme de trachee, mesenchyme d'oesophage
et epithelium oesophagique de 19 jours de gestation, determine aussi apres 7 jours
de culture, la keratinisation de l'epithelium oesophagique (Planche 2, Fig. H).
Le meme resultat est obtenu lorsque l'epithelium d'cesophage est cultive entre
deux fragments de trachee comme le montre la Figure I (Planche 2).
DISCUSSION DE LA PREMIERE PARTIE
L'acceleration de la differentiation de l'epithelium oesophagique observee
quand il est cultive avec la methode de Wolff et Haffen (1952), permet de supposer
qu'une telle acceleration ne depend pas de la methode de culture utilisee; en
/ . Embryol. cxp. Morph.
Vol. 14, Part 2
PLANCHE 1
FIG. A. CEsophage embryonnaire de Souris de 12 jours de gestation cultive pendant 5 jours.
Debut de la keratinisation. M: mesenchyme. E: epithelium pluristratifie. x 294.
FIG. B. CEsophage d'embryon de Souris de 19 jours de gestation au moment de l'explantation.
E: epithelium. M: mesenchyme. x371.
FIG. C. Reassociation de l'epithelium et du mesenchyme d'oesophage preleve a 19 jours de
gestation et cultives pendant 5 jours. Debut de la keratinisation. E: epithelium. M:
mesenchyme. x 126.
FIG. D. Trachee d'embryon de Souris de 19 jours de gestation au moment de l'explantation.
E: epithelium cylindrique et secretoire. M: mesenchyme sous-epithelial. C: cartilage.
Me: mesenchyme externe. x 294.
FIG. E. Trachee d'embryon de Souris de 19 jours de gestation, apres action de la trypsine.
On constate l'absence de l'epithelium. M: mesenchyme sous-epithelial. C: cartilage.
x294.
{Facing page 120)
LUIS SORIANO
Age des
explants
(en jours
de
gestation)
16eme
15eme
14eme
13eme
Negat.
15
Epith.
cylind.
3
10
4
Epith.
pluris.
Pluris. +
cylind.
Epith.
cylind.
—
As. Heter.
Mes.: Intestin.
Epith.: Est. ant.
As. Heter.: Association Heterologue
Mes.: Mesenchyme
Epith.: Epithelium
Kerat.: Keratinisation
Epith. cylind.: Epithelium cylindrique
Kerat.
10
As. He'te'r.
Mes.: Est.post.
Epith.: Oesophage
Negat.
—
TABLEAU 1
Negat.
2
Epith.
cylind.
1
Epith.
cylind.
—
Negat.
—
As. Heter.
Mes.: Est. ant.
Epith.: Intestin
Total
des
explants
etudies
36
20
27
20
103
Negat.: Negatifs (aucune differenciation de l'epithelium)
Epith. pluris.: Epithelium pluristratifie
Pluris. + cylind.: Epitheliums pluristratifie et cylindrique
Est. ant.: Estomac anterieur
Est. post.: Estomac posterieur
Kerat.
5
As. Heter.
Mes.: Intestin.
Epith.: Oesophage
s:
OS.
I
122
L. SORIANO
effet, il pourrait y avoir des facteurs inhibiteurs de la differenciation de l'epithelium
oesophagique pendant le developpement normal 'in vivo'. Nous avons deja
envisage cette possibility (Soriano et coll., 1964) et nous pensons maintenant
que cette interpretation est un peu plus valable. D'ailleurs Planel et coll. (1964)
ont trouve une acceleration semblable dans le cas particulier du vagin de Rat qui
acquiert in vitro en quelques jours seulement une structure de type adulte.
Les resultats presents ont demontre que l'association de l'epithelium oesophagique d'embryon de Souris de 19 jours de gestation, soit avec le mesenchyme de
trachee soit avec un fragment de la trachee, determine toujours la keratinisation
d'un tel epithelium, apres une periode variable de culture de 7 a 11 jours. Done
nous pouvons tirer comme premiere conclusion que l'epithelium d'oesophage est
TABLEAU 2
Age des
Explants
{en jours
de
gestation)
16eme
15eme
14eme
13eme
Temoin
Estomac
Anterieur
Kerat.
Epith.
cylind.
10
2
6
2
Temoin
Estomac
Posterieur
Epith.
pluris.
