Silva - CIRE

Relations algues toxiques (Karenia selliformis) palourde Ruditapes ssp.:
Emphase sur l’infection par Perkinsus olseni
Mirella da Silva, Hélène Hégaret, Thibaut de Bettignies,
Philippe Soudant
OBJECTIF: Évaluer les effets de « Harmful algal blooms »
(HABs) sur la réponse immunitaire et l’évolution de la
maladie par Perkinsus olseni chez Ruditapes ssp.
1 Questions:
• La présence de HABs peut-elle affecter la réponse immunitaire des palourdes
contre l’infection par Perkinsus olseni?
Ou
• L’infection par P. olseni peut-elle modifier la réponse des palourdes aux algues?
Ruditapes philippinarum
Perkinsus olseni
Algues
Test in vivo – exposition longue et courte
2•
Questions:
La présence de ALGUES et ses toxines peuvent-elles affecter les
hémocytes et modifier la réponse immunitaire des palourdes?
Ou
• Les hémocytes sont-ils capables d’affecter la physiologie des algues?
Algues
3
Hémocytes
Questions:
• La présence de ALGUES et ses toxines peuvent-elles affecter les cellules de P.
olseni et diminuer les dégâts produits par le parasite chez les palourdes?
Perkinsus olseni
Algues
Tests in vitro
1•
Questions:
La présence de HABs peut-elle affecter la réponse immunitaire
des palourdes contre l’infection par Perkinsus olseni?
EXPERIENCE 1: Exposition longue des palourdes
à Karenia selliformis.
Bacs
Pompe
péristaltique
Mélange algues
Exposition de palourdes à Karenia selliformis pendant 6 semaines
Faible bloom (102 cel/ml)
2 semaines
(103 cel/ml)
2 semaines
Faible bloom (102 cel/ml)
2 semaines
Exposition de palourdes à Karenia selliformis pendant 6 semaines
PARAMÈTRES IMMUNITAIRES ET CELLULAIRES (FCM):
• Viabilité
• Morphologie (taille et complexité)
• Phagocytose
• Production de ROS
Apoptose –Annexin V
• Apoptose
• Titre d’agglutination (Lectines)
PARAMÈTRES PARASITAIRE:
• Prévalence et intensité de l’infection
par Perkinsus olseni (Fluid Thioglycollate Medium)
RÉSULTATS
1- Effet de K. selliformis sur l’infection par P. olseni
RÉSULTATS
1- Effet de K. selliformis sur l’infection par P. olseni
•Différences significatives de la prévalence entre temps pour K. selliformis
•Différences significatives de l’intensité P. olseni entre traitements T2
LONG TERME EXPOSITION
Karenia selliformis
Chaetoceros
T0
*
90
Prévalence Perkinsus olseni (%)
3.0
2.8
2.6
80
2.4
2.2
70
2.0
60
1.8
50
1.6
1.4
40
Après faible bloom
30
Après forte bloom
1.2
1.0
0.8
20
0.6
0.4
10
0.2
0
0.0
0
2 semaines
Infecté par P. olseni
3 semaines
6 semaines
Non infecté par P. olseni
2 semaines
3 semaines
6 semaines
Intensité de infection de P. olseni
Intensité de infection de P. olseni
100
RÉSULTATS
2- Effet de K. selliformis sur les paramètres immunitaires
de Ruditapes ssp.
Titre de Agglutination
390
380
*
360
350
340
1 Nov
8 Nov
15 Nov
22 Nov
29 Nov
6 Dec
13 Dec
330
*Tous les temps
320
confondus
310
25 Oct
*
210
180
*
150
120
90
60
1 Nov
8 Nov
15 Nov
22 Nov
29 Nov
6 Dec
ROS (hémocytes)
240
8.0
7.5
7.0
6.5
6.0
5.5
5.0
4.5
4.0
3.5
3.0
2.5
25 Oct
*
370
270
30
25 Oct
Karenia selliformis
400
Taille
215
210
205
200
195
190
185
180
175
170
165
160
155
25 Oct
Chaetoceros calcitrans
80
75
70
65
60
55
50
45
40
35
30
25
20
13 Dec
1 Nov
8 Nov
15 Nov
22 Nov
29 Nov
6 Dec
13 Dec
*
25 Oct
1 Nov
8 Nov
15 Nov
22 Nov
29 Nov
6 Dec
13 Dec
10
*
9
8
Apoptose (%)
ROS (hémocytes aggregés)
Complexité
T0
7
6
5
*
4
3
2
1
1 Nov
8 Nov
15 Nov
22 Nov
29 Nov
6 Dec
13 Dec
0
25 Oct
1 Nov
8 Nov
15 Nov
22 Nov
29 Nov
6 Dec
13 Dec
CONCLUSION
1- Karenia selliformis affect l’infection par Perkinsus
olseni (↓ prévalence ↓ intensité).
2- Karenia selliformis affect le système immunitaire de
Ruditapes spp. (↓ taille des hémocytes; ↓ ROS,
↓apoptose).
3- La réponse des palourdes aux agents infections peut
être compromis.
PERSPECTIVES
1- Tester in vitro les effets de K. selliformis sur les
cellules de Perkinsus olseni
ALGUES + MILIEU
ALGUES SEUL
MILIEU SEUL
TOXINE ISOLÉ
P. olseni SEUL
2- Tester in vitro les effets de K. selliformis sur les
hémocytes de Ruditapes ssp.
ALGUES + MILIEU
ALGUES SEUL
MILIEU SEUL
TOXINE ISOLÉ
HAEMOLYMPH
HEMOCYTES SEUL
PLASMA SEUL