Projet DIASEA
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Département des Sciences des Denrées alimentaires - ULg - Faculté de Médecine vétérinaire Accueil 3/05/13 15:13 Risques microbiologiques Historique Recherche Enseignement Prestations Publications Personnel Liens Contacts Accès Evénements Unité pilote Retour Projet DIASEA: Détection immunologique et génétique des pathogànes des fruits de mer Les fruits de mer agissent comme des filtres de l'eau de mer et concentrent les microorganismes, les particules et les toxines. De plus, ces aliments sont généralement servis crus ou peu cuits ce qui facilite la persistance et la transmission de leurs contaminants. Enfin, la consommation de ces denrées alimentaires ne fait que croître et leur commerce est clairement mondial. Il en résulte que de nombreuses toxi-infections d'origine alimentaire sont provoquées par l'ingestion de ce type d'aliments et, donc, que des outils performants et rapides sont nécessaires pour le contrôle. Le nombre important de foyers épidémiques dans le monde, dus à la consommation de fruits de mer, indique que ceux-ci doivent faire l'objet d'une surveillance toute particulière. Les micro-organismes impliqués sont notamment des bactéries (Vibrio spp, Clostridium spp, Campylobacter spp, ...) et des virus (HAV, norovirus, ...). Les règlements européens CE N°853/2004, 854/2004 et 2073/2005 définissent des critères microbiologiques et toxicologiques pour la mise sur le marché de mollusques bivalves vivants. Cependant, faute de méthodes de diagnostics fiables, les virus ont été omis des exigences légales à ce stade. D'un point de vue technique, la détection des bactéries pathogènes est souvent longue et fastidieuse (préenrichissement, enrichissement, isolement, confirmation biochimique, ...). De plus, la sélectivité des milieux utilisés n'est pas parfaite et les confirmations biochimiques sont souvent délicates. Il est donc impératif de disposer de tests plus efficaces pour détecter les microorganismes les plus importants. C'est dans ce cadre que se pose le projet DIASEA qui vise au développement de nouveaux outils de diagnostic. Ces outils sont de trois types : La PCR en temps-réel : La stratégie est orientée vers un test en deux étapes. La première série de PCR détectera et quantifiera les microorganismes cibles. Pour chaque agent pathogène, les conditions spécifiques seront optimisées (amorces, sonde, cycles). La deuxième étape, dans le cas d'une réponse positive à la première, permettra, par le ciblage de gènes impliqués dans la virulence du micro-organisme, de déterminer si celui-ci présente un risque. Les puces à ADN Le développement d'une puce permettra de détecter, d'identifier et/ou de typer plusieurs organismes pathogènes en un seul test sensible, en un temps réduit et à moindre coût. La cytométrie de flux et l'immuno-enrichissement La cytométrie permettra de détecter, voire de trier les micro-organismes grâce à une réaction antigène-anticorps. Pour les bactéries, par exemple, la cytométrie autorisera le tri de microsphères ayant fixé le ou les micro-organismes recherchés. Il sera alors possible d'ensemencer ces billes sur un milieu sélectif spécifique afin de pouvoir réaliser les tests de confirmation et de détermination du pathotype. Promoteur Prof. Georges Daube (Département des denrées alimentaires, Faculté de Médecine Vétérinaire, Liège) Partenaires Laboratoire de Microbiologie des Denrées Alimentaires - Georges Daube Laboratoire d'Immunologie et de Vaccinologie - Alain Vanderplasschen Unité de Recherche en Biologie cellulaire - José Remacle Financement Région Walonne, subvention unité de recherche universitaire - Programmme "RESEAUX 2" Durée De mars 2005 à février 2008 http://www.dda.ulg.ac.be/pages/fr/rech07.php Page 1 sur 2 Département des Sciences des Denrées alimentaires - ULg - Faculté de Médecine vétérinaire 3/05/13 15:13 Contact Bernard Taminiau - Tél +32 (0) 4 366 42 26 Estimation quantitative et qualitative de la charge bactérienne des aliments par des méthodes génétiques Nous avons développé un système d'évaluation quantitative et qualitative de la flore bactérienne totale par PCR en temps réel qui permet la détection simultanée de 5 pathogènes (Escherichia coli entérohémorragique, Salmonella spp., Listeria monocytogenes, Staphylococcus aureus, Yersinia enterocolitica) De plus, la PCR en temps réel est utilisée pour quantifier la flore bactérienne totale ainsi que les Salmonelles dans la viande. Promoteur Prof. Georges Daube (Département des denrées alimentaires, Faculté de Médecine Vétérinaire, Liège) Financement Ministère des classes moyennes et de l'agriculture DG6 convention n°S 6050 Durée [ 01/01/2002 - 31/12/2003 ] Contact Bernard Taminiau - Tél +32 (0) 4 366 42 26 Validation and standardisation of diagnostic polymerase chain reaction for detection of foodborn pathogens L'objectif est de valider une méthode simple de purification de l'ADN, établir du matériel de référence (ADN, souches, …), développer des critères de validation des thermocycleurs, développer et valider des méthodes PCR pour 5 pathogènes (Yersinia enterocolitica, Listeria monocytogenes, Salmonella enterica spp ; EHEC) par l'organisation de tests interlaboratoires. Etablir de procédures simples pour l'utilisation de ces PCR par les utilisateurs non spécialistes. Proposer des normes européennes en matière de détection de bactéries pathogènes dans les aliments par PCR. Promoteur Prof. J. Hoorfar & Prof. G. DAUBE Collaboration Projet européen http://www.pcr.dk Financement UE action concertée n° QLK1-CT-1999-00226 Durée [ 01/03/2000 - 1/06/2003 ] Contact Bernard Taminiau - Tél +32 (0) 4 366 42 26 © 2009, ULg - Faculté de Médecine vétérinaire - Département des Sciences des Denrées alimentaires. All rights reserved - E-mail info http://www.dda.ulg.ac.be/pages/fr/rech07.php Page 2 sur 2
