151 123-140 Prix Th coul - Société de Pharmacie de Bordeaux

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Bull. Soc. Pharm. Bordeaux, 2012, 151(1-4), 123-140
PRIX DE THÈSE
DE LA SOCIÉTÉ DE PHARMACIE DE
BORDEAUX
Le jeudi 11 octobre 2012 a eu lieu l’audition orale des
candidats au “ Prix de thèse de la Société de Pharmacie de
Bordeaux ”. Parmi les thèses de Doctorat d'État en Pharmacie
soutenues à l'Université Bordeaux Segalen entre le premier
septembre 2011 et le 31 aout 2012 et autorisées à être présentées
au Prix de thèse de la Société, huit ont été reçues et retenues par le
Jury. Les étudiants ont exposé brillamment leur travail sur
PowerPoint.
Après délibération, la récompense a été attribuée à
Mesdemoiselles Coralie Bouchiat pour son travail intitulé
“ Caractérisation par mutagenèse dirigée des résidus de la piline
majeure pile impliqués dans la signalisation médiée par les pili de
type IV chez N. meningitidis ” (thèse dirigée par le Pr. Xavier
Nassif et présidée par le Pr. Claudine Quentin) et Marie Boureau
pour le travail suivant : “ Les pharmaciens, la vigne, et le vin en
France : Étude historique de 1800 à nos jours ” (thèse dirigée et
présidée par le Pr. Jean-Michel Mérillon).
Un chèque d'un montant de 500 euros a été remis aux
lauréates. Les prix seront décernés officiellement lors de la
Cérémonie de remise des Prix et des serments de Galien qui a lieu
chaque année début juillet.
Nous adressons aux lauréats nos plus vifs compliments. On
trouvera ci-après les résumés des thèses des candidats.

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Marie Boureau et Coralie Bouchiat.
• Coralie BOUCHIAT — Caractérisation par mutagenèse dirigée des
résidus de la piline majeure pile impliqués dans la signalisation médiée par
les pili de type IV chez N. meningitidis
Neisseria meningitidis, ou méningocoque, est une bactérie à Gram
négatif associée en diplocoque. Habituellement commensale, elle est
hébergée au niveau du rhinopharynx de l’Homme, son hôte exclusif. Ce
phénomène, appelé portage, est tout à fait asymptomatique et est variable en
fonction de l’âge. 10 à 35 % de la population est porteuse avec une
prévalence accrue chez les enfants et le jeune adulte. Néanmoins, le
méningocoque peut être responsable d’infections invasives parfois
gravissimes comme la septicémie à méningocoque, pouvant se compliquer
d’un purpura fulminans, et la méningite cérébro-spinale. Dans ce dernier
cas le méningocoque arrive à franchir la barrière hémato-méningée (BHM),
malgré les jonctions serrées liant les cellules endothéliales et rendant cette
barrière imperméable. Comprendre par quel mécanisme N. meningitidis
passe à travers la BHM est un enjeu essentiel.

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Le méningocoque présente à sa surface de longs appendices
filamenteux, les pili de type 4 (Pt4). Les Pt4 sont un assemblage de
multiples sous-unités protéiques appelées pilines, dont la principale est la
piline PilE. Les pili de type 4 sont impliqués dans différentes fonctions. Ils
permettent entre autre l’adhésion de N. meningitidis à la cellule hôte et
l’agrégation entre bactéries. Plus récemment, il a été montré que les Pt4 sont
également capables de déclencher des voies de signalisation chez la cellule
endothéliale. On parle de fonction de signalisation. L’activation de ces
différentes voies induit la relocalisation des protéines formant les jonctions
serrées entre les cellules endothéliales de la BHM. Les jonctions
intercellulaires étant déstabilisées, la BHM devient alors perméable. Le
phénomène de signalisation est donc une étape clé de l’infection méningée
par N. meningitidis. Le domaine des pili de type IV responsable de cette
fonction reste encore inconnu. Nous avons donc souhaité déterminer la zone
précise de la piline PilE, constituant majoritaire des Pt4, déclenchant les
voies de signalisation.
La protéine PilE est soumise à variation antigénique. Les
recombinaisons génétiques qu’elle subit aboutissent à des protéines
légèrement différentes. Dans le but de déterminer le rôle de la piline PilE
dans la signalisation cellulaire induite par la bactérie, nous avons comparé
deux variants protéiques de PilE décrits : SA et SB. Le variant SA de la
piline PilE est déjà connu pour présenter un déficit pour les fonctions
d’agrégation bactérienne et d’adhésion aux cellules hôtes, contrairement au
variant SB qui est hyper agrégatif et hyper adhésif. Nous avons montré que
ces deux variants présentent des capacités de signalisation différentes, le
variant SA de la piline PilE étant incapable de déclencher une signalisation
cellulaire, contrairement au variant SB. Ces deux variants se distinguent par
une variation de séquence au niveau d’une boucle cystéine en C-terminal de
la piline PilE, appelée région D, probable support de ces fonctions.
Nous avons donc voulu déterminer l’épitope responsable de la
signalisation dépendante de PilE en effectuant un criblage alanine par
mutagénèse dirigée. Ainsi, nous avons muté un à un chacun des 14 acides
aminés du variant PilE-SB qui différaient du variant PilE-SA au niveau de
la région D.

