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MICRoSCOPIE. Vol.1J. DI) 3, 197!, p; 261 à 282
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JOURNAL DE MICROSCOPIE
Le «Journal de Microscopie... créé en 1962, est publié par lea soins de
la,
SocIété Française de Microscopie
Electroniquèavec
le concours du Centre
National de la Recherche
Scf~rîtlflque.
le
«Journal de Microscopie.. fera paraitre en 1972 neuf numéros et publie des
artlclQS. orl91naux portant sur la microscopie
e,t·
ses applications' (mIcroscopie
clà$slqiJe, électronique, IonIque; X, ete. ; applications à la, cristallographie, àla
biologie,
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'a
rédaction en chef par P. FAVARD.
ABONNEMENTS Volume 16 à18, 1973
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Particuliers (à titre strictement privé)
....•..........••••••.••
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de Microscopie Electronique.
Tous ces
prJx
sont nets de toule remise.
J. Microscopie (1973), 17, 261-282
RENOUVELLEMENT
DES GLYCOPROTÉINES DE SURFACE
ÉTUDE RADIOAUTOGRAPHIQUE
DE L'ÉPITHÉLIUM DE LA VESSIE DE GRENOUILLE
Monique
PISAM
et
Pierre
RIPOCHE
:,
C.E.A.,
Département
de
Biologie,
Centre
d'Etudes
Nucléaires,
Saclay,
B.P.
2,
91190
Gif
sur
Yvette,
France
INTRODUCTION
Une
couche de
nature
polysaccharidique
appelée
«cell
coat»
tapisse
le
feuillet
externe
de la
membrane
cytoplasmique
de
nombreuses
cellules
animales
(Gasic et Gasic, 1963,
Rambourg
et coll., 1966,
Rambourg
et
Leblond, 1967).
Différentes
propriétés
ont
été
attribuées
àces
polysaccharides
mem-
branaires
qui
pourraient,
en
particulier,
être
impliqués
dans
des
processus
de
transports
d'ions.
Ainsi Glick
et
Githens
(1965)
ont
montré
que
l'acide
sialique
de
la
surface
cellulaire
contrôle
le
passage
des
ions
K'
à
travers
la
membrane
cytoplasmique
des cellules
leucémiques
L1210.
Par
ailleurs,
Lehninger
(1968)
suggère
que
les
groupements
négatifs
du «cell
coat»
des
neurones
pourraient
jouer
un
rôle
fondamental
dans
les
échanges
d'ions
Na'
et
Ca" qui
interviennent
dans
les
mécanismes
de
conduction
et
de
transmission
de l'influx
nerveux.
La
surface
apicale
des
assises
épithéliales,
qui
sépare
des
milieux
de
nature
très
différente,
pourrait
présenter
des
polysaccharides
doués
de
propriétés
particulières,
d'autant
plus
que
ces
derniers
possèdent
des
charges
négatives
absentes
des
sur-
faces
latérales
et
basales.
Ito
(1965),
Scott
et
Dorling
(1965),
au
niveau
des cellules
intestinales,
Morard
(1967),
au
niveau
des
cellules
du
tube
collecteur
du
rein
de
rat
ont
montré
que
seule
la
surface
apicale
de
ces
deux
types
cellulaires
présente
une
réaction
métachromatique
et
une
coloration
par
le
bleu
Alcian
à
bas
pH.
L'épithélium
vésical
de
grenouille
offre
un
matériel
de
choix
pour
étudier
le
rôle
éventuel
du
«cell
coat»
dans
les
phénomènes
de
perméa-
bilité
cellulaire
puisque
:
-
d'une
part,
les cellules
épithéliales
de la vessie
d'amphibiens,
comme
les cellules
intestinales
et
les
cellules du
tube
collecteur
du
rein
M. Pisam et P. Ripoche
ST,
1291
261
Journal de Microscopie,
Volume
17, 1973
de
rat,
possèdent
à
leur
surface
apicale
une
couche de
polysaccharides
acides
observée
par
Choi (1963) à
l'aide
de
la
technique
à
l'acide
periodique
Schiff
et
par
le
fer
colloïdal à
bas
pH
;
-
d'autre
part,
l'épithélium
vésical de
grenouille
possède
la
propriété
de
transporter
de
l'eau
et du
sodium,
et ces
transports
sont
fortement
augmentés
par
les
hormones
neurohypophysaires
(Bentley,
1958
;
Bour-
guet
et
Maetz, 1961) qui,
d'après
certains
auteurs
(Lichtenstein
et
Leaf,
1966
;
Frazier
et
coll.,
1962),
pourraient
agir
en modifiant les
propriétés
de
perméabilité
des
membranes
apicales
(Mas
ur
et
coll.,
1972).
L'épithélium
de la
vessie
d'amphibiens
pourrait
donc
permettre
d'éta-
blir
une
corrélation
entre
des
variations
fonctionnelles
et
structurales
de
la
surface
cellulaire.
