Milieux et tests courants
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Milieux et tests courants Milieux et tests courants GELOSE VIANDE-FOIE (VF) COMPOSITION : (pour 1L) Base Viande-Foie Glucose Agar 30,0g 2,0g 2,0g USAGE : Milieu conditionné en tubes longs et fins, régénéré avant utilisation : il se crée un gradient de concentration en oxygène entre la surface et le fond du tube Détermination du TYPE RESPIRATOIRE des micro-organismes. LECTURE : Observation Culture dans la zone aérobie Culture dans la zone anaérobie Culture dans les zones aérobie et anaérobie Culture dans la zone microaérophile Interprétation Culture seulement en présence d’O2 Culture en absence d’O2 Culture en présence et en absence d’O2 Culture en présence d’une pression en O2 réduite Conclusion Aérobie strict (AS) Anaérobie Strict (AnS) Aérobieanaérobie facultatif (AAF) Microaérophile Culture dans les zones aérobie et anaérobie et production de gaz Culture en présence et en absence d’O2 et production de gaz Aérobieanaérobie facultatif avec production de gaz Milieux et tests courants GELOSE VIANDE-FOIE NITRATEE (VFN) Observation VF VFN VF Interprétation Conclusion La souche testée est aérobie stricte et cultive en anaérobiose en présence de nitrates. On observe un dégagement d’azote. Nitrate réductase + Stade azote VFN La souche testée est aérobie stricte et ne cultive pas en anaérobiose en présence de nitrates. Nitrate réductase - Milieux et tests courants EAU PEPTONEE ORDINAIRE (EPO) Ce milieu est un milieu liquide qui permet la croissance des germes ne présentant pas d’exigences nutritives particulières. Il peut être utilisé pour la recherche de la production d’indole. COMPOSITION : (pour 1L) Peptones (exemptes d’indole) Chlorure de sodium 10,0g 5,0g LECTURE : Après ajout du réactif de Kovacs Observation Interprétation Conclusion Anneau rouge Présence d’indole dans le milieu Absence d’indole dans le milieu Anneau jaune Indole + Indole - Milieux et tests courants EAU PEPTONEE AU ROUGE DE PHENOL (EPO.RP) COMPOSITION : (pour 1L) Peptones (exemptes d’indole) Chlorure de sodium Rouge de phénol 10,0g 5,0g 1 mL LECTURE : Observation Tube rouge sans gaz sous la cloche Tube jaune sans gaz sous la cloche Tube jaune avec gaz sous la cloche Interprétation La bactérie n’a pas fermentée le glucide Absence de production de gaz La bactérie a fermentée le glucide Absence de production de gaz La bactérie a fermentée le glucide Production de gaz Conclusion Glucide – Gaz – Glucide + Gaz – Glucide + Gaz + Milieux et tests courants GELOSE COLUMBIA AU SANG DE MOUTON COMPOSITION : (pour 1L) Peptones Chlorure de sodium Amidon Agar 23,0g 5,0g 1,0g 10,0g LECTURE : Observation Interprétation Conclusion Colonie entourée d’un halo d’éclaircissement total à bord net La bactérie à dégradée, entièrement, de l’hémoglobine Hémolyse β Colonie entourée d’un halo d’éclaircissement partiel verdâtre à bord flou La bactérie à dégradée, partiellement, de l’hémoglobine Hémolyse α Couleur rouge inchangé autour des colonies La bactérie n’a pas dégradée de l’hémoglobine Hémolyse γ Milieux et tests courants RECHERCHE DE LA NITRATE REDUCTASE REACTIFS : Réactif de Griess : Nit 1 : Solution d’acide sulfanilique Nit 2 : Solution d’alphanaphtylamine Poudre de zinc LECTURE : Mode opératoire Observation Interprétation Conclusion Etape 1 : Ajout du réactif de Griess Coloration rouge Présence de nitrites NR+ Stade NO2- Coloration jaune