Activites cholinesterasiques dans le foie de Poulet

J. Embryo!, exp. Morph. Vol. 26, 3, pp. 481-495, 1971
Printed in Great Britain
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Activites cholinesterasiques dans le foie de Poulet
Role de Fendoderme dans l'apparition d'activites cholineste'rasiques
dans la composante mesenchymateuse du tissu hepatique
Par ELISABETH HOUSSAINT 1 ET NICOLE LE DOUARIN 1
Laboratoire d'Embryologie de la Faculte des Sciences de Nantes
SUMMARY
Cholinesterases in the chick liver. The role of the endoderm in the appearance of
the activity of cholinesterases in the hepatic mesenchyme
The histochemical method of Koelle & Friedenwald (1949), as modified by Gerebtzoff
(1953), has been used to investigate the distribution of cholinesterases in the chick embryonic
and adult liver. Non-specific cholinesterases and, in a lower proportion acetylcholinesterase,
have been detected in the endothelial cells of blood sinusoids of both adult and embryonic
hepatic tissue. The hepatocytes do not show any cholinesterase activity.
Cholinesterases appear precociously in the liver mesenchyme, since they already occur in
the septum transversum of the 3-day-old chick embryo.
An experimental procedure preventing the invasion of the hepatic mesenchymal Anlage
by the endodermic cords has been used. The experimentally isolated hepatic mesenchyme
shows an important cholinesterase activity; therefore this activity does not depend on the
presence of the hepatocytes.
The grafting of the determined hepatic endodern in the somatopleura of the 3-day-old
chick embryo results in the development of hepatic tissue in the body wall. In this experimentally produced liver, cholinesterase activities are present in the endothelial cells which
have arisen from somatopleura mesenchymal cells, though normally somatopleural mesenchyme does not possess these enzymes. The role of the endoderm in the appearance of this
enzymic activity in the somatopleural mesenchyme is discussed.
INTRODUCTION
L'existence d'activites cholinesterasiques dans le tissu hepatique des Vertebres
a ete signalee chez de nombreuses especes. Les recherches dans ce domaine ont
porte essentiellement sur le foie des Mammiferes chez lesquels la nature et la
localisation des activites observees sont variables. Ainsi, chez le Lapin, une
activite cholinesterasique non specifique a ete mise en evidence dans les hepatocytes, tandis que les cellules bordantes des sinusoides sanguins sont le siege d'une
activite acetylcholinesterasique (Ballantyne, 1966). Chez d'autres especes, les
cholinesterases ne sont presentes que dans les hepatocytes (Cobaye - Gerebtzoff,
1954; Souris - Bertrand, 1954), ou, au contraire, dans les cellules endotheliales
limitant les sinusoides (Chat - Koelle, 1951).
1
Adresse des auteurs: Laboratoire d'Embryologie, Faculte des Sciences, Universite de
Nantes, 38 boulevard Michelet, B.P. 1044, 44-Nantes, France.
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L'etude des esterases dans le foie d'embryon d'Oiseau n'a fait l'objet jusqu'a
present que de peu de travaux. Yoneda (1956) detecte une a-naphtyl-esterase
dans le foie de l'embryon de Poulet a partir du 6e jour de l'incubation, mais ne
precise pas la localisation de cette enzyme. Wilson, Mettler & Asmundson (1969)
isolent, par electrophorese, des esterases non specifiques et une petite quantite
d'acetylcholinesterase a partir de foie d'embryons de Poulet de 14-20 jours
d'incubation.
Nous avons entrepris de rechercher si une activite cholinesterasique pouvait
etre mise en evidence par des techniques histochimiques dans le foie de Poulet.
Les premiers resultats obtenus (Houssaint & Le Douarin, 1970) ont montre
qu'il existe dans le foie de Poulet une activite cholinesterasique limitee aux
cellules bordantes des sinusoides sanguins et n'affectant pas les cellules
parenchymateuses.
Le developpement du foie de l'embryon de Poulet implique revolution
simultanee de ses composantes mesodermique et endodermique. L'etude experimentale de l'organogenese hepatique (Le Douarin, 1964) a montre que la
differenciation des cellules endodermiques en hepatocytes se produit sous
l'influence d'une action inductrice du mesoderme sur le feuillet endodermique.
