étude qualitative et quantitative par spectrométrie de masse des

ÉTUDEQUALITATIVEETQUANTITATIVEPARSPECTROMÉTRIEDEMASSE
DESACIDESAMINÉSINCORPORÉSLORSDELATRANSLECTURE
DavidCornu1,SandraBlanchet2,ManuelaArgentini3,Jean‐PierreRousset2,OlivierNamy2
1‐FRC3115,ICSN,avenuedelaTerrasse,91190Gif‐sur‐Yvette
2‐InstitutdeGénétiqueetMicrobiologie,UniversitéParis‐Sud11,15RueGeorgesClemenceau,91405Orsay
3‐IFR115,ICSN,avenuedelaTerrasse,91190Gif‐sur‐Yvette
Laterminaisondelatraductiondesprotéinesestunprocessusfidèlemaisquiestsystématiquement
encompétitionavecl’incorporationd’ARNt«prochecognat»auniveauducodonstop,onparlealors
detranslecturedescodonsstop.L'efficacitéd'incorporationdechaqueARNtdépendnonseulement
delacomplémentaritécodonstop/anticodonmaisaussiducontextenucléotidiqueentourantle
codonstop.Denombreusesmaladiesgénétiquessontprovoquéesparl’apparitiondecodonsstop
prématurés(PTC)quisontdepuisunedizained’annéesdevenusuneciblethérapeutique.Eneffetle
franchissementdecescodonspartranslecturepeutrestaurerlasynthèsecomplètedelaprotéine
maisavecuneactivitéquipeutêtrefortementinfluencéeparlanaturedel’acideaminéincorporéau
niveauduPTC.Afindemieuxcomprendrelesmécanismesmoléculairesdelatranslecture,nousavons
identifiéetquantifiédefaçonrelativeparspectrométriedemasselesacidesaminésincorporéslors
delatranslecturechezSaccharomycescerevisiae.
Aprèsprotéolysedesprotéinespurifiées,lesanalysesLC‐MS/MSontpermisdemontrerquepour
l’ensembledescontextesnucléotidiquestestés,lesacidesaminésmajoritairementinséréssontla
glutamine,latyrosineetlalysinepourlescodonsstopUAAetUAG,lacystéine,letryptophaneet
l’argininepourlecodonUGA.Ainsilanatureducodonstopdéterminelechoixdesacidesaminés
majoritairementinsérésdanslesitedetranslecture.
DanslescasdescodonsstopUAAetUAGunequantificationrelativedespeptidesquichevauchentles
sitesdetranslectureaétéeffectuéeparnanoLC‐MS.Aprèscorrectiondesdonnéesdequantification
parunfacteurderéponseàl’ionisationdéterminéàpartirdestandards,lesrésultatsmontrentque
l’efficacitérelatived’incorporationdesacidesaminésQetYvarieselonlecodonstop.L’ensemblede
cesrésultatsenaccordaveclesprédictionsdumodèlegénétiqueontpermisdevaliderlapertinence
delalevureS.cerevisiaecommemodèledechoixpourl’étudedelatranslecture.L’approchede
quantificationrelativedespeptidesissusdelatranslectureseraétendueauxdifférentscontextesafin
d’évaluerl’effetdel’environnementnucléotidiquesurl’efficacitéd’incorporationdesacidesaminés
déjàidentifiés.Àlongtermenousespéronsquecetteétudecontribueraàaméliorerlestraitements
thérapeutiquesdemaladiesliéesàl’apparitiondecodonsstopprématurés.