Epith.
cylind.
Negat.
Temoin
Intestin
Epith.
c. et sec.
Negat.
10
2
Kerat.: keratinisation
Epith. cylind.: epithelium cylindrique
Epith. pluris.: epithelium pluristratifie
Negat.: negatifs (aucune differenciation de l'epithelium)
Epith. c. et sec.: epithelium cylindrique et secretaire
Les chiffres correspondent au nombre d'explants etudies
deja determine quand il est preleve a ce stade-la et qu'il est associe dans differentes
conditions experimentales. Par consequent, la destinee de cet epithelium ne peut
pas Stre modifiee par 1'influence d'un mesenchyme etranger.
On doit se detnander si on peut preciser l'age de la determination embryonnaire de cet epithelium et d'autres epitheliums voisins par la methode de dissociation et reassociation des ebauches embryonnaires. En effet, differents auteurs
ont demontre largement que le mesenchyme embryonnaire exerce une influence
inductrice sur l'epithelium avec lequel il est en contact en culture organotypique;
e'est-a-dire le type de differenciation d'un epithelium peut etre change s'il est
associe a un mesenchyme heterologue, a condition que les ebauches soient
indeterminees quand elles sont prelevees (Sengel, 1958; McLoughlin, 1960,1961a
et b; Moscona, 1961; Sengel et Abbott, 1962; Sigot, 1962,1963).
Cette influence inductrice pourrait-elle se produire dans le cas de nos
experiences si nous utilisions des ebauches embryonnaires plus jeunes que celles
employees jusqu'a present ?
J. Embryol. c.xp. Aforph.
Vol. 14, Part 2
MTr
H
PLANCHE 2
FIG. F. Association heterologue entre le mesenchyme de trachee et l'epithelium d'oesophage
d'embryon de Souris de 19 jours de gestation, apres 7 jours de culture. E: epithelium
oesophagique pluristratifie. C: cartilage tracheen. x 196.
FIG. G. La meme association heterologue de la Figure F, apres 12 jours de culture. E:
epithelium oesophagique keratinise. C: cartilage tracheen. xl36.
FIG. H. Association heterologue entre le mesenchyme de trachee, le mesenchyme d'cesophage
et l'epithelium oesophagique preleves a 19 jours de gestation, et apres 7 jours de culture.
MTr: mesenchyme de trachee. MOe: mesenchyme d'oesophage. EOe: epithelium oesophagique pluristratifie. x 336.
FIG. 1. Culture de l'epithelium oesophagique preleve a 19 jours de gestation entre deux
fragments de trachee du meme age, cultive pendant 11 jours. LTr: lumiere de la trachee.
EOe: epithelium oesophagique keratinise. x 180.
LUIS SORIANO
(Facing page 122)
Vol. 14, Part 2
/ . Embryol. exp. Morph.
N
PLANCHE 3
FIG. J. Association heterologue entre le mesenchyme d'intestin et l'epithelium d'estomac
anterieur de 15 jours de gestation, apres 5 jours de culture. Differentiation d'un epithelium
pluristratifie. Ep: epithelium pluristratiffe. M: mesenchyme. x 300.
FIG. K. La meme association heterologue de la figure J, qui montre une cavite kystique. Lk:
lumiere du kyste. Ek: epithelium du kyste. M: mesenchyme. x 700.
FIG. L. Association heterologue entre le mesenchyme d'estomac anterieur et l'epithelium
d'intestin preleves a 14 jours de gestation, et cultives pendant une periode de 5 jours.
Differentiation d'un epithelium de type intestinal a cote d'un kyste. Lk: lumiere du kyste.
Ek: epithelium du kyste. M: mesenchyme. Ei: epithelium de type intestinal, x 177.
FIG. M. Association heterologue entre le foie et l'epithelium d'estomac anterieur d'embryon
de Souris de 13 jours de gestation, apres 5 jours de culture. Th: tissu hepatique. Ep:
epithelium pluristratifie. x 300.
FIG. N. Association heterologue entre le mesonephros d'embryon de Poulet de 8^ jours
d'incubation et l'epithelium d'estomac anterieur d'embryon de Souris de 13 jours de
gestation. Tr: tissu renal. Ep: epithelium pluristratifie'. x 200.
FIG. O. Association heterologue entre le poumon et l'epithelium d'estomac anterieur
d'embryon de Souris de 13 jours de gestation. Tp: tissu pulmonnaire. Ep: epithelium
pluristratifie. x 177.
LUIS SORTANO
{Facing page 123)
Differentiation des epitheliums du tube digestif
123
Pour repondre a cette question nous avons programme la deuxieme partie de
ce travail.
RESULTATS DE LA DEUXIEME PARTIE
Etant donne que le facteur * age des ebauches' etait fondamental d'apres notre
hypothese de depart, nous avons experimente a differents stades, en considerant
seulement dans ce chapitre les resultats qui concernent les associations heterologues (voir Tableau 1). Pour les resultats de la culture des explants temoins
voir le Tableau 2.
Experiences avec des ebauches prelevees a 16 jours de gestation
Mesenchyme d'estomac posterieur + epithelium d'cesophage
L'epithelium cesophagique se keratinise dans cette association heterologue
de la meme facon qu'il le fait avec son propre mesenchyme. II faut rappeler
que le mesenchyme de l'estomac posterieur est en contact normalement avec un
epithelium qui est cylindrique et secretoire.
Mesenchyme d'intestin + epithelium d'oesophage
L'epithelium cesophagique continue a se keratiniser dans cette association
comme il le fait normalement, meme quand il est associe avec le mesenchyme
d'intestin, qui doit assurer normalement la differenciation d'un epithelium
cylindrique et secretoire.
Experiences avec des ebauches prelevees a 15 jours de gestation
Mesenchyme d'intestin + epithelium d'estomac anterieur
Dans cette association l'epithelium d'estomac anterieur a remplace celui de
l'oesophage parce qu'il se keratinise in vitro exactement de la meme facon, tout
en etant plus resistant au traitement a la trypsine. En effet, l'epithelium oesophagique se montre tres fragile au stade de 15 jours de gestation, et il est difficile
d'obtenir sa differenciation in vitro avec un mesenchyme etranger.
D'une facon generale on observe la differenciation d'un epithelium pluristratifie qui correspond aux premiers stades de la keratinisation (Planche 3, Fig. J).
Dans certains cas on peut y voir l'apparition de cavites kystiques qui montrent
un epithelium qui est tout-a-fait different de celui de l'intestin (Planche 3, Fig. K).
Mesenchyme d'estomac anterieur + epithelium d'intestin
L'epithelium d'intestin qui est cylindrique et secretoire dans des conditions
normales de culture, montre aussi ces caracteristiques de differenciation quand
il est associe avec le mesenchyme de l'estomac anterieur qui assure normalement
la differenciation d'un epithelium keratinise.
124
L. SORIANO
Experiences avec des ebauches prelevees a 14 jours de gestation
Mesenchyme d'intestin + epithelium d'estomac anterieur
Vepithelium d'estomac anterieur montre une structure pluristratifi.ee (comme
normalement d'ailleurs) dans plusieurs cas. II y a aussi beaucoup de cas qui
montrent la structure kystique que nous avons vue tout-a-1'heure chez les
associations heterologues faites avec des ebauches plus avancees (15 jours de
gestation).
Mesenchyme d'estomac anterieur + epithelium d'intestin
Les resultats sont tout-a-fait semblables a ceux de la meme association
heterologue faite avec des ebauches de 16 jours de gestation. L'epithelium
d'intestin conserve les propres caracteristiques de differenciation qu'il a normalement. Cependant on peut y voir en plus l'epithelium cylindrique correspondant
aux memes cavites kystiques que nous avons vues dans les associations heterologues du mesenchyme d'intestin et de l'epithelium d'estomac anterieur de 14
et 15 jours de gestation (Planche 3, Fig. L).
Experiences avec des ebauches prelevees a 13 jours de gestation
Le travail experimental devient de plus en plus difficile au fur et a mesure que
nous reculons dans revolution embryonnaire, et les possibilites de succes sont
fort limitees a 13 jours de gestation (voir Tableau 1). Neanmoins, nous avons
pu cultiver dans des conditions tres favorables l'epithelium d'estomac anterieur
avec du foie et du poumon d'embryon de Souris du meme age, aussi bien qu'avec
du mesonephros d'embryon de Poulet de 8^ jours d'incubation. Toutes ces
associations ont permis d'ameliorer nettement la culture de l'epithelium
d'estomac anterieur qui apres 5 jours de culture montre la differenciation d'un
epithelium pluristratifie (Planche 3, Fig. M, N et O).
Mesenchyme d'intestin + epithelium d'estomac anterieur
Dans ces series, les resultats montrent un epithelium pluristratifie dans certains
cas, tandis qu'il y a d'autres cas qui sont negatifs, c'est-a-dire sans aucun signe
de differenciation de l'epithelium gastrique.
Mesenchyme d'estomac anterieur + epithelium d'intestin
Cette association heterologue a reussi d'une facon plus nette que 1'association
inverse du paragraphe precedent. En effet, dans tous les cas etudies, l'epithelium
a garde ses propres caracteristiques de differenciation comme il Pa fait d'ailleurs
chez les memes associations avec des ebauches plus agees (14 et 15 jours de
gestation).
DISCUSSION DE LA DEUXIEME PARTIE
Les resultats presentes permettent d'aborder le probleme de la determination
des tissus embryonnaires, en ce qui concerne le moment ou un epithelium devient
Differentiation des epitheliums du tube digestif
125
definitivement 'determine'. Nous avons essaye depreciser quel etaitcemoment
au moins pour certains epitheliums du tube digestif chez l'embryon de Souris.
D'ailleurs la differenciation de l'cesophage embryonnaire preleve chez la Souris
a 12 jours de gestation ne change pas meme quand il est cultive sur un milieu
synthetique ou seulement les acides amines essentiels, le glucose et les sels sont
presents (Soriano et Saxen, 1965).
Nous avons choisi la methode de dissociation et reassociation parce qu'elle
se montre tres efficace pour etudier la differenciation des tissus chez l'embryon
de Poulet: l'epiderme associe a des dermes de regions differentes, se differencie
selon l'induction fournie par le derme sous-jacent (Sengel, 1958; Sengel et
Abbott, 1962); l'epiderme associe a des mesenchymes de gesier, proventricule,
membre et cceur donne des structures qui dependent du type de mesenchyme
(McLoughlin, I960, 1961a et b). Cette methode a permis aussi a Sigot (1962,
1963) d'etudier la transformation de l'epithelium de gesier en epithelium de
proventricule et vice-versa.
L'ensemble de ces travaux montre d'une maniere incontestable comment un
epithelium embryonnaire peut changer son type de differenciation lorsqu'il est
cultive experimentalement avec des mesenchymes heterogenes. Mais les
epitheliums utilises par ces auteurs ne devaient pas etre 'determines' au moment
de 1'explantation, et cette 'indetermination' pourrait expliquer le changement
radical opere par ces tissus. Au contraire dans le cas de nos experiences, les
epitheliums ainsi que les mesenchymes utilises appartiennent a l'embryon de
Souris, chez la quelle la determination des tissus embryonnaires pourrait se
faire beaucoup plus tot (avant le 13eme jour de gestation). En effet, Golosow et
Grobstein (1962) ont fait des associations heterologues entre l'epithelium
pancreatique d'embryon de Souris de 12 jours de gestation, et differents
mesenchymes, et ont trouve que la cytodifferenciation pancreatique n'est pas
affectee qualitativement par les differents mesenchymes employes (glande
salivaire, mesonephros, estomac et poumon). Ce qui prouverait que la determination de l'epithelium pancreatique est deja realisee a ce stade de gestation, qui est
meme plus precoce que celui que nous avons utilise.
L'apparition de kystes sur les explants experimentaux ne peut s'expliquer que
comme resultat d'un artefact de culture. En effet, la distension due a la pression
du liquide interne determine l'aplatissement des epitheliums, et probablement
leur incapacite a donner des Epitheliums pluristratifies. D'ailleurs, on observe
souvent ce phenomene dans la culture d'organes.
Nous avons deja soupconne l'existence d'une determination precoce de
l'epithelium oesophagique (Soriano et coll., 1964) et nous pensons qu'avant la
differenciation morphologique des cellules, il existe peut-6tre, une differenciation chimique. Ce probleme a ete analyse par Grobstein (1964) qui a etudie le
facteur temps dans les relations entre les epitheliums en voie de differenciation
et les mesenchymes sous-jacents. II a demontre que, si dans l'association
heterologue entre l'epithelium pancreatique et le mesenchyme salivaire, on
126
L. SORIANO
preleve le mesenchyme avant la 30eme heure de culture, la differentiation de
l'epithelium pancreatique ne se poursuit pas, tandis que si la meme operation
s'efFectue a 48 heures de culture ou plus tard, la synthese des granules de zymogene
se produit normalement. De la 30eme a la 48eme heure de culture, l'epithelium
pancreatique ne montre aucun signe definitif de differentiation. Cependant un
changement critique a ete produit par l'influence du mesenchyme et qui se
manifeste, apres un certain temps, sous la forme de la cytodifferenciation. Tous
ces changements de proprietes qui precedent l'etat final de differentiation sont
appelles 'differentiation chimique ou cachee'.
Quel que soit le mecanisme, une conclusion assez certaine peut etre tiree de
l'ensemble des resultats presenter: d'une part il semble que chez les embryons de
rongeur la determination des tissus soit plus precoce que chez les embryons
d'oiseau; d'autre part, que cette periode de determination soit anterieure a 12 jours
de gestation, ce qui expliquerait la Constance des structures epitheliales sous
l'influence de mesenchymes varies.
RESUME
On a etudie la differentiation des epitheliums d'cesophage, d'intestin et
d'estomac anterieur d'embryon de Souris, preleves a differents stades de la
gestation, par la methode de dissociation et reassociation des tissus, en culture
in vitro.
1. L'epithelium d'cesophage montre les premiers signes de keratinisation
apres 5 jours de culture, quand il est preleve a 12 jours de gestation.
2. L'association de l'epithelium d'oesophage explante a 19 jours de gestation
avec du mesenchyme de trachee du meme age, determine toujours la keratinisation d'un tel epithelium.
3. Les associations heterologues entre l'epithelium d'estomac anterieur de 15,
14 et 13 jours de gestation avec des mesenchymes d'intestin des memes ages,
produisent toujours soit de la keratinisation soit de la formation d'un epithelium
pluristratifie. Des resultats tout-a-fait semblables ont ete trouves lorsque
l'epithelium d'estomac anterieur est associe avec du foie et du poumon d'embryon
de Souris, ou bien du mesonephros d'embryon de Poulet.
4. Les associations heterologues entre l'epithelium d'intestin de 15, 14 et 13
jours de gestation avec des mesenchymes d'estomac anterieur des memes ages,
determinent toujours la differentiation d'un epithelium cylindrique et secretaire,
tout-a-fait comparable a celui de l'intestin cultive dans des conditions normales.
II a ete conclu que la determination de certains epitheliums du tube digestif
chez l'embryon de Souris, se realise avant le 13eme jour de gestation. Cette
interpretation pourrait expliquer la persistance du type de differentiation d'un
epithelium, quand il est cultive dans des conditions experimentales tres differentes.
Differentiation des epitheliums du tube digestif
127
SUMMARY
The differentiation in vitro ofepithelia of the digestive tract
Oesophageal, intestinal, and anterior stomach epithelia from mouse embryos
of different ages were obtained by dissociation and re-association, and cultured
in vitro.
1. Oesophageal epithelium from 12-day embryos showed the first signs of
keratinization after 5 days in culture.
2. Oesophageal epithelium from 19-day embryos always keratinized when
cultured in association with trachael mesenchyme from embryos of the same age.
3. Heterologous associations of 15-, 14-, or 13-day anterior stomach epithelium
with intestinal mesenchyme of the same age always produced either keratinization
or a pluristratified epithelium. The same results were obtained when this
epithelium was associated with a mouse embryo liver, or lung, or even with chick
embryo mesonephros.
4. Heterologous association of intestinal epithelium from 15-, 14-, or 13-day
embryos with anterior stomach mesenchyme of the same age always leads to the
differentiation of a cylindrical and secreting epithelium quite comparable to
intestine cultured under normal conditions.
It is concluded that the determination of certain epithelia of the digestive tract
in the mouse embryo occurs before the 13th day of gestation. This would explain
the true-to-type differentiation of an epithelium when subjected to a strange
environment in culture.
REMERCIEMENTS
Ce travail a ete fait grace a l'aide d'une bourse du Consejo Nacional de
Investigaciones Cientificas y Tecnicas de la Republica Argentina.