Dans
une
étude
précédente
réalisée
à
l'aide
du
thorium
colloïdal,
Pisam
et coll. (1970)
ont
montré
que
le
nombre
des
charges
négatives
de
la
surface
apicale
de
l'épithélium
vésical
diminuait
après
stimulation
par
l'ocytocine. Ce
phénomène
peut
être
attribué,
soit
à des
remaniements
des
charges
négatives
des
polysaccharides,
soit
à des
modifications
dans
le
renouvellement
de ces molécules.
Pour
tenter
d'élucider
ce problème,
nous
nous
proposons
d'étudier,
à
l'aide
de
précurseurs
radioactifs,
les
lieux
de
synthèse
et le
déplacement
des
polysaccharides
du
«cell
coat»
ainsi
que
leurs
modifications éven-
tuelles
sous
l'action
de l'ocytocine.
MATÉRIEL ET MÉTHODES
a.
Préparation
des
vessies
Les
expériences
sont
réalisées
sur
des
grenouilles
femelles
Rana
esculenta
de
60 à70 g.
Les
animaux
sont
maintenus
dans
de
l'eau
courante
à22 -o
au
moins
une
semaine
avant
leur
utilisation.
Ils
sont
ensuite
décapités
et
leur
moelle
épinière
est
détruite.
Après
avoir
procédé
à
une
incision
médiane
de la
paroi
abdominale,
un
cathéter
est
introduit
par
voie
cloacale
dans
la
vessie,
celle-ci
est
remplie
d'une
solution
de
Ringer.
Des
ligatures
sont
posées
sur
la
paroi
ventrale
de
la
vessie
qui
permettent
d'éviter
la
rétraction
de la
préparation
lors
de
son
incision.
La
vessie
est
ensuite
insérée
à
la
manière
d'un
diaphragme
entre
deux
chambres
en
plexiglas.
Chacune
de
ces
chambres
comprend
deux
canaux,
ce qui
permet
d'isoler
dans
la
même
préparation
deux
éléments
iden-
tiques
dont
l'un
servira
de
contrôle
et
l'autre
sera
soumis
à
l'action
hormonale.
La
vessie
est
sous-tendue
par
une
toile
de
nylon
contre
laquelle
une
légère
pression
hydrostatique
la
maintient
en
position
fixe
(Figure
1).
b.
Mesure
du
flux
d'eau
-
Addition
d'ocytocine
La
perméabilité
à
l'eau
de
la
vessie
est
contrôlée
par
la
technique
décrite
par
Bourguet
et
Jard
(1964),
technique
qui
permet
la
mesure
du
flux
net
d'eau
traversant
la
préparation.
262 Glycoprotéines de surface
Air
r;::::::::===Air
Mémoires originaux
sereux
Compartiment
muqueux
FIGURE
1. -
Schéma
des
chambres
en
plexiglas
entre
lesquelles
est
placée
la
vessie.
Celle-ci
est
en
contact,
du
côté
de
sa
face
séreuse
avec
une
solution
de
Ringer
«R
», du
côté
de
sa
face
muqueuse
avec
une
solution
de
Ringer
diluée
«R»
appelée
~.
Le flux
d'eau
est
lié à
l'existence
d'une
différence
de
pression
osmotique
entre
les
milieux
baignant
les
deux
faces
de
la
paroi
vésicale
:
- le
milieu
en
contact
avec
la
face
séreuse
est
constitué
d'une
solution
de
Ringer
(pH
8,1)
[114,5 mEq/1 de Na+ 5 mEq/1 de K+ 2 mE]q/1 de
Ca++
119 mEq/1 de CI- 2,5 mEq/1 de
HCO;J
;
-.:...
le
milieu
baignant
la
face
muqueuse
est
une
solution
de
Ringer
dans
laquelle
la
concentration
en
NaCI
a
été
abaissée
[7,5 mEq/1 de Na+
12 mEq/1 de Cl, les
autres
électrolytes
K+,
Ca-t,
HCO;,
restent
à
la
même
concentration
que
dans
la
solution
de
Ringer
normal},
L'oxygénation
est
réalisée
par
barbotage
d'air
du
côté
séreux.
La
stimu-
lation
par
l'ocytocine
est
réalisée
en
ajoutant,
du
côté
séreux,
de
l'ocytocine
de
synthèse:
syntocinon
(Sandoz)
à
une
concentration
de 4,4 X 10-8 M.
Les
expériences
sont
réalisées
à22 -c,
e,
Incubation
des
vessies
en
présence
de
précurseurs
radioactifs
Lorsque
le
flux
de
base
qui
traverse
la
préparation
est
stabilisé,
les
vessies
sont
incubées
en
présence
du
composé
radioactif
que
l'on
ajoute
du
côté
séreux,
à
la
concentration
de
200
!.l.
Ci/ml.
Nous
avons
utilisé
comme
précurseurs
radioactifs
:
M. Pisam et P. Ripoche 263
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