2.5 Techniques d’étude au laboratoire :
L’identification des bactéries repose en grande partie sur l’étude des caractères
biochimiques . Ces caractères sont la traduction du métabolisme bactérien (notamment le
métabolisme glucidique) d’où
l’importance de son étude.
Etude de la voie d’attaque du glucose : On utilise les milieux Hugh et Leifson ou MEVAG
( en tube)pour déterminer si la bactérie fermente ou respire les sucres. Le principe général
de leur utilisation repose sur la production d’acides à partir des sucres ( en haut du tube car
présence d’oxygène pour la respiration , dans tout le tube en cas de fermentation). Ces
acides seront décelés par le changement de couleur d’un indicateur coloré de pH ( rouge de
phénol , bleu de bromothymol).
NB : La galerie API est également un outil utilisé pour déterminer cette voie d’attaque des
sucres , etude des fermentations (zymogramme sur API 20 E) , étude de l’assimilation des
sucres ( API 20 C AUX).
Milieu gélosé en boite permettant de visualiser la fermentation des sucres : Gélose lactosée
au BCP , Gélose DRIGALSKY , Gélose de CHAPMAN ….
Etudes particulières :
Utilisation de milieu complexe contenant plusieurs sucres (gélose kligler en tube
contenant du lactose et du glucose).
Recherche de l’utilisation du citrate sur gélose de citrate de Simmons ou galerie API
(présence du cycle de l’acide citrique = cycle de Krebs chez la bactérie).
Etude de la fermentation des acides mixtes et de la production de butane diol ( test
RM et VP).
Recherche de la Bgalactosidase par le test ONPG.
Comme ce test est particulièrement important , nous allons revoir le principe :
Une bactérie est capable d’assimiler lelactose (lactose+) si elle est capable de le faire entrer
(présence d’une B galactoside perméase) et si elle est capable de l’hydrolyser en glucose et
galactose (qui seront métabolisés selon les voies vues précédemment).