COMPASS Enterobacter sakazakii Agar

1/4
Biokar Diagnostics – Rue des Quarante Mines – ZAC de Ther – Allonne – B.P. 10245 – F60002 Beauvais Cedex – France
Tél : + 33 (0)3 44 14 33 33 – Fax : + 33 (0)3 44 14 33 34 – www.biokar-diagnostics.fr
COMPASS® Enterobacter sakazakii Agar
DOMAINE D’UTILISATION
COMPASS® Enterobacter sakazakii Agar est un milieu sélectif utilisé pour la recherche des
Enterobacter sakazakii dans les poudres de lait, les produits déshydratés et leurs matières premières,
pour l’alimentation infantile.
HISTORIQUE
Enterobacter sakazakii est un bacille à Gram négatif, mobile, non sporulé, anaérobie facultatif, qui
forme des colonies pigmentées en jaune après 48-72 h d’incubation sur gélose non sélective. Avant
sa dénomination définitive en 1980, sur la base de travaux d’homologies de séquences ADN, de
réactions biochimiques, de production de pigment et de sensibilité aux antibiotiques, Enterobacter
sakazakii était connu sous le nom d’Enterobacter cloacae pigmenté en jaune (Lehner & Stephan,
2004). Pathogène opportuniste, Enterobacter sakazakii est notamment à l’origine de méningites et
d’entérites, particulièrement chez les nouveau-nés et les jeunes enfants (Simmons et al., 1989 ;
Gurtler et al., 2005), à la fréquence relativement faible de 1 pour 100000, mais avec un taux de
mortalité élevé compris entre 20 et 50%. Bien que des souches d’Enterobacter sakazakii aient été
isolées dans différents produits alimentaires, seuls les produits destinés à l’alimentation infantile ont
été impliqués dans des épisodes infectieux.
Des études ont montré que 100% des Enterobacter sakazakii étaient positifs pour
l’α-glucosidase alors que 100% des autres espèces d’Enterobacter étaient négatives pour cette
enzyme (Muytjens et al., 1984). Sur la base de ces observations, le substrat chromogène 5-bromo-4-
chloro-3-indolyl-α-D-glucopyranoside (X-α-glucoside) a été proposé pour différencier les Enterobacter
sakazakii des autres membres de la famille des Enterobacteriaceae (Iversen et al., 2004 ; Guillaume-
Gentil et al., 2005). L’enzyme α-glucosidase hydrolyse le X-α-glucoside et libère l’aglycone 5-bromo-
4-chloro-indolol. En présence d’oxygène, cet aglycone est dimérisé et forme le pigment bromo-chloro-
indigo.
PRINCIPES
- La Tryptone stimule la croissance des Enterobacter.
- L’extrait de levure est une source du complexe vitaminique B.
- Le chlorure de sodium maintient la pression osmotique.
- Le choix de la température d’incubation fixée à 44°C, associée au désoxycholate de sodium et au
cristal violet, permet d’inhiber la croissance d’une partie de la microflore de contamination
- Le X-α-glucoside assure la révélation chromogénique de l’activité de l’α-glucosidase des
Enterobacter sakazakii. Ceux-ci présentent des colonies vertes à bleues après hydrolyse du
substrat.

2/4
Biokar Diagnostics – Rue des Quarante Mines – ZAC de Ther – Allonne – B.P. 10245 – F60002 Beauvais Cedex – France
Tél : + 33 (0)3 44 14 33 33 – Fax : + 33 (0)3 44 14 33 34 – www.biokar-diagnostics.fr
PREPARATION
- Mettre en solution 30,2 g de milieu déshydraté (BK188) dans un litre d’eau distillée ou
déminéralisée.
- Porter lentement le milieu à ébullition sous agitation constante et l’y maintenir durant le temps
nécessaire à sa dissolution.
- Répartir en tubes ou en flacons.
- Stériliser à l’autoclave à 121°C pendant 15 minutes.
NOTA :
Une liquéfaction partielle de l’agar entraînera inévitablement une altération significative de la
consistance du gel du milieu solidifié, après stérilisation et refroidissement.
MODE D’EMPLOI
- Refroidir et maintenir le milieu à 44-47°C.
- Couler en boîtes de Petri stériles.
- Laisser solidifier sur une surface froide.
- Faire sécher les boîtes, couvercles entrouverts, à l’étuve.
- A la surface des boîtes ainsi préparées ou du milieu pré-coulé (BM120) ramené préalablement à
température ambiante, ensemencer en stries l’inoculum, à partir d’un milieu d’enrichissement
préconisé pour la recherche des Enterobacter sakazakii, tel que le bouillon au Laurylsulfate-
Tryptose modifié + Vancomycine (mLST + Vancomycine).
- Incuber à (44 ± 1)°C pendant (24 ± 2) heures.
LECTURE / INTERPRETATION
L’aspect des colonies est le suivant :
Microorganismes Caractéristiques des colonies
Enterobacter sakazakii Colonies bleu vert
Escherichia coli Colonies grises à violettes
Enterobacter spp., Klebsiella spp. Colonies grises à violettes
Bactéries à Gram positif Croissance inhibée
- Il est nécessaire de confirmer les colonies typiques au moyen de tests de confirmation appropriés
tels que : production de pigment jaune, tests biochimiques d’identification, etc.
NOTA :
Les souches d’Enterobacter sakazakii présentent généralement une pigmentation bleu vert très
caractéristique. Toutefois, il peut arriver qu’un certain nombre de cultures, étant faiblement
α-glucosidase-positives, soient confondues avec des microorganismes à Gram négatif non-cibles qui,
incorporant le cristal violet, présentent un aspect voisin.

3/4
Biokar Diagnostics – Rue des Quarante Mines – ZAC de Ther – Allonne – B.P. 10245 – F60002 Beauvais Cedex – France
Tél : + 33 (0)3 44 14 33 33 – Fax : + 33 (0)3 44 14 33 34 – www.biokar-diagnostics.fr
FORMULE-TYPE
(pouvant être ajustée de façon à obtenir des performances optimales)
Pour 1 litre de milieu :
- Tryptone ........................................................................................7,00 g
- Extrait autolytique de levure ..........................................................3,00 g
- Chlorure de sodium.......................................................................5,00 g
- Désoxycholate de sodium .............................................................0,60 g
- Cristal violet..................................................................................2,0 mg
- 5-bromo-4-chloro-3-indolyl,α-D-glucopyranoside.....................150,0 mg
- Agar agar bactériologique .......................................................... 14,40 g
pH du milieu prêt-à-l’emploi à 25°C : 7,0 ± 0,2.
CONTRÔLE QUALITE
- Milieu déshydraté : poudre beige.
- Milieu préparé : gélose violette.
- Réponse culturale typique après 24 heures d’incubation à 44°C :
Microorganismes Croissance
Caractéristiques des
colonies
Enterobacter sakazakii DSMZ 4485
Enterobacter sakazakii CIP 104951
Escherichia coli ATCC® 25922
Enterobacter cloacae ATCC 13047
Staphylococcus aureus ATCC 25923
bonne, score 2
bonne, score 2
bonne, score 1-2
bonne, score 2
inhibée, score 0
bleu vert
bleu vert
violettes
violettes
STOCKAGE / CONSERVATION
Milieu déshydraté : 2-30°C
- La date de péremption est mentionnée sur l’étiquette
- Milieu préparé en boîtes de Petri : 8 jours à 2-8°C à l’abri de la lumière (à titre indicatif).
Milieu pré-coulé en boîtes de Petri :
- Stocker entre 2 et 8°C, à l’abri de la lumière.
- La date de péremption est mentionnée sur l’étiquette.
PRESENTATION Code
Milieu déshydraté :
- Flacon de 500 g BK188HA
Milieu pré-coulé en boîtes de Petri (Ø 90 mm) :
- Coffret de 20 boîtes BM12008
REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES
MUYTJENS, H.L., van der ROS-van de REPE, J., and van DRUTEN, H.A.. 1984. Enzymatic profiles of Enterobacter
sakazakii and related species with special reference to the alpha-glucosidase reaction and reproducibility of the test system.
Journal of Clinical Microbiology, 20 : 684-686.

4/4
Biokar Diagnostics – Rue des Quarante Mines – ZAC de Ther – Allonne – B.P. 10245 – F60002 Beauvais Cedex – France
Tél : + 33 (0)3 44 14 33 33 – Fax : + 33 (0)3 44 14 33 34 – www.biokar-diagnostics.fr
SIMMONS, B.P., GELFAND, M.S., HAAS, M., METTS, L., and FERGUSON, J.. 1989. Enterobacter sakazakii infections in
neonates associated with intrinsic contamination of a powdered infant formula. Infection Control and Hospital Epidemiology,
10 : 398-401.
IVERSEN, C., DRUGGAN, P., and FORSYTHE, S.. 2004. A selective differential medium for Enterobacter sakazakii, a
preliminary study. International Journal of Food Microbiology, 96 : 133-139.
LEHNER, A., and STEPHAN, R.. 2004. Microbiological, epidemiological and food safety aspects of Enterobacter sakazakii.
Journal of Food Protection, 67(12) : 2850-2857.
XP CEN ISO/TS 11133-2 (V 08-104-2). Janvier 2004. Microbiologie des aliments. Guide pour la préparation et la production
des milieux de culture. Partie 2 : Guide général pour les essais de performance des milieux de culture.
GUILLAUME-GENTIL, O., SONNARD, V., KANDHAI, M.C., MARUGG, J.D., and JOOSTEN, H.. 2005. A simple and rapid
cultural method for detection of Enterobacter sakazakii in environmental samples. Journal of Food Protection, 68(1) : 64-69.
GURTLER, J.B., KORNACKI, J.L., and BEUCHAT, L.R.. 2005. Enterobacter sakazakii: a coliform of increased concern to
infant health. International Journal of Food Microbiology, 104 : 1-34.
ISO/TS 22964 – IDF/RM 210. Février 2006. Lait et produits laitiers. Détection de l’Enterobacter sakazakii.
SUPPORT PHOTO :
Référence : BK188HA, BM12008
Domaine d’utilisation : Recherche des Enterobacter sakazakii.
COMPASS® est une marque de SOLABIA S.A.S..
Les mentions portées sur les étiquettes sont prédominantes sur les formules ou les instructions décrites dans ce document.
Les informations et les spécifications contenues dans cette fiche technique ont été établies à la date du 2009-02-09.
Elles sont susceptibles d’être modifiées à tout moment, sans préavis.
Code document : BK188/F/2006-02 : 6.
Enterobacter sakazakii
COMPASS® Enterobacter sakazakii Agar
Réf : BM12008
Incubation : 24 heures / 44°C (en surface)
Caractéristi
q
ues : colonies bleu vert