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Table des matières
Préambule au manuscrit......................................................................................................................5
I. Chromatine et Noyau cellulaire........................................................................................................8
I.1 Quelques rappels sur le chromosome........................................................................................9
I.1.1 Le nucléosome, premier niveau d'organisation du chromosome.......................................9
I.1.1.1 ADN (diamètre caractéristique de 2nm).....................................................................9
I.1.1.2 Histones (dimension caractéristique de 3 nm)..........................................................10
I.1.1.3 Nucléosome (dimension caractéristique 10nm)........................................................11
I.1.2 Fibre de nucléosomes de 30 nm.......................................................................................13
I.1.3 Fibre de 30 nm in vivo....................................................................................................15
I.2 Organisation nucléaire chez Saccharomyces Cerevisiae........................................................16
I.2.1 Organisation des chromosomes........................................................................................17
I.3 Description de notre méthode de culture cellulaire et de marquage ......................................22
I.3.1 La culture cellulaire .........................................................................................................22
I.3.2 Marquage d’un site chromosomique ...............................................................................22
II. Montage expérimental de microscopie et Optimisation................................................................24
II.1 L’avènement des protéines de fusion fluorescentes...............................................................24
II.1.1 Notions sur la physique de fluorescence.........................................................................25
II.1.2 Le cube dichroïque..........................................................................................................26
II.1.3 Microscopes optiques à fluorescence..............................................................................28
II.2 Optimisation des conditions d'imagerie pour le suivi de particules.......................................29
II.2.1 Généralités : critère d'Abbe et suivi de particules...........................................................29
II.2.2 Précision de pointé pour le suivi d'une particule unique................................................30
II.2.2.1 Approche de Thompson...........................................................................................30
II.2.2.2 Approche d'Ober......................................................................................................31
II.2.3 Éléments d'optimisation..................................................................................................32
II.2.3.1 Source de lumière....................................................................................................32
II.2.3.2 Filtres.......................................................................................................................33
II.2.3.3 Ouverture numérique et grossissement....................................................................33
II.2.3.4 Camera.....................................................................................................................34
II.2.3.4.1 Capteur EMCCD...............................................................................................34
II.2.3.4.2 Binning..............................................................................................................36
II.2.3.5 Taille du pixel...........................................................................................................37
II.2.4 Détermination de conditions de suivi de particules optimales........................................38
II.2.4.1 Simulation des images.............................................................................................39
II.2.4.2 Validation des conditions de suivi avec des nanoparticules fluorescentes..............41
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