Analyseur d`hématologie IDEXX LaserCyte–Cas cliniques et manuel
publicité
Analyseur d’hématologie IDEXX LaserCyte® Cas cliniques et manuel technique intro dot plot info_FR2.indd 1 08/12/11 18:06 intro dot plot info_FR2.indd 2 08/12/11 18:06 Notice concernant les droits de propriété Les informations contenues dans ce document peuvent faire l’objet de modifications sans préavis. Sauf mention contraire, les sociétés, noms et données utilisés dans les exemples sont fictifs. Aucune partie de ce document ne peut être reproduite ni transmise à quelque fin, sous quelque forme ou par quelque moyen (électronique, mécanique ou autre) que ce soit sans l’autorisation expresse écrite d’IDEXX Laboratories. Ce document et les produits mentionnés peuvent être couverts par des brevets, des demandes de brevets en cours, des marques commerciales, des droits d’auteurs ou d’autres titres de propriété intellectuelle ou industrielle d’IDEXX. À l’exception des droits expressément visés dans un contrat de licence écrit émanant d’IDEXX Laboratories, la possession de ce document ne confère aucun titre sur ces droits de propriété. © 2008 IDEXX Laboratories, Inc. Tous droits réservés. • 09-66107-00 - Décembre 2011 LaserCyte, Coag Dx, SNAP, 4Dx et qualiBeads sont des marques commerciales ou des marques déposées d’IDEXX Laboratories, Inc. aux Etats-Unis et/ou dans d’autres pays. VetAutoread est une marque commerciale de QBC Diagnostics, Inc. Tous les autres logos et noms de produits ou de sociétés sont des marques commerciales appartenant à leurs détenteurs respectifs. iii intro dot plot info_FR2.indd 3 08/12/11 18:06 iv intro dot plot info_FR2.indd 4 08/12/11 18:06 Table des matières Introduction. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . vii Cytométrie de flux laser. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 Technologie de l’impédancemétrie utilisée par la plupart des autres systèmes. . . . . . . . . . . . 2 Comprendre les graphiques de résultats. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 3 Exemple de rapport IDEXX interne à votre clinique. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 7 5 questions à se poser lors de l’interprétation de numérations de GR, GB et plaquettes. . . . . 8 Études de cas . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 11 Anémie hémolytique à médiation immune. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 12 Leucémie lymphoïde chronique . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 14 Pyomètre. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 16 Masse intestinale avec hémorragies chroniques. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 18 Gastro-entérite due à une ankylostomose et anémie régénérative secondaire. . . . . . . . 20 Anémie arégénérative secondaire à une insuffisance rénale. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 22 Éosinophilie et réticulocytose modérée secondaires à une infestation par des puces. . 24 Anémie régénérative secondaire à une infection à Mycoplasma. . . . . . . . . . . . . . . . . . . 26 Salmonellose et gastro-entérite. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 28 Anémie hémolytique avec présence de corps de Heinz, secondaire à une intoxication aux feuilles d’érable rouge . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 30 Pancytopénie secondaire à une Ehrlichiose. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 32 Anémie et leucopénie modérées, thrombopénie marquée secondaires à une piroplasmose. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 34 Technologie. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 37 Spécifications de l’analyseur d’hématologie IDEXX LaserCyte®. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 39 Principes d’analyse de l’analyseur LaserCyte®. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 40 Les codes de messages de l’analyseur LaserCyte®. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 42 Références. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 45 Classification des anémies. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 46 Formules leucocytaires. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 47 Imprécision de la formule leucocytaire réalisée manuellement chez le chien: variations dues au frottis, à l’observateur et au nombre de cellules comptées. . . . . . . . 48 Évaluation de l’analyseur LaserCyte: un analyseur d’hématologie à la clinique pour petits animaux. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 49 Comparaison des numérations réticulocytaires avec le volume globulaire moyen et la concentration corpusculaire moyenne en hémoglobine chez des chiens anémiques. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 50 Comparaison des résultats obtenus chez le chat pour les numérations des éosinophiles selon des méthodes manuelles et avec les analyseurs Hemavet® 950 et LaserCyte®. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 51 Numération leucocytaire totale chez le chat: comparaison des résultats obtenus par numération manuelle et six analyseurs de clinique . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 52 Évaluation d’un analyseur d’hématologie à la clinique chez des chiens et des chats sous chimiothérapie. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 53 Graphiques normaux de résultats. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 57 v intro dot plot info_FR2.indd 5 08/12/11 18:06 Tous nos remerciements au Professeur Cathy Trumel et à l’équipