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Stage proposé par Rémi DUMOLLARD
UMR7009 Equipe Fertilization and Cell Cycle, Université Pierre et Marie Curie, Observatoire
Océanologique, 06 234 Villefranche sur Mer Cedex
Téléphone : 04 93 76 3777
Mail : [email protected]
Titre : Cycle cellulaire mitotique et morphogenèse de l’embryon
Projet de stage :
Les premières divisions cellulaires dans l'embryon sont rapides car composées uniquement de
phases S et de mitoses s’enchaînant sans pause. Le cycle cellulaire est ensuite ralenti puis il est alors
régulé indépendamment dans chaque lignage cellulaire. La prolifération cellulaire dans l'embryon
s'arrête ensuite transitoirement durant les processus d'induction des tissus embryonnaires puis
définitivement pour laisser place aux processus de différenciation cellulaire. Chaque blastomère de
l'embryon précoce exprime de nombreux marqueurs de cellules cancéreuses qui sont ensuite
réprimés au cours du développement. Malheureusement, les processus cellulaires régulant l'arrêt
progressif du cycle cellulaire lors du développement embryonnaire sont encore très mal connus.
Le but du projet est de comprendre le rôle des régulateurs du cycle cellulaire mitotique en
observant leur comportement dans un embryon en développement. L’étudiant utilisera une stratégie
d’observation in vivo du comportement intracellulaire de protéines marquées par des GFPs de
couleurs différentes. Les données recueillies lors de la réalisation de ce projet mettront en évidence
les mécanismes naturels mis en place par l’embryon pour contrôler une prolifération cellulaire
compatible avec la mise en place des différents tissus embryonnaires et l’établissement d’un têtard
nageant.
Techniques mises en œuvre par le stagiaire :
Clonage de gènes par PCR
Synthèse in vitro d’ARNm cappés codant pour des GFPs (Venus, YFP, GFP, RFP).
Imagerie de fluorescence conventionnelle, confocale et biphotons et imagerie de déconvolution.
Fécondation et culture d’embryons marins.
Micro injection d’œufs et embryons d’ascidie.
Remarque : l’hébergement est sur le site de la station marine et est pris en
charge par notre laboratoire
(cf http://www.obs-vlfr.fr/promo_oem/promo2008/htm_oemtv/tv_Vlfrspirit07.htm)
Publications du responsable de stage au cours des 5 dernières années :
Dumollard R., Hammar K., Porterfield M., Smith P. J., Cibert C., Rouvière C. and Sardet C. (2003)
Mitochondrial respiration and calcium waves are linked during fertilization and meiosis completion.
Development 130(4):683-692.
Dumollard R., McDougall A., Rouvière, C., Sardet, C., (2004a) Fertilisation calcium signals in the
ascidian egg. Biology of the Cell 96(1): 29-36.
Dumollard R., Marangos P., FitzHarris G., Swann K., Duchen M. and Carroll J. (2004b) Spermtriggered [Ca2+] oscillations and Ca2+ homeostasis in the mouse egg have an absolute requirement for
mitochondrial ATP production. Development. 131: 3057-3067.
Dupont G. and Dumollard R. (2004) Simulations of calcium waves in ascidian eggs: insights into the
origin of the pacemaker sites and the possible nature of the sperm factor. J. Cell Science 117:43134323.
Dumollard R, Duchen M. and Sardet C. (2006). Calcium signals and mitochondria at fertilisation.
Sem. Cell. Dev. Biol. 17(2):314-23.
Dumollard R, Duchen M. and Carroll J. (2007a). The role of mitochondrial function in the oocyte and
embryo. Curr. Top. Dev. Biol. 2007;77:21-49
Dumollard R, Ward Z, Carroll J.and Duchen M. (2007b). Regulation of redox metabolism in the
mouse oocyte and early embryo. Development 134(3):455-65
Dumollard R, Campbell K, Halet G, Carroll J, and Swann K. (2008). Regulation of cytosolic and
mitochondrial ATP levels in mouse eggs and zygotes. Developmental Biology.;316(2):431-40.