Cette induction comporte deux etapes essentielles, l'une precoce qui assure la
determination de l'endoderme hepatique {induction de determination), l'autre
plus tardive qui a lieu au moment de l'organogenese hepatique et qui stimule la
multiplication des cellules endodermiques et leur differenciation en hepatocytes
{induction de differenciation).
Un procede experimental simple permet d'isoler, in ovo, une partie de l'aire
presomptive du mesenchyme destine a entrer dans la constitution du foie. On
evite ainsi la colonisation du mesenchyme hepatique par les cordons d'hepatocytes d'origine endodermique. Un lobe de tissu mesenchymateux, dont la
structure histologique est celle d'un tissu hepatique depourvu de cellules parenchymateuses, se constitue. Le probleme se posait de savoir si le mesenchyme
hepatique se differencie, lorsqu'il est a l'etat isole, de la meme facon que lorsqu'il
se developpe conjointement avec les cordons endodermiques. Ce tissu acquiert-il
d'une maniere autonome une activite cholinesterasique ainsi que les proprietes
qui caracterisent le systeme reticulo-endothelial intrahepatique ?
L'induction exercee par le mesenchyme propre du foie sur l'endoderme
hepatique determine n'est pas rigoureusement specifique (Le Douarin, 1964;
Le Douarin & Chaumont, 1966; Le Douarin, Bussonnet & Chaumont, 1967).
L'endoderme hepatique greffe dans la somatopleure d'un embryon de Poulet
de 3 jours, y prolifere et s'y differencie en hepatocytes. Ainsi se developpe dans
la paroi ventrale de l'hote une masse de foie dont les hepatocytes proviennent du
greffon, tandis que l'endothelium des sinusoides sanguins derive du mesoderme
somatopleural de l'hote. Nous avons entrepris de rechercher si le mesoderme
de la somatopleure presente ou non une activite cholinesterasique et quelle est
l'influence exercee sur lui a cet egard par l'endoderme hepatique greffe.
Activites cholinesterasiques dans lefoie
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MATERIEL ET METHODES
Les experiences sont realisees sur des Poulets adultes et embryonnaires (Callus
gal/us) de la race Leghorn blanche.
(1) Technique de detection des cholinesterases
La detection des cholinesterases a ete realisee sur les tissus suivants: ebauche
hepatique embryonnaire de Poulet, foie de Poulets de 3-4 mois, mesenchyme
hepatique isole experimentalement, mesenchyme de la somatopleure d'embryons
de 3 jours, paroi abdominale d'embryons de 6 et 9 jours, foie obtenu dans la
paroi latero-ventrale du corps de l'embryon apres la greffe des bourgeons
hepatiques endodermiques.
Les pieces fixees au formol calcium de Baker a 4 °C pendant 1-2 h sont
coupees a congelation a —25 °C. Les coupes d'une epaisseur de 25 /im. sont
ensuite traitees en vue de la detection des cholinesterases par la methode de
Koelle & Friendenwald (1949) modifiee par GerebtzorT(1953). L'incubation des
coupes se fait a 37 °C, au pH 6,2, en presence d'iodure d'acetylthiocholine ou
d'iodure de butyrylthiocholine. Dans certains cas nous effectuons une coloration
de fond a 1'hematoxyline de Groat.
Afin de preciser la nature de l'activite enzymatique decelee, certaines coupes
sont incubees en presence de sulfate d'eserine 10~ 5 M. On sait qu'a cette concentration l'eserine inhibe les cholinesterases, mais reste sans effet sur les autres
esterases (Mendel & Gunter, 1946; Verne, 1954; Chessick, 1954).
D'autre part, certaines coupes ont ete traitees par une solution de DFP
(di-iso-propyl fluorophosphate) 10~7 M. Les solutions de DFP aux concentrations
10~c ou 10~7 M inhibent totalement les cholinesterases non specifiques, tandis
que Factivite acetylcholinesterasique n'est reduite que de 40% (Gomori, 1952;
Myers & Kemp, 1954).
(2) Jsoiement du mesenchyme hepatique
Chez l'embryon de Poulet de 9 a 15 somites, le territoire presomptif du foie
est constitue d'une aire endodermique localisee dans la levre anterieure de
1'ombilic intestinal et d'une aire mesodermique situee dans le repli cardiaque et
s'etendant de part et d'autre de l'axe somitique jusqu'au niveau presomptif ou
reel du 15e somite (Fig. 1 A). Vers le stade de 21 somites l'endoderme hepatique
donne naissance a un bourgeon a partir duquel des cordons de cellules epitheliales
proliferent et envahissent progressivement le mesenchyme du septum transversum
et les territoires mesodermiques Iateraux qui sont a l'origine des lobes droit et
gauche du foie. On peut isoler une partie de Taire presomptive du mesoderme
hepatique en excisant un fragment rectangulaire de l'aire laterale chez des
embryons de 9-13 somites au niveau des somites anterieures (Fig. IB). Les
cordons endodermiques sont arretes et n'envahissent pas le territoire mesenchymateux situe en arriere de la zone excisee. Celui-ci se developpe en formant
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dans la cavite coelomique une petite masse que Ton preleve a des stades du
developpement variant de 6 a 16 jours d'incubation.
B
Z.F.
Fig. 1. (A) Localisation des territoires hepatiques presomptifs endodermique et
mesodermique chez un embryon de Poulet de 15 somites represents sur la face
ventrale. Le mesoderme s'etend jusqu'au 15e somite sous forme de deux aires
laterales qui sont reunies ventralement au niveau du repli cardiaque. L'endoderme
est localise dans la levre anterieure de Pombilic intestinal, (p, Aire presomptive du
mesenchyme hepatique. gg, Endoderme hepatique. (B) Isolement du mesenchyme
hepatique. On excise un fragment rectangulaire de l'aire laterale (Z.exc.) d'un
embryon de 12 somites au niveau des somites anterieurs. Z.F. = zone ou le foie se
differencie; Z.M. = zone fournissant le mesenchyme hepatique seul. (D'apres Le
Douarin, 1964.)
(3) Formation de tissu hepatique dans laparoi duflanc d'un embryon hote
L'endoderme hepatique est isole a partir de la levre anterieure de l'ombilic
intestinal d'embryons de Poulet de 21-25 somites selon une technique deja
decrite (Le Douarin, 1964). II est ensuite greffe dans la somatopleure d'embryons
de Poulet de 2|-3 jours d'incubation (Fig. 2 A). II se forme dans la paroi lateroventrale du tronc de l'hote une masse de tissu hepatique (Fig. 2B) qui est prelevee
de 11-14 jours apres la greffe, puis traitee en vue de la detection des cholinesterases.
RESULTATS
(1) Activite cholinesterasique dufoie embryonnaire et adulte
Foie embryonnaire
Nos observations ont porte sur des embryons de 3|-18 jours d'incubation.
Les resultats obtenus montrent qu'il existe, dans le foie de l'embryon de Poulet,
une activite cholinesterasique decelable par la methode de Koelle & Friedenwald,
(1949) (Fig. 3).
Activites cholinesterasiques dans lefoie
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Chez les embryons de 3 | jours d'incubation le mesenchyme du septum transversum n'est que partiellement envahi par les cordons de cellules endodermiques
derivant des bourgeons hepatiques. L'activite cholinesterasique est limitee aux
cellules mesenchymateuses de l'ebauche hepatique, et n'existe pas dans les
cellules endodermiques.
Lorsque le foie provient d'embryons de 5-18 jours d'incubation, la localisation
de l'activite cholinesterasique est la meme qu'aux stades plus precoces. La
presence de cholinesterases est strictement limitee a l'endothelium des sinusoides
sanguins. A aucun stade du developpement embryonnaire nous n'avons pu
deceler d'activite cholinesterasique dans les cellules hepatiques. La localisation
de ractivite enzymatique est la meme avec les deux substrats: iodure d'acetyl-
Sp.
Fig. 2. Greffe de l'endoderme hepatique dans la somatopleure d'un embryon de 3
jours. (A) Coupe transversale de l'embryon hote montrant la position du greffon
(Gr.) dans la somatopleure (So.). A., aorte; Amu., amnios; Coel., coelome; Sp.,
splanchnopleure. (B) Foie forme par l'endoderme hepatique d'un embryon de 25
somites grefte dans la somatopleure d'un embryon de 3 jours, c.c, cartilage costal.
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E. HOUSSAINT ET N. LE DOUARIN
W*&$Mm$*>m
Activites cholinesterasiques dans lefoie
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thiocholine ou de butyrylthiocholine. Cependant la duree d'incubation necessaire pour obtenir une reaction d'intensite optimum est legerement plus courte
avec 1'iodure de butyrylthiocholine. De plus, elle diminue sensiblement, avec
les deux substrats, lorsqu'on s'adresse a du tissu hepatique provenant d'embryons
d'age croissant (Tableau 1).
Tableau 1. Temps optimum cTincubation a pH 6,2 apres fixation des pieces
pendant 2 heures auformol-calcium
Foie embryonnaire
Stade du
4 jours
prelevement.... d'incubation
Foie de
Poulets de
3a4mois
6-8 j .
10-12 j .
6h
4 h 30 min
3 h 30 min
3h
J h 30 min
5h
3 h 30 min
3h
2 h 30 min
1 h 30 min
Substrat
lodure d'acetylthiocholine
lodure de butyrylthiocholine
Foie de Poulet adulte
Nous avons pu deceler dans du foie de Poulets de 3-4 mois une activite
cholinesterasique limitee a l'endothelium des sinusoides sanguins; comme dans
le foie embryonnaire, les cellules parenchymateuses hepatiques en sont totalement depourvues. Une duree d'incubation de 1 h 30 min suffit pour que l'intensite
de la reaction soit satisfaisante quel que soit le substrat, apres une fixation de
2 h dans le formol-calcium.
(2) Activite cholinesterasique dans le mesenchyme hepatique
experimentalement isole
Le mesenchyme hepatique est preleve sur des embryons de 6-16 jours d'incubation, prealablement operes en vue de l'isolement d'une partie du territoire
presomptif du foie. La composante mesodermique du foie evoluant en 1'absence
d'hepatocytes est constituee de travees mesenchymateuses limitant de vastes
lacunes sanguines. Une activite enzymatique intense s'observe d'une maniere
FIGURE 3
Activite cholinesterasique du foie embryonnaire de Poulet. Quel que soit le stade
etudie, Pactivite est toujours localisee dans l'endothelium des sinusoides sanguins.
(A) Foie d'un embryon de 6 jours. Incubation pendant 4 h 30 min en presence
d'iodure d'acetylthiocholine. Coloration de fond a I'hematoxyline. (B) Foie d'un
embryon de 11 jours incube pendant 3 h dans I'iodure d'acetylthiocholine. (C) Foie
d'un embryon de 11 jours incube pendant 3 h dans I'iodure de butyrylthiocholine.
(D) Activite cholinesterasique du foie d'un embryon de 15 jours. Substrat: iodure
de butyrylthiocholine. Duree de l'incubation 3 h. (E) Activite cholinesterasique
du foie d'un embryon de 17 jours. Substrat: iodure d'acetylthiocholine. Duree de
l'incubation 3 h.
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homogene dans toutes les cellules constituant ce tissu. Pour une fixation de 2 h
au formol-calcium, la duree optimum d'incubation en presence d'iodure
d'acetylthiocholine est de 2 h lorsque le mesenchyme hepatique est preleve a
6 jours, et de 1 h lorsqu'il est preleve a 16 jours d'incubation (Fig. 4A, B). La
reaction est legerement plus rapide lorsque le substrat employe est l'iodure de
butyrylthiocholine.
j-, , .
(3) Emploi des inhibiteurs
Eserine
L'eserine a la concentration finale dans le substrat de 10~5 M inhibe fortement
l'hydrolyse enzymatique par les coupes de foies embryonnaire et adulte, ainsi
que de mesenchyme hepatique. Par consequent, une grande partie de l'activite
enzymatique decelee dans les cellules mesenchymateuses est due a la presence
dans ces cellules de cholinesterases et la participation des esterases banales est
relativement peu importante.
DFP
Les coupes de foie et de mesenchyme hepatique incubees en presence de
DFP a la concentration finale de 10~6 ou 10~7 M montrent une reaction positive
au niveau de toutes les cellules mesenchymateuses. Cependant la reaction est
beaucoup moins intense que pour les coupes temoins incubees en presence
d'iodure d'acetylthiocholine ou d'iodure de butyrylthiocholine sans traitement
prealable au DFP. Ceci nous permet de conclure qu'une partie de l'activite
cholinesterasique detectable dans la composante mesenchymateuse du foie de
l'embryon de Poulet est due a de l'acetylcholinesterase.
Ces resultats montrent que la composante mesenchymateuse du foie de Poulet
est le siege d'une activite acetylcholinesterasique et d'activites cholinesterasiques
non specifiques. Ces enzymes existent dans Pebauche mesodermique du foie des
le debut de l'organogenese hepatique. On les decele, en effet, dans le septum
transfersum avant qu'il ne soit envahi par les cordons de cellules endodermiques.
FIGURE 4
(A) et (B) Activite chol inesterasique dans le mesenchyme hepatique isole experimentalement. L'activite est presente dans toutes les cellules du mesenchyme. (A) Mesenchyme hepatique d'un embryon de 9 jours incube pendant 2 h en presence d'iodure
d'acetylthiocholine. Coloration de fond a l'hematoxyline. (B) Mesenchyme
hepatique d'un embryon de 16 jours incube pendant 1 h 30 min dans l'iodure
d'acetylthiocholine. Coloration de fond a l'hematoxyline.
(C)-(E). Activite cholinesterasique dans le foie forme par l'endoderme hepatique
d'un embryon de 27 somites greffe dans la somatopleure d'un embryon de 3 jours.
Le greffon a ete incube pendant 2 h dans l'iodure d'acetylthiocholine. Duree de la
greffe: 9 jours. (C) Le foie (F) est localise entre deux cartilages costaux (c.c.) et Ton
note une intense activite cholinesterasique dans les muscles (M) de la paroi du corps.
(D) Au niveau du foie, l'activite cholinesterasique est localisee dans les sinusoides
sanguins qui se sont formes a partir du mesenchyme (Mes.) somatopleural de Phote.
Le conjonctif banal qui entoure le greffon est depourvu d'activite cholinesterasique.
(E) Detail de (D).
Activites cholinesterasiques dans lefoie
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L'acquisition de ces activites enzymatiques, ainsi que la differentiation morphologique du mesenchyme hepatique peuvent s'effectuer en l'absence de l'endoderme et ne sont done pas sous la dependance d'une induction d'origine
endodermique.
Ces donnees etant etablies, il convenait de rechercher si une activite cholinesterasique existe dans le tissu hepatique forme dans des mesenchymes etrangers
a l'ebauche du foie. Nous nous sommes interessees particulierement au tissu
hepatique resultant de la greffe des bourgeons endodermiques du foie dans la
somatopleure de l'embryon de 3 jours d'incubation.
Dans une premiere etape, nous avons recherche si une activite cholinesterasique
existe normalement dans le mesoderme somatopleural a differents stades de son
developpement.
(4) Recherche des cholinesterases dans la paroi latero-ventrale de
Vembryon a differents stades du developpement
Embryons de 3-3\ jours d'Incubation
La paroi latero-ventrale de l'embryon est constitute a ce stade par une couche
ectodermique doublee du mesoderme somatopleural limitant la cavite coelomique. Aucune activite cholinesterasique ne peut etre decelee dans ces tissus
a ce stade du developpement.
Embryons de 6 et 9 jours d'incubation
La paroi mesodermique du flanc de l'embryon de 6 et 9 jours d'incubation
comprend divers tissus en voie de differentiation, en particulier des cartilages
costaux et des fibres musculaires. Ces dernieres sont le siege d'une activite
cholinesterasique intense, alors que le mesenchyme indifferencie demeure denue
de toute activite.