L'auteur tient a exprimer sa reconnaissance au Professeur Etienne Wolff pour
l'hospitalite qu'il lui accorde dans son laboratoire et pour son encouragement
durant ces recherches; et a Mme J. Desveaux-Chabrol pour la preparation du
manuscrit.
BIBLIOGRAPHIE
N. & GROBSTEIN, C. (1962). Epitheliomesenchymal interaction in pancreatic
morphogenesis. DeviBiol. 4,242-55.
GROBSTEIN, C. (1964). Cytodifferentiation and its control. Science, N. Y. 143 (3607), 643-50.
MCLOUGHLIN, C. B. (1960). Mucous metaplasia of chick embryonic epidermis transplanted
onto gastric mesenchyme in tissue culture. Xe Congres International de Biologie
Cellulaire. 38-9. Paris.
MCLOUGHLIN, C. B. (1961a). Modifications of embryonic epidermal differentiation caused
by contact with stomachand heart mesenchyme in tissue culture. Path. Biol, Paris, 9
905-10.
MCLOUGHLIN, C. B. (19616). The importance of the mesenchymal factors in the differentiation
of chick epidermis. II. Modifications of epidermal differentiation by contact with
different types of mesenchyme. J. Embryol.exp. Morph. 9, 385—409.
9
GOLOSOW,
128
L. SORIANO
A. (1952). Cell suspensions from organ rudiments of chick embryo. Expl Cell
Res. 3, 535-9.
MOSCONA, A. (1961). Environmental factors in experimental studies on histogenesis and
differentiation. In: La Culture Organotypique. Colloques int. cent. natn. Rech. scient.
101,145-68
PLANEL, H., DAVID, J. F., DEMALES, N. & SOLEILHAVOUP, J. P. (1964). Action de l'ovaire, du
rein et de la glande surrenale sur l'epithelium vaginal cultive in vitro. C. r. Seanc. Soc.
Biol. 158,1598-1602.
SENGEL, PH. (1958). Recherches experimentales sur la differenciation des germes plumaires
et du pigment de la peau de l'embryon de Poulet en culture in vitro. Ann. Se. Nat. Zool.
lleme serie, 432-514.
SENGEL, PH. & ABBOTT, U. K. (1962). Comportement in vitro de l'epiderme et du derme
d'embryon de Poulet mutant 'scaleless' en association avec le derme et l'epiderme
d'embryon normal. C. r. hebd. Seanc. Acad. Sci., Paris, 255,1999-2000.
SIGOT, M. (1962). Sur le role du mesenchyme dans la differenciation des glandes du proventricule chez l'embryon de Poulet. C. r. hebd. Seanc. Acad. Sci., Paris, 254, 2439-41.
SIGOT, M. (1963). Induction de la formation de glycogene dans l'epithelium du proventricule
par le mesenchyme de gesier chez l'embryon de Poulet. C. r. hebd. Seanc. Acad. Sci.,
Paris, 256, 4970-1.
SORIANO, L., SAXEN, L., VAINIO, T. & TOIVONEN, S. (1964). The development of the oesophageal
and tracheobronchial epithelia 'in vitro'. Ada anat. 57,105-14.
SORIANO, L. & SAXEN, L. (1965). Culture d'ebauches de poumon et d'cesophage en milieu
synthetique. Acta path, microbiol. scand. 63, 23-7.
TROWELL, O. A. (1954). A modified technique for organ culture in vitro. Expl Cell Res. 6,
246-8.
WOLFF, ET. (1960). Sur une nouvelle modalite de la culture organotypique. C. r. hebd. Seanc.
Acad. Sci., Paris, 250, 3881-2.
WOLFF, ET. & HAFFEN, K. (1952). Sur une methode de culture d'organes embryonnaires in
vitro. Tex. Rep. Biol. Med. 10, 463-72.
WOLFSBERG, M. F. (1964). Cell population kinetics in the epithelium of the forestomach of
the mouse. Expl Cell Res. 35,119-31.
ZWILLING, E. (1955). Ectoderm-mesoderm relationship in the development of the chick
limb bud. /. exp. Zool. 128, 423-42.
MOSCONA,
(Manuscrit regu le 7 Avril 1965)