Absence de nitrites Procéder à l’étape 2 Coloration rouge NO3- réduit en NO2- NR – Coloration jaune NO3- réduit en NO2- puis N2 NR+ Stade N2 Etape 2 : Ajout de poudre de zinc Milieux et tests courants TEST IMVIC I : Indole M : rouge de Méthyle V : Vosges-Proskauer (VP) « I : Inositol» C : Citrate LECTURE : Escherichia coli Citrobacter freudii Enterobacter aerogenes Enterobacter cloacae Klebsiella pneumoniae Klebsiella oxytoca Indole + RM + VP - Citrate - - + - + - - + + - - + + - - + + + - + + Milieux et tests courants GELOSE LACTOSEE AU BROMOCRESOL POURPRE (BCP) COMPOSITION : (pour 1L) Peptones Extrait de viande Lactose Bromocrésol pourpre Agar 5,0g 5,0g 10,0g 0,025g 11,0g LECTURE : Réalisation d’une lecture macroscopique Milieu jaune (Lact +) Milieu violet (Lact –) Milieux et tests courants HUGH ET LEIFSON ROLE : Détermination du type respiratoire Etude du mode de dégradation du glucose COMPOSITION : Peptones Extrait de viande Chlorure de sodium Glucose 1% Bleu de bromothymol (BBT) LECTURE : Observation Interprétation Conclusion Milieu jaune dans la zone aérobie seulement Le glucose est dégradé en présence d’O2 avec une faible production d’acide Milieu jaune dans les zones aérobie et anaérobie Le glucose est dégradé en présence ou en absence d’O2 avec une forte production d’acide Glucose dégradé par voie oxydative Glucose dégradé par fermentation Milieu resté vert ou devenu bleu dans la zone aérobie La bactérie cultive sans dégrader le glucose ou la bactérie cultive en dégradant les peptones en présence d’O2 avec alcalinisation du milieu Glucose non dégradé Milieux et tests courants CTA ROLE : Etude de la voie d’attaque des glucides Eventuellement, étude du type respiratoire et de la mobilité COMPOSITION : Tryptone L-Cystine Rouge de phénol Chlorure de sodium Sulfite de sodium Agar LECTURE : Observation Interprétation Conclusion Milieu jaune dans la zone aérobie seulement Acidification seulement en surface Milieu jaune dans les zones aérobie et anaérobie Acidification dans tout le tube Milieu jaune dans la zone anaérobie Milieu entièrement rouge Alcalinisation en surface Fermentation du glucide Milieu neutre en surface et acide en profondeur Fermentation du glucide Oxydation du glucide Respiration probablement AS Respiration AAF Respiration AnS Inerte vis-à-vis du glucide mais utilisation des peptones Milieux et tests courants TEST OXYDASE ROLE : Orientation des bactéries Gram – PRECAUTIONS : Ne pas prélever les colonies avec une oese métallique : risque de faux positif Ne pas prélever de colonie fortement colorée en bleu Prélever de préférence les colonies sur GN LECTURE : Observation Interprétation Conclusion Le dépôt se colore en bleu-violet Le réactif a été oxydé La bactérie possède une oxydase : Oxydase + Le dépôt reste incolore Le réactif n’est pas oxydé La bactérie ne possède pas d’oxydase : Oxydase – Milieux et tests courants TEST CATALASE ROLE : Orientation des bactéries Gram + PRECAUTIONS : Utiliser un ustensile de prélèvement neutre avec l’eau oxygénée pour éviter un faux positif Ne jamais prélever une colonie sur un milieu contenant du sang car l’hémoglobine a une activité peroxydasique LECTURE : Observation Interprétation Conclusion Dégagement gazeux H2O2 est décomposé La bactérie possède une catalase : Catalase + Absence de dégagement gazeux H2O2 n’est pas décomposé La bactérie ne possède pas de catalase : Catalase – Milieux et tests courants
