Identification bactérienne: Cocci Gram Positif
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11/11/2016 Identification bactérienne: Cocci Gram Positif Bile-esculine • Identification des enterococcus • Esculine esculitine + glucose (esculitine + Fe citrate ferrique (brun foncé)) • Milieu sélectif – De la bile est ajoutée afin d’inhiber les bactéries gram + – Enterococci peuvent survivre Bile-esculine - + 1 11/11/2016 Sensibilité à la novobiocine • Test Kirby Bauer • Capable de différencier S. saprophyticus des autres staphylococci • S. saprophyticus est le seul staphylococcus résistant Mannitol + sel d’agar • Haute salinité (7.5%) : enrichie les staphylococcus • Indicateur : phénol rouge • Sources de carbone : mannitol et protéines • Détecte la fermentation du mannitol – Mannitol formation d’acide Mannitol + sel d’agar A) B) C) D) Positif – fermentation du mannitol Négatif – fermentation du mannitol Positif – fermentation du mannitol Pas de croissance 2 11/11/2016 Gélose d’agar Baird Parker/Tellurite • Milieu sélectif: – Chlorure de lithium – Solution 1% de tellurite de potassium • Milieu différentiel: – Jaune d’oeuf : lécithinase (clair) – Tellurite de potassium : coagulase-positif (noircissant) Gélose d’agar Baird Parker/Tellurite Test PYR • Enzyme détectée : pyrrolidonyl peptidase – L-pyrrolidonyl-β-napthylamide (PYR) acide carboxylique L-pyrrolidone + β-napthylamine • Réactions de détection: – β-napthylamine + p-diméthyleaminocinnamaldéhyde précipité rose 3 11/11/2016 Test PYR - + Aggrégation cellulaire des Cocci Gram Positifs Micrococcus & Streptococcus Streptococcus Micrococcus Staphylococcus -l’agrégation peut être utilisée pour faire la distinction entre certains genres bactériens Diagnostique des bactéries d’importance médicale 4 11/11/2016 Utilisation de la clef d’identification http://mysite.science.uottawa.ca/jbasso/microl ab/IDFlowcharts.pdf Diagnostic : Cocci Gram positif Streptococcaceae Catalase - Aérobie & anaérobie facultatif Micrococcaceae Catalase + Aérobie Cocci Gram Positifs Streptococcus Micrococcus Staphylococcus Caractéristiques des Cocci Gram Positifs • Tous sont non sporulants • Principalement retrouvés parmi la flore naturelle des humains et des animaux • Exigences nutrionelles fastidieuses – Utilisent des sources de carbones simples 5 11/11/2016 Les Cocci Gram Positifs d’importance médicale • Micrococcaceae – Staphylococcus aureus • Cause plusieurs types d’infections, maladies alimentaires et chocs toxiques – Staphylococcus epidermidis • Cause des infections opportunistes – Staphylococcus saprophyticus • Cause la majorité des cystites chez les femmes Les Cocci Gram Positifs d’importance médicale • Streptococcaceae – Streptococcus pyogenes • Pharyngite (strep throat) et infection à bactérie mangeuse de chair – Streptococcus agalactiae • Infections génitales – Streptococcus mutans • Endocardites – Streptococcus pneumonia • Otite, meningite et pneumonie – Enterococcus spp. • Infections opportunistes Diagnostic : Bacilles Gram positif Aérobie et aérobie facultatif Bacillus Anaérobie stricte Clostridium Aérobie Listeria Sporulants Bacilles Gram Positifs Non-sporulants 6 11/11/2016 Morphologies des endospores • Position: – Terminale (a, d, e) – Subterminale (b) – Centrale (c, f). • Forme: – Circulaire (b, d) – Ellipsoïde (a, c, e, f) • Diamètre: – Non déformant (a, b, c) – Déformant (d, e, f). Les bacilles d’importance médicale • Bacillus – Majoritairement inofensifs – Quelques espèces opportunistes • Bacillus cereus & Bacillus subtilis – Empoisonement alimentaire – Une espèce pathogène • Bacillus anthracis – Anthrax Aérobie et aérobie facultatif Bacillus Anaérobie stricte Clostridium Aérobie Listeria Sporulants Bacilles Gram Positifs Non-sporulants Les bacilles d’importance médicale • Clostridium – Plusieurs espèces pathogènes • Clostridium perfringens – Gangrène gazeuse • Clostridium tetani – Tétanos • Clostridium botulinum – Botulisme • Clostridium difficile prolonged contraction of skeletal muscle fibers, neurotoxin produced by the bacteria Canned food that has not been sterilized properly; paralytic illness – Diarrhée 7 11/11/2016 Diagnostic : Bactéries à Gram (-) Neisseriaceae Pseudomonaceae Neisseriaceae Fermentation du glucose Pseudomonaceae Oxydase Enterobacter Escherichia Klebsiella Fermentation du lactose McConkey Enterobacteriaceae Serratia Proteus Salmonella Shigella Morganella Bactérie à Gram (-) représentatives • Cocci Gram (-) – Neisseria gonorrhoea – Neisseria meningitis • Bacilles Gram (-) – Famille Enterobacteriaceae • Escherichia, Enterobacter, Salmonella, Shigella, Klebsiella, Proteus, Morganella – Famille Pseudomonaceae • Pseudomonas Immunologie 8 11/11/2016 Immunologie • But du système immunitaire: – Distinguer ce qui est le soi du non-soi • Le non-soi – Les antigènes • Immunité: – Tous les mécanismes utilisés par l’hôte pour se protéger et combattre le non-soi Non-soi - les antigènes • Tout composé qui peut réagir avec les participants du système immunitaire – Ex. anticorps • Épitope: Caractéristique de l’antigène qui permet la reconnaissance comme étant nonsoi – Ex. Lipides, protéines, lipopolysaccharides L’antigène Épitopes Virus=Antigène 9 11/11/2016 Diagnostic sérologique/immunologique • Déterminer la présence d’un antigène : • Un organisme • Une protéine • Une toxine • Un anticorps – Dosage par la méthode d’ELISA – Immunochromatographie (test rapide) ELISA • Utilisé pour déceler la présence d’anticorps ou d’antigènes – Très sensible – Quantitatif – Rapide ELISA – Détection d’Antigène Sérum (source d’Ag) est ajouté à des puits de plastique Agent bloquant est ajouté Ac contre Ag est ajouté Lavage Ac détecteur est ajouté Lavage Substrat est ajouté Antigène Présent Antigène Absent ENZ ENZ ENZ ENZ ENZ ENZ ENZ ENZ 30 10 11/11/2016 ELISA – Détection d’Anticorps Ag cible pour Ac à déceler ajouté aux puits Agent bloquant est ajouté Sérum à tester est ajouté Lavage Ac détecteur est ajouté Lavage Substrat est ajouté Ac Présent Ac Absent ENZ ENZ ENZ ENZ ENZ ENZ ENZ ENZ 31 Interprétation des Résultats Essai pour Ag de virus X Dilutions Standard Patient 1 Patient 2 Patient 3 Témoin nég. 1/2 1/4 1/8 1/16 1/32 3.8 1.9 0.8 0.4 0.2 0.1 0.04 0.03 0.1 0.05 0.03 0.03 0.03 0.03 0.03 0.03 0.8 0.4 0.2 0.1 0.05 0.03 0.03 0.03 3.6 3.0 1.6 0.8 0.4 0.2 0.1 0.05 0.12 0.06 0.03 0.03 0.03 0.03 0.03 0.03 Plaque d’ELISA 1/64 1/128 1/256 Lectures d’absorbances Conclusions: Patient 1 n’est pas infecté Patients 2 & 3 sont infectés Patient 3 possède une charge 8X plus élevée de l’Ag 32 Interprétation des Résultats Essai pour Ac contre virus X Dilutions Standard Patient 1 Patient 2 Patient 3 Témoin nég. Plaque d’ELISA 1/2 1/4 1/8 1/16 1/32 3.8 1.9 0.8 0.4 0.2 1/64 1/128 1/256 0.1 0.04 0.03 2.5 1.2 0.6 0.3 0.15 0.07 0.03 0.03 0.1 0.05 0.03 0.03 0.03 0.03 0.03 0.03 3.6 3.0 1.6 0.8 0.4 0.2 0.1 0.05 0.12 0.06 0.03 0.03 0.03 0.03 0.03 0.03 Lectures d’absorbances Conclusions: Patient 1 & 3 sont séropositifs Patients 2 est séronégatif 33 11 11/11/2016 Semaine prochaine • Dernier quiz • Examen pratique: – Faites certain que vous comprenez tout le matériel necessaire pour l’examen pratique, vous pouvez me demander de clarifier toutes les questions sur l’examen 12
