u PDF

::"
-.
' ..
'. ,U:NOlJVELLEMENT
DES GLYCOPROTÉINES DE SURFACE :
ÉTûDB RADIOAUTOORAPHIQUE
DE.J.,'ÉPI1\HÉLIPM DB LA
vsssrs DB GRENOUILLE
1
t
'} ~ ~ue PISAM: et Pleri'é RlPOCHE
L. ·.0.11 ...... ,D4partemenl cieBIOlogie, Oeftera d'Be ... N~, SGoIal/,B.P. ,,- l,
.. ,'91.1.90 Gif BW' Y1,I6Iee,. FrtJftC6
..
,.-,
.:
i: .". •
~.~ ~.-
•
. 1
li "'. -.
_~,~·'rEXfraitdu JOURNAL Pl!) MICRoSCOPIE. Vol.1J. DI) 3, 197!, p; 261 à 282
'./ "

JOURNAL DE MICROSCOPIE
Le «Journal de Microscopie... créé en 1962, est publié par lea soins de la,
SocIété Française de Microscopie Electroniquèavec le concours du Centre
National de la Recherche
Scf~rîtlflque.
le «Journal de Microscopie.. fera paraitre en 1972 neuf numéros et publie des
artlclQS. orl91naux portant sur la microscopie e,t· ses applications' (mIcroscopie
clà$slqiJe, électronique, IonIque; X, ete. ; applications à la, cristallographie, àla
biologie,
àla métallographie, etc.). Le journal accepte des articles en anglais •
/et en ellemancL
G. DUPOUY
C. FERT
S. GOLDSZTAUB
P. GRIVET
A. GUINIER
. F. HAGUENAU
P. LEPINE
C. MAGNAN
Conseil,eehtntfflque international:.
B. AFZELlUS, Stockholm
T.F. ANDERSON, Philadelphie
A. BAIRATI, Milan
E.L. BENEDETTI, Parla
A. BIRCH-ANDERSEN, Copenhague
M. BURGOS, Mendoza
A. CLAUDE, Bruxelles
V.E. COSSLElT, Cambridge
ComIté de rédaction:
J.ANDRE
R. BERNARD
W. BERNHARD
M. BESSIS
R. BUVAT
N. CARASSO
R. CASTAING
R. COUTEAUX
F. GUBA,' Budapest
E. KELLENBERGER, Genève
J.B. LE POOLE, Delft
E.H. MERCER. Canberra
E. RUSKA, Berlin
K. SMETANA. Prague
R. UYEDA, Nagoya
A.OBERLIN
P.' PERIO
F.
PERRIER
J. PHILIBERT
D. PICARD
A. SAULNIER
J.-p. THIERY
•
Le secrétariat de rédaction est assuré par A. OBERLIN et J. PHILIBERT. 'a
rédaction en chef par P. FAVARD.
ABONNEMENTS Volume 16 à18, 1973
Laboratoires et firmes
Particuliers (à titre strictement privé) ....•..........••••••.••
Membres de la S.F.M.E. (à titre strictement privé) ..........•.
AncIennes années'disponibles. Se renselgr.tlr au siège.
La souscription doit· être
envoy.ée à la
Socl6l6 Françal.. de Microscopie Electronique
Ecole Normale Sup6rleure - laboratoire de Bolanlque
24, rue Lhomond. 75-Paris(5"'
360,- F
~..o.-F
200,- F
•
Le paiement peut être fail par chèque bancaire ou par virement postal (C:C.P.
Parla
10-791-33), établi au nom de la S0c!6ti Françal .. de Microscopie Electronique.
Tous ces prJx sont nets de toule remise.

J. Microscopie (1973), 17, 261-282
RENOUVELLEMENT
DES GLYCOPROTÉINES DE SURFACE
ÉTUDE RADIOAUTOGRAPHIQUE
DE L'ÉPITHÉLIUM DE LA VESSIE DE GRENOUILLE
Monique PISAM et Pierre RIPOCHE
:, C.E.A., Département de Biologie, Centre d'Etudes Nucléaires, Saclay, B.P. n° 2,
91190 Gif sur Yvette, France
INTRODUCTION
•
Une couche de nature polysaccharidique appelée «cell coat» tapisse le
feuillet externe de la membrane cytoplasmique de nombreuses cellules
animales (Gasic et Gasic, 1963, Rambourg et coll., 1966, Rambourg et
Leblond, 1967).
Différentes propriétés ont été attribuées àces polysaccharides mem-
branaires qui pourraient, en particulier, être impliqués dans des processus
de transports d'ions. Ainsi Glick et Githens (1965) ont montré que l'acide
sialique de la surface cellulaire contrôle le passage des ions K' à travers
la membrane cytoplasmique des cellules leucémiques L1210. Par ailleurs,
Lehninger (1968) suggère que les groupements négatifs du «cell coat»
des neurones pourraient jouer un rôle fondamental dans les échanges
d'ions Na' et Ca" qui interviennent dans les mécanismes de conduction
et de transmission de l'influx nerveux. La surface apicale des assises
épithéliales, qui sépare des milieux de nature très différente, pourrait
présenter des polysaccharides doués de propriétés particulières, d'autant
plus que ces derniers possèdent des charges négatives absentes des sur-
faces latérales et basales. Ito (1965), Scott et Dorling (1965), au niveau
des cellules intestinales, Morard (1967), au niveau des cellules du tube
collecteur du rein de rat ont montré que seule la surface apicale de ces
deux types cellulaires présente une réaction métachromatique et une
coloration par le bleu Alcian à bas pH.
L'épithélium vésical de grenouille offre un matériel de choix pour
étudier le rôle éventuel du «cell coat» dans les phénomènes de perméa-
bilité cellulaire puisque :
-
d'une part, les cellules épithéliales de la vessie d'amphibiens,
comme les cellules intestinales et les cellules du tube collecteur du rein
M. Pisam et P. Ripoche
ST, 1291
261

