Exercices sur les techniques chromatographiques

1
EXERCICES SUR LES TECHNIQUES CHROMATOGRAPHIQUES
Exercice'1'(5.1)'
'
Un mélange de deux composés A et B conduit après migration à deux taches aux
caractéristiques suivantes (distance de migration x et diamètre du spot w) :
xA ="27 mm wA ="2 mm
xB ="33 mm wB ="2,5 mm
La migration du front de solvant dans cette expérience est de 60 mm.
a)'Calculer R f ,#N et H pour chacun des composés.
b)'Calculer le facteur de résolution entre les deux composés A et B.
c)'Établir la relation entre le facteur de sélectivité et le R f des deux composés. Calculer sa
valeur numérique.
'
'
Exercice'2'(1.8)'
'
On veut déterminer par la méthode de normalisation interne la composition massique d’un
échantillon constitué de 4 esters de l’acide butanoïque. Une solution de référence de ces
quatre esters (concentrations massiques connues) conduit aux valeurs suivantes des
coefficients de réponse relatifs des butanoates de méthyle (ME), d’éthyle (EE) et de propyle
(PE) par rapport au butanoate de butyle (BE) :
kME/BE ="0,919 ; kEE/BE ="0,913 ; kPE/BE ="1,06.#
À partir des indications données, fournies par le chromatogramme de l’échantillon à doser,
trouver la composition massique de ce mélange.
Exercice 3 : Analyse H.P.L.C d'amines aromatiques :
Conditions
Column: Discovery C18, 15 cm x 4.6 mm, 5 µm particles
Mobile Phase: methanol/water (60:40)
Flow Rate: 1 mL/min
Temp: 30°C
Det: 254 nm UV
Inj: 10µL, 1 µg/mL each analyte

2
Analyte Data
1. Aniline
2. N-Ethylaniline
3. N-Propylaniline
4. N,N-Dimethylaniline
5. N-Butylaniline
6. N,N-Diethylaniline
A partir des chromatogrammes obtenus, déterminer quand cela est possible, la nature et la
concentration des composés présents dans l'échantillon.

3
Exercice 4 : Analyse HPLC d'antidépresseurs
On obtient le chromatogramme suivant pour une solution étalon contenant 13 antidépresseurs
à la même concentration de 20 mg/L.
Le premier pic correspond à une impureté contenue dans le solvant.
Un comprimé d'un médicament contenant deux antidépresseurs est dissout dans 250 mL
d'éluant puis injecté dans les mêmes conditions que l'étalon précédent.
On obtient le chromatogramme échantillon suivant.
- Quels"sont"les"deux"antidépresseurs"présents"?"
- Quelles"masses"un"comprimé"en"contient-il"?"

4
Exercice 5 :
On" désire" analyser" une" poudre" contenant" entre" autres" deux" substances" A" et" B."On" procède" de" la"
manière"suivante":"
Préparation"l'échantillon"à"analyser."
- On"prélève"1,015"g"de"poudre"qu'on"traite"par"extraction"liquide-solide."
- La"totalité"de"l'extrait"alcoolique"obtenu"est"transvasé"dans"une"fiole"jaugée"de"50"mL"et"on"
complète"à"50"mL"avec"de"l'alcool."On"obtient"ainsi"l'extrait"alcoolique"(E)."
- On"prélève"5"mL"de"cet"extrait"alcoolique"(E)"qu'on"introduit"dans"une"fiole"jaugée"de"100mL."
- On"ajoute"alors"5"mL"d'une"solution"de"la"substance"C"de"concentration"CC"="2"g/L"
- On"complète"à"100"mL"avec"de"l'eau"distillée."
- On"obtient"ainsi"la"solution"(S)"
On"injecte"la"solution"(S)"obtenue"en"HPLC"et"on"obtient"le"chromatogramme"échantillon."On"prépare"
ensuite"une"solution"étalon"en"introduisant"dans"une"fiole"jaugée"de"50"mL":""
10"mL"d'une"solution"de"la"substance"A"de"concentration"CA"="1"g/L,""
10"mL"d'une"solution"de"la"substance"B"de"concentration"CB"="2"g/L";""
2,5"mL"d'une"solution"de"la"substance"C"de"concentration"CC"="2"g/L"
On"complète"à"50"mL"avec"de"l'eau"distillée."Cette"solution"est"injectée"en"HPLC"et"on"obtient"le"
chromatogramme"Etalon."

5
QUESTIONS
1) Quel est l'intérêt d'ajouter la substance C pour tracer les chromatogrammes ?
2) Au vu des rapports d’analyse est-il nécessaire d’utiliser la méthode de l’étalon interne ?
3) Déterminer la concentration des substances A et B dans la solution (S).
4) Déterminer la concentration des substances A et B dans l'extrait alcoolique (E).
5) Déterminer les teneurs en A et B de la poudre initiale (on exprimera le résultat sous forme
de pourcentages en masse de A et B).
'
'
Exercice'6'(1.9):'
'
Dosage de la sérotonine S (5-hydroxytryptamine) par la méthode de l’étalon interne. On
prélève 1 mL de la solution à doser à laquelle on ajoute 1 mL d’une solution contenant 30 ng
de N-méthylsérotonine (NMS). On traite ce mélange pour le débarrasser d’autres composés
gênants. On opère par extraction en phase solide pour isoler la sérotonine et son dérivé
méthylé, dilués dans une phase convenable.
'
a)'Pourquoi ajoute-t-on le composé d’étalonnage interne avant l’étape d’extraction ?
b)'Calculer le facteur de réponse de la sérotonine par rapport à la N-méthylsérotonine sachant
que le chromatogramme d’étalonnage conduit aux résultats suivants :
– aire sérotonine 30 885 982 mV · s quantité injectée : 5 ng
– aire N-méthylsérotonine 30 956 727 mV · s quantité injectée : 5 ng
À partir du chromatogramme de la solution échantillon, trouver quelle est la concentration en
sérotonine dans l’échantillon de départ sachant que l’aire du pic sérotonine vaut 2 573 832
mV · s et l’aire du pic N-méthylsérotonine 1 719 818 mV · s.
'