Mémoire complet - Thèses et Mémoires

Université d’ORAN
Faculté des Sciences
Département de Biotechnologie
Mémoire de MAGISTER
en Biotechnologie
Option : Ecosystèmes microbiens complexes
Présenté par
Amaria HARMOUCHE
Intitulé
Devant le Jury :
Président : Pr. ZADI-KARAM Halima Université d’ ORAN
Examinateurs : Dr. DALACHE Fatiha Université de MOSTAGANEM
Dr. DRISSI Mourad Université de TLEMCEN
Pr. Baba Ahmed Mohamed Bey Université d’ ORAN
Rapporteur : Pr. KARAM Nour-Eddine Université d’ ORAN
Soutenue le : / / 2010
ETUDE DE L’ANTIBIORESISTANCE CHEZ 83 SOUCHES
AUTOCHTONES DE BACTERIES LACTIQUES

REMERCIEMENTS
J'exprime mes profonds remerciements au Pr. Karam Nour-Eddine, Professeur à
l’université d’Oran, qui a dirigé ce projet de recherche : je vous remercie pour votre écoute,
vos idées précieuses, votre disponibilité et, surtout, votre confiance.
Ensuite, je tiens à remercier chaleureusement Pr. ZADI-KARAM Halima, Professeur à
l’université d’Oran, qui a accepté de présider mon jury de soutenance et à qui je suis très
reconnaissante pour sa disponibilité et ses conseils précieux.
Je présente mes sincères remerciements aux Pr. Baba Ahmed Mohamed Bey, Professeur à
l’université d’Oran, Dr. DALACHE Fatiha, Maitre de conférences à l’université de
Mostaganem, et Dr. DRISSI Mourad, Maitre de conférences à l’université de Tlemcen, qui
ont bien accepté d’examiner ce travail. Merci encore au Dr. DALACHE Fatiha pour ses
discussions scientifiques et ses conseils.
J’adresse également mes remerciements :
A mon collègue Mohamed Merzoug pour sa disponibilité et son aide.
A tous les chercheurs et le personnel du Laboratoire de Biologie des Microorganismes et de
Biotechnologies (LBMB).
A tous mes collègues.
Et à toute personne qui a contribué de prés ou de loin à la réalisation de ce projet de
recherche.
Un merci tout spécial à ma famille et mes ami(e)s Assmaa, Wassila, Hayet, Fatima,
Mohamed, Abdeslem, Ali, Yasser, pour leur soutien constant, leur amour et leurs mots
d'encouragement qui m'ont permis de me rendre jusque là.

DÉDICACES
Aux membres de ma famille, qu’ils trouvent dans ce travail
le témoignage de toute ma gratitude et qu’il soit pour eux
le gage de mon amour infini
A tous ceux qui me sont chers, ils se reconnaîtront…….....
Amaria

S
So om mm ma ai ir re e
I
S OMMAIRE
Pages
Liste des tableaux
i
Liste des figures
ii
1. Introduction 1
1.1. Les bactéries lactiques 4
1.1.1. Définition et caractéristiques 4
1.1.2. Classification 5
1.2. Les antibiotiques 8
1.2.1. Modes et modalités d’action des antibiotiques 9
1.2.1.1. Les inhibiteurs de la synthèse du peptidoglycane 9
1.2.1.2. Les inhibiteurs de la synthèse protéique 11
1.2.1.3. Les inhibiteurs de la synthèse des acides nucléiques 12
1.2.1.4. Les inhibiteurs de la synthèse des folates 12
1.2.1.5. Les antibiotiques qui provoquent l’altération des membranes 13
1.2.1.6. Les antibiotiques agissant par inhibition compétitive 13
1.2.2. Usage des antibiotiques et ses conséquences 13
1.3. La résistance bactérienne aux antibiotiques 15
1.3.1. L’antibiorésistance chez les bactéries lactiques 16
1.3.1.1. Génétique de l’antibiorésistance chez les bactéries lactiques 16
1.3.1.2. Moyens du transfert des gènes de résistance 21
1.3.2. Mécanismes de résistance aux antibiotiques chez les bactéries Gram positives 23
1.3.2.1. Inactivation ou modification de l’antibiotique 24
1.3.2.2. Modification de la cible 26
1.3.2.3. Pompes à efflux actif 27
1.3.3. Les bétalactamases 29
1.3.3.1. Classification des bétalactamases 29
1.3.3.2. Les différents types de bétalactamases 31
1.3.3.3. Les bétalactamases des bactéries à Gram positif
32
2. Matériel et Méthodes
33
2.1. Souches bactériennes 34
2.2. Confirmation de l’appartenance des souches au groupe lactique et de leur pureté 35
2.3. Conservation des souches 35
2.4. Antibiogramme en milieu solide 35
2.5. Détermination des concentrations minimales d’inhibition des antibiotiques (CMI) 37
2.6. Recherche d’ADN plasmidique 38
2.6.1. Extraction d’ADN plasmidique 38
2.6.2. Electrophorèse sur gel d’agarose 39
2.7. Purification de l’ADN plasmidique par électroélution 39
2.8. Transformation de la souche Pediococcus sp. MA1 par électroporation 40
2.9. Recherche d’activité bétalactamase 41
2.9.1. Test de synergie 41
2.9.2. Test 3D 42

S
So om mm ma ai ir re e
II
3. Résultats et Discussion 43
3.1. Confirmation de l’appartenance des souches au groupe lactique et de leur pureté 44
3.2. Détermination de la sensibilité des souches aux différents antibiotiques testés 45
3.3. Détermination des concentrations minimales d’inhibition des antibiotiques (CMI) 63
3.4. Détection des plasmides des bactéries lactiques 66
3.5. Purification de l’ADN plasmidique 67
3.6. Transformation de la souche Pediococcus sp. MA1 68
3.7. Recherche d’activité bétalactamase
70
4. Conclusion et perspectives 72
5. Références bibliographiques 75
6. Annexe 90