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UNIVERSITÉ DU QUÉBEC
MÉMOIRE PRÉSENTÉ À
L'UNIVERSITÉ DU QUÉBEC À TROIS-RIVIÈRES
COMME EXIGENCE PARTIELLE
DE LA MAÎTRISE EN BIOPHYSIQUE ET BIOLOGIE CELLULAIRES
PAR
VINCENT ROY
CARACTÉRISATION DE GÈNES CODANT
POUR DES PROTÉINES DE
SURFACE DE LA BACTÉRIE
ACTINOBACILLUS PLEUROPNEUMONIAE
À L'AIDE D'UN PROCÉDÉ D'INVASION DE CELLULES HELA
OCTOBRE 2006

Université du Québec à Trois-Rivières
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REMERCIEMENTS
Contrairement à la croyance populaire, les gens qui effectuent de la recherche sont
rarement seuls, isolés dans le sous-sol d'un bâtiment désaffecté. Je tiens à remercier les
gens avec lesquels
j'ai travaillé durant la réalisation de mes travaux de maîtrise; .
Le Dr. Marc Sirois
L'équipe du laboratoire: Valérie Ouellet, Jean-François Schmout, Kim Després,
Annet Lavallée et Karine De Carufel
Le Dr. Marc Beauregard et son équipe
Et finalement l'équipe du laboratoire du Dr. Éric Asselin
Merci à vous tous

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RÉSUMÉ
Actinobacillus pleuropneumoniae (App) est responsable de la pleuropneumonie porcine,
une infection respiratoire très contagieuse causant d'importantes pertes économiques
dans l'industrie du porc. L'infection par App est un processus qui implique plusieurs
facteurs de virulence agissant seuls ou, plus souvent, conjointement pour permettre
l'établissement de la bactérie chez son hôte naturel, le porc. Plusieurs de ces facteurs de
virulence sont toujours méconnus. Pratiquement tous les facteurs de virulence sont
localisés sur la surface de la membrane des bactéries ou sont sécrétés dans
l'environnement extracellulaire. Dans ce présent document, il est décrit l'utilisation
d'une technologie originale (basée sur la complémentation de l'invasine de Yersinia
pseudotuberculosis) afin
de mettre en évidence des gènes qui codent pour des protéines
de surface. Cette technologie est basée sur un procédé développé par Worley et al.
permettant de sélectionner les bactéries exprimant une protéine de surface, l'invasine.
300 clones invasifs ont ainsi été sélectionnés et des analyses des séquences d'ADN
d'App clonés ont ensuite été réalisées. Parmi ces clones,
41 ont été séquencés et ont été
comparés avec les séquences génomiques d'App des banques de données. Après
comparaison, plusieurs clones ont montré une homologie avec des lipoprotéines, des
protéines de la membrane externe et des transporteurs chez App et chez d'autres espèces
bactériennes. De plus, 5 clones comportent une séquence signal prédite par le logiciel
SignalP. Notre approche d'isolation de peptide signal fusionné avec l'invasine pourrait
aider à compléter les projets de séquençages de génomes bactériens déjà en cours.
Ensuite, il sera intéressant d'éclaircir le rôle que les protéines isolées peuvent avoir chez
App, et surtout de déterminer leur importance au niveau de la virulence de la bactérie.
L'identification et la caractérisation subséquente des gènes permettant l'exportation de
l'invasine pourraient avoir un impact important sur le développement de nouveaux
vaccins protégeant contre la pleuropneumonie porcine.
Mots clés: Actinobacillus pleuropneumoniae, facteurs de virulence, invasine, protéine
de membrane externe, peptide signal.

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IMPLICATION DES AUTEURS DANS L'ARTICLE SCIENTIFIQUE
J'ai réalisé l'ensemble
des travaux de laboratoire mentionnés dans ce document. J'ai
également procédé à la rédaction de l'article scientifique sous la supervision de mon
directeur de maîtrise, le Dr Marc Sirois.
Le Dr. Marc Sirois a été le directeur et superviseur des travaux de laboratoire et il a
également participé à la rédaction de l'article scientifique dans le but de le soumettre à la
revue «BMC Microbiology».
Des analyses bio-informatiques complémentaires des séquences obtenues ont été
réalisées par le Dr John Nash, un collaborateur d'Ottawa.