Journal de Microscopie, Volume 17, 1973
de
rat, possèdent à leur surface apicale une couche de polysaccharides
acides observée par Choi (1963) à l'aide de la technique à l'acide periodique
Schiff et par le fer colloïdal à bas pH ;
- d'autre part, l'épithélium vésical de grenouille possède la propriété
de transporter de l'eau et du sodium, et ces transports sont fortement
augmentés par les hormones neurohypophysaires (Bentley, 1958 ; Bour-
guet et Maetz, 1961) qui, d'après certains auteurs (Lichtenstein et Leaf,
1966 ; Frazier et coll., 1962), pourraient agir en modifiant les propriétés de
perméabilité des membranes apicales (Mas ur et coll., 1972).
L'épithélium de la vessie d'amphibiens pourrait donc permettre d'éta-
blir une corrélation entre des variations fonctionnelles et structurales de
la
surface cellulaire.
Dans une étude précédente réalisée à l'aide du thorium colloïdal,
Pisam et coll. (1970) ont montré que le nombre des charges négatives de
la surface apicale de l'épithélium vésical diminuait après stimulation par
l'ocytocine. Ce phénomène peut être attribué, soit à des remaniements des
charges négatives des polysaccharides, soit à des modifications dans le
renouvellement de ces molécules.
Pour tenter d'élucider ce problème, nous nous proposons d'étudier, à
l'aide de précurseurs radioactifs, les lieux de synthèse et le déplacement
des polysaccharides du «cell coat» ainsi que leurs modifications éven-
tuelles sous l'action de l'ocytocine.
MATÉRIEL ET MÉTHODES
a. Préparation des vessies
Les expériences sont réalisées sur des grenouilles femelles Rana esculenta de
60 à70 g.
Les animaux sont maintenus dans de l'eau courante à22 -o au moins
une semaine avant leur utilisation. Ils sont ensuite décapités et leur moelle
épinière est détruite. Après avoir procédé à une incision médiane de la paroi
abdominale, un cathéter est introduit par voie cloacale dans la vessie, celle-ci
est remplie d'une solution de Ringer. Des ligatures sont posées sur la paroi
ventrale de la vessie qui permettent d'éviter la rétraction de la préparation lors
de son incision. La vessie est ensuite insérée à la manière d'un diaphragme
entre deux chambres en plexiglas. Chacune de ces chambres comprend deux
canaux, ce qui permet d'isoler dans la même préparation deux éléments iden-
tiques dont l'un servira de contrôle et l'autre sera soumis à l'action hormonale.
La vessie est sous-tendue par une toile de nylon contre laquelle une légère
pression hydrostatique la maintient en position fixe (Figure 1).
b. Mesure du flux d'eau - Addition d'ocytocine
La perméabilité à l'eau de la vessie est contrôlée par la technique décrite par
Bourguet et Jard (1964), technique qui permet la mesure du flux net d'eau
traversant la préparation.
•
262 Glycoprotéines de surface

Air
r;::::::::===Air
Mémoires originaux
sereux
Compartiment
muqueux
•
FIGURE 1. - Schéma des chambres en plexiglas entre lesquelles est placée la
vessie. Celle-ci est en contact, du côté de sa face séreuse avec une solution de
Ringer «R », du côté de sa face muqueuse avec une solution de Ringer diluée
«R»
appelée ~.
Le flux d'eau est lié à l'existence d'une différence de pression osmotique
entre les milieux baignant les deux faces de la paroi vésicale :
- le
milieu en contact avec la face séreuse est constitué d'une solution de
Ringer (pH 8,1) [114,5 mEq/1 de Na+ 5 mEq/1 de K+ 2 mE]q/1 de Ca++
119 mEq/1 de CI- 2,5 mEq/1 de HCO;J ;
-.:... le milieu baignant la face muqueuse est une solution de Ringer dans
laquelle la concentration en NaCI a été abaissée [7,5 mEq/1 de Na+
12 mEq/1 de Cl, les autres électrolytes K+, Ca-t, HCO;, restent à la même
concentration que dans la solution de Ringer normal},
L'oxygénation est réalisée par barbotage d'air du côté séreux. La stimu-
lation par l'ocytocine est réalisée en ajoutant, du côté séreux, de l'ocytocine de
synthèse: syntocinon (Sandoz) à une concentration de 4,4 X 10-8 M.
Les expériences sont réalisées à22 -c,
e, Incubation des vessies en présence de précurseurs radioactifs
Lorsque le flux de base qui traverse la préparation est stabilisé, les vessies sont
incubées en présence du composé radioactif que l'on ajoute du côté séreux,
à la concentration de 200 !.l. Ci/ml.
Nous avons utilisé comme précurseurs radioactifs :
M. Pisam et P. Ripoche 263