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SÉQUENCE Etude de la sensibilité des bactéries aux antibiotiques
SÉANCE Etude comparative de deux techniques d’antibiogramme :
- méthode de diffusion en milieu gélosé
- système miniaturisé en milieu semi-solide
Objectif
Sensibiliser l’élève à l’analyse critique de méthodologies
Niveau d’enseignement Terminale STL BGB
Manipulations proposées Matière d’œuvre
Réalisation d’une coloration de Gram ß cuvette avec support pour lame
ß tubes de 5 mL d’eau physiologique stérile
ß tubes à hémolyse stérile
ß lames
ß flacon de lugol
ß flacon de cristal violet
ß flacon de safranine
ß pissette d’eau distillée
ß pissette d’alcool
Réalisation d’un test enzymatique ß réactif oxydase
ß disques vierges
ou disques « oxydase »
ß flacon H2O2
ß lames
ß souches témoins oxydase(+) – catalase(+)
Réalisation d’un antibiogramme ß 1 galerie ATB UR®
ß 1 ampoule ATB medium®
ß Pipettes automatiques réglables
ß Cônes stériles
ß tubes de 5 mL d’eau physiologique stérile
ß tubes d’eau physiologique stérile de 9 mL
ß écouvillons stériles
ß gélose Mueller Hinton
ß Etalons de Mac Farland
ß pipettes stériles de 1 mL
ß Système d’aspiration pour pipette stérile
ß 6 disques d’antibiotiques : amoxicilline (AMX), amoxicilline
+ acide clavulanique (AMC), céfalotine (CF) , gentamicine
(GM), péfloxacine (PEF), cotrimoxazole (SXT)
ß Modèle pour dépôt de disques
Réalisation d’un contrôle de pureté ß 1 gélose trypticase-soja
Ressources documentaires techniques fournies
• programmes de biologie du baccalauréat STL BGB
• Fiches techniques des milieux de culture utilisés
• Fiche technique ATB UR®
• Protocole technique des tests enzymatiques
• Protocole technique de la coloration de Gram
• Extrait des recommandations du CASFM (Comité de l’Antibiogramme de la Société Française
de Microbiologie)
• Conditions techniques générales pour les méthodes de dilution et de diffusion en milieu gélosé
• Protocole de l’antibiogramme standard
Résultats expérimentaux fournis
• Isolement sur gélose CLED
• Antibiogramme 6 disques d’une souche isolée sur gélose CLED après 24 heures d’incubation à
37°C en aérobiose
Documents d’interprétation
• Concentrations et diamètres critiques pour les diverses classes d’antibiotiques (CASFM)