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Les mutations obtenues n’altéraient ni la production ni la stabilité des
protéines. L’ensemble des 14 mutants exprimait en effet les protéines PilE
mutées en quantité normale. D’autre part, nous nous sommes assurés
qu’aucune autre fonction médiée par les Pt4 et pouvant influencer la
signalisation n’était affectée. L’étude de la fonction de signalisation des
mutants a ensuite été réalisée par immunofluorescence, mettant en évidence
l’activation des différentes voies de signalisation. Les résultats ont permis
de montrer que les quatre résidus Q129, K147, D149 et D150 sont impliqués dans
le phénotype de signalisation. Nous souhaitons confirmer ces résultats en
étudiant l’effet propre des protéines mutées. Pour cela nous avons entrepris
la production de protéines de fusion MBP-PilE mutée où la Maltose Binding
Protein (MBP) sert de socle à PilE, ce duplex protéique étant ensuite coaté
sur une souche de S. aureus. Nous poursuivrons l’étude de ces résidus,
notamment par des études de modélisation, afin de comprendre comment la
piline PilE du méningocoque est impliquée dans le franchissement de la
barrière hémato-méningée.
Directeur de thèse : Pr. Hervé FLEURY
Président de thèse : Pr. Dominique BREILH
• Marie BOUREAU — Les pharmaciens, la vigne, et le vin en France :
Étude historique de 1800 à nos jours
Pendant longtemps, les domaines de la viticulture et de l’œnologie ont
été gouvernés par une tradition plus ou moins empirique. À partir du XIXe
siècle, ce secteur va bénéficier des progrès de la science grâce à
l’implication de scientifiques parmi lesquels on compte beaucoup de
pharmaciens. Cette étude se propose de mettre en valeur l’œuvre de ces
derniers, qui, jusqu’à l’heure, à quelques exceptions près, a été pratiquement
ignorée par les historiens de la vigne et du vin.
En premier lieu, les pharmaciens se sont préoccupés de la santé de la
vigne en participant à la lutte contre les affections parasitaires qui l’ont
durement affectée au cours du XIXe siècle. Ainsi, Pierre Batilliat,
pharmacien à Mâcon, en donnant sa caution scientifique au procédé de
l’échaudage des ceps, contribua à l’éradication de la Pyrale de la Vigne. Il
publia également, en 1846, un ouvrage d’œnologie remarquable, le Traité

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sur les vins de la France. Dans la lutte contre l’oïdium, les pharmaciens ont
proposé d’utiliser des poudres composées à base de soufre. C’est ainsi que
Pierre Fonta, un pharmacien de l’Ariège, fit breveter une poudre
magnésienne sulfurée, et qu’Alexandre Édouard Baudrimont, Professeur à
la Faculté des Sciences de Bordeaux, mit au point une poudre anti‐oïdique
qui fut très employée dans la région bordelaise. À partir de 1863, plusieurs
pharmaciens participèrent à la lutte contre le phylloxéra. Parmi ceux‐ci,
Jules‐Emile Planchon, Professeur à l’École supérieure de Pharmacie de
Montpellier, jouera un rôle déterminant, d’une part en découvrant l’insecte
responsable, d’autre part en proposant d’utiliser des vignes américaines
résistantes comme porte‐greffes pour reconstituer le vignoble français.
Avant cette étape décisive, d’autres pharmaciens proposeront de renforcer la
résistance de la vigne au parasite par l’utilisation d’engrais (Gaston Guy, de
Bergerac, et son « Compost‐Guy »), ou préconiseront l’emploi
d’insecticides (Benjamin Cauvy, de Montpellier, et son « Insecticide Cauvy
» à base de sulfocarbonate de calcium). Par la suite, la survenue de deux
autres affections cryptogamiques, le Mildiou et le Black‐rot, fut à l’origine
de nombreux travaux de la part de deux pharmaciens lot‐et‐garonnais, Émile
Fréchou et Gaston Lavergne. Émile Fréchou étudia plus particulièrement le
Mildiou et mit au point la « Bouillie Fréchou » pour le combattre, tandis que
Gaston Lavergne proposa une composition nommée « Sporivore » pour
augmenter l’activité de la bouillie bordelaise. Il publiera également un
ouvrage apprécié sur le black‐rot, et sa notoriété le mènera jusqu’en
Amérique latine où il fondera le Laboratoire de Pathologie végétale de
Santiago‐du‐Chili.
Parallèlement à la santé de la vigne, les pharmaciens se sont occupés
de la santé du vin afin d’en préserver la salubrité. Leur intervention a été
présente à tous les stades : élaboration, conservation, et analyse du vin.
Ainsi, en ce qui concerne l’élaboration du vin, Jean‐Baptiste François,
pharmacien à Châlons‐sur‐Marne, trouva le moyen d’obtenir une pression
convenable à l’intérieur des bouteilles de vins mousseux, résolvant pour la
Champagne l’important problème de la casse des bouteilles. De son côté, le
célèbre pharmacien militaire Antoine‐Augustin Parmentier étudia la
pratique du sucrage ou chaptalisation, préconisant l’emploi du sucre de
raisin plutôt que celui du sucre de canne. La pratique ancienne du plâtrage
fît l’objet de nombreux travaux de la part des pharmaciens : c’est en
particulier le cas du pharmacien militaire Jean‐Hippolyte Marty, ainsi que
de John Casthélaz à Paris et de Pascal Hugounenq à Lodève, ces derniers
ayant proposé des alternatives au plâtrage. Pour ce qui est de la conservation