La greffe de l'endoderme hepatique dans le feuillet somatopleural (Fig. 2 A),
entraine le developpement de tissu hepatique dans le mesenchyme interne de
la paroi du flanc qui, dans le developpement normal, ne presente pas d'activite
cholinesterasique. Nous avons recherche l'influence exercee par la greffe de
l'endoderme hepatique sur les cellules mesenchymateuses tapissant les sinusoides
sanguins du foie qui se differencie dans ces conditions.
(5) Induction d'une activite cholinesterasique dans le mesenchyme de
la somatopleure par l'endoderme hepatique
La greffe d'endoderme hepatique dans la paroi latero-ventrale du flanc
entraine le developpement d'une vascularisation intense au niveau ou le greffon
se differencie. Ce dernier est preleve 6 et 11 jours apres l'implantation de
l'endoderme et traite en vue de la detection des cholinesterases selon la methode
utilisee pour le foie normal et le mesenchyme hepatique.
Le foie qui se differencie dans la paroi du corps presente une activite cholinesterasique dont la localisation, strictement limitee a 1'endothelium des sinu-
Activites cholinesterasiques dans lefoie
491
soides sanguins, est la meme que celle du foie normal. L'activite observee a
sensiblement la meme intensite que Ton utilise l'iodure d'acetylthiocholine ou
Piodure de butyrylthiocholine. La duree d'incubation optimum pour les deux
substrats est de 5 h a pH 6,2 lorsque la grefife est prolongee jusqu'a 11 jours et
legerement plus longue (7 h) lorsque le foie est preleve 6 jours apres l'implantation
de Pendoderme. Le lobe de foie qui se constitue dans la somatopleure fait
generalement hernie dans la cavite generale car il se developpe toujours dans la
partie la plus interne de la paroi du corps. Le tissu hepatique est entoure d'un
conjonctif banal depourvu d'activite cholinesterasique (Fig. 4C-E).
CONCLUSIONS ET DISCUSSION
Le foie du Poulet embryonnaire et adulte presente une activite cholinesterasique
strictement localisee dans la paroi des sinusoides sanguins qui l'irriguent.
Aucune activite cholinesterasique n'a en efTet pu etre decelee par la technique
histochimique dans les hepatocytes a quelque stade que ce soit. L'emploi de
certains inhibiteurs des cholinesterases tels que l'eserine a la concentration de
10 5 M et le DFP a la concentration de 10~6 et lCh7 M permet de considerer que
ces activites sont dues essentiellement a des cholinesterases non specifiques et
aussi, dans une moindre proportion, a des acetylcholinesterases.
La composante mesodermique du foie acquiert une activite cholinesterasique
a un stade precoce du developpement embryonnaire, puisqu'il est possible de
deceler cette activite au cours du 3e jour de Pincubation dans le septum transversum qui n'est encore que partiellement envahi par les cordons d'hepatocytes
d'origine endodermique.
L'isolement experimental du mesenchyme hepatique permet de voir que
Pactivite cholinesterasique apparait et evolue dans ce tissu independamment de
la presence des cellules parenchymateuses du foie. II convient done d'exclure
toute influence inductrice de Pendoderme en ce qui concerne cet aspect de la
dirTerenciation de la trame conjonctive du foie au cours du developpement
normal de ce tissu.
On peut s'interroger quant a Pimportance physiologique des cholinesterases
decelees dans le tissu hepatique. Le role de ces enzymes, mises en evidence par
divers auteurs dans le foie des Mammiferes adultes est mal connu et a donne
lieu a diverses hypotheses. Lorsque ces enzymes sont presentes dans la composante mesenchymateuse du foie, il est interessant de relier leur existence au
fonctionnement du systeme reticulo-endothelial intrahepatique. Des cholinesterases ont en effet ete mises en evidence dans divers elements du systeme
reticulo-endothelial. Ainsi, Ballantyne (1966, 1968) decelechezle Lapin la presence d'acetylcholinesterase dans les cellules de Kuppfer du foie et dans Pendothelium des capillaires folliculaires de la rate, tandis que Pensemble des cellules
endotheliales de la rate est le siege d'activites esterasiques. Selon cet auteur, ces
enzymes pourraient etre impliquees dans la degradation d'esters de choline,
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E. HOUSSAINT ET N. LE D0UAR1N
ainsi que d'autres esters. On peut envisager que les cholinesterases localisees
dans le systeme reticulo-endothelial du foie de Poulet embryonnaire et adulte
sont liees a l'activite phagocytaire et aux proprietes de detoxication de ces
cellules. De nombreux auteurs ont en effet montre, en injectant des particules
de carbone dans la circulation de l'embryon, que le foie puis plus tard la rate
manifestent une activite phagocytaire importante(Nicole/ al. 1962; Mizejewski
& Ramm, 1969). L'injection d'encre de chine diluee dans la circulation d'embryons de Poulet de 10, 12 et 14 jours sur lesquels une partie du mesenchyme
hepatique a ete experimentalement isole (Fig. 1B), permet de constater qu'une
activite phagocytaire intense est acquise par ce tissu, qu'il soit ou non colonise
par l'endoderme hepatique. Deux heures apres l'injection, on constate en efFet
a la dissection de l'embryon que le foie normal et le mesenchyme hepatique ont
fixe une grande quantite de granules noirs d'encre de chine (Le Douarin, non
publie). Les capacites phagocytaires qui sont particulierement importantes dans
l'endothelium hepatique sont toutefois repandues dans d'autres regions du
mesenchyme embryonnaire (Mizejewski & Ramm, 1969) et l'existence de larges
sinusoides sanguins parait favoriser cette fonction dans certaines ebauches.
Les experiences rapportees ci-dessus montrent que le mesenchyme de la
somatopleure de l'embryon de Poulet ne presente aucune activite cholinesterasique, sauf toutefois dans les zones musculaires en voie de differenciation.
Ce mesenchyme est favorable a revolution de l'endoderme hepatique determine
comme Test aussi le mesenchyme de la splanchnopleure. Par contre, le mesoderme
axial, ainsi que celui du bourgeon de membre inhibent totalement revolution de
l'endoderme hepatique qui, a leur contact, peut survivre mais ne fournit qu'une
vesicule epitheliale a paroi indifferenciee (Le Douarin, 1964; Le Douarin et al.
1967; Le Douarin, 1967). Le mesenchyme de la somatopleure, au contraire,
stimule la proliferation et la differenciation de l'endoderme hepatique qui donne
naissance a des cordons d'hepatocytes capables, en particulier, d'accumuler du
glycogene et de secreter de la bile. Une irrigation importante s'installe dans la
paroi du corps au niveau du greffon et le mesenchyme somatopleural qui se
trouve au contact des cordons d'hepatocytes s'organise pour former l'endothelium des sinusoides sanguins du foie ainsi forme. II est possible de realiser
une association heterospeciflque du mesenchyme somatopleural et de l'endoderme hepatique: lorsqu'on greffe l'endoderme hepatique de Poulet dans la
somatopleure d'un embryon de Caille de 3 jours d'incubation, on observe en
effet le developpement d'un lobe de foie dans la paroi latero-ventrale de l'hote
comme dans l'experience de greffe homospeciflque precedemment decrite (Le
Douarin et al. 1967). La possibilite de reconnaitre sur des coupes histologiques
traitees par la methode de Feulgen, les cellules de Caille des cellules de Poulet
(Le Douarin, 1969a; Le Douarin & Barq, 1969) permet de voir que l'endothelium des sinusoides sanguins du foie experimentalement obtenu dans la paroi
du corps est exclusivement forme par le mesenchyme somatopleural de l'hote
(Le Douarin & Houssaint, non publie). L'apparition d'activites cholinestera-
Activites cholinesterasiques dans lefoie
493
siqu.es dans Fendothelium du tissu hepatique qui se differencie dans un mesenchyme heterologue pose de nombreux problemes. Au point ou en sont nos
experiences nous pouvons considerer que l'apparition de cette activite enzymatique est provoquee par la presence de rendoderme hepatique qui se differencie
en hepatocytes. II convient de remarquer a cet egard que le mesenchyme propre
du foie, qui est capable de s'individualiser du mesoderme splanchnique et de
s'autodifferencier morphologiquement, acquiert une activite cholinesterasique
independamment de la presence de l'endoderme. L'endoderme hepatique parait
done presenter a l'egard du mesenchyme des proprietes inductrices dont la mise
en oeuvre n'est pas indispensable dans le developpement normal du foie. On
peut remarquer, a cet egard, que le mesenchyme hepatique presente des caracteres communs avec le mesenchyme splenique puisqu'ils sont capables l'un et
l'autre d'acquerir spontanement une activite cholinesterasique des un stade
precoce du developpement. Une telle activite a en efTet pu etre decelee dans la
rate embryonnaire de Poulet des le 8e jour de l'incubation (Houssaint, non
publie).
Dans un travail anterieur (Le Douarin et al. 1967; Le Douarin, 19696)
nous avons attire Fattention sur les capacites inductrices de l'endoderme a
Tegard des mesenchymes heterologues favorables auxquels il est experimentalement associe. En effet rendoderme ventral de l'intestin anterieur de Fembryon
de Poulet de 15 a 25 somites est constitue de populations cellulaires distinctes
deja determinees. Ainsi, lorsque cet endoderme est associe a la somatopleure
d'un embryon de 3 jouis, il se differencie en tissus thyroidien, thymique,
hepatique, pancreatique, ainsi qu'en proventricule, gesier et intestin. Le mesenchyme somatopleural participe a la formation de ces organes et, sous Finfluence
de l'endoderme, il donne naissance a la paroi musculaire du gesier ou de l'intestin
aussi bien qu'a la trame conjonctive des divers organes glandulaires qui se
differencient.
En ce qui concerne la differenciation de tissu hepatique dans la somatopleure,
il serait interessant de rechercher si la greffe d'endoderme hepatique confere
aux cellules endotheliales qui sont au contact des hepatocytes, Fimportante
activite phagocytaire observee dans le mesenchyme hepatique normal. On peut
se demander d'autre part si Finduction par l'endoderme d'une activite cholinesterasique dans le mesenchyme somatopleural, pourrait s'exercer en culture en
Fabsence de toute circulation sanguine.
Enfin, pour controler la validite des hypotheses avancees quant au rapport
existant entre les activites cholinesterasiques et les proprietes de phagocytose et
de detoxication de certains endotheliums vasculaires, il conviendrait de voir si
Factivite phagocytaire, repandue dans de nombreuses ebauches embryonnaires
(coeur, mesonephros, poumon, etc.; Mizejewski & Ramm, 1969), s'accompagne
de la presence d'activites cholinesterasiques decelables.
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E. HOUSSAINT ET N. LE D O U A R I N
RESUME
Le foie de Poulet embryonnaire et adulte, presente une activite cholinesterasique localisee
dans les cellules endotheliales des sinusoides sanguins et n'afFectant pas les cellules hepatiques.
Cette activite est mise en evidence par la technique histochimique de Koelle et Friedenwald
(1949) modifiee par Gerebtzoff (1953). L'activite decelee est due a des cholinesterases non
specifiques et, dans une moindre proportion a une acetylcholinesterase.
L'activite cholinesterasique apparait tres precocement dans l'ebauche mesenchymateuse du
foie puisqu'on peut la mettre en evidence dans le septum transversum au cours du 3eme jour
de l'incubation.
Le mesenchyme hepatique experimentalement isole presente une activite cholinesterasique
importante. Celle-ci apparait done dans la composante mesenchymateuse du foie meme
lorsqu'elle n'est pas colonisee par les cordons de cellules endodermiques.
La greffe de l'endoderme hepatique determine dans la somatopleure d'embryons de Poulet
de 3 jours provoque le developpement dans la paroi du corps d'une masse de foie dont les
cellules parenchymateuses derivent du greffon et les cellules endotheliales proviennent du
mesoderme somatopleural. Les cellules mesodermiques qui setrouventau contact des hepatocytes et qui par consequent collaborent a la formation du tissu hepatique, acquierent une
activite cholinesterasique, alors qu'au cours de leur evolution normale elles en demeurent
depourvues.
Le role de l'endoderme hepatique dans l'acquisition d'une activite cholinesterasique par le
mesenchyme somatopleural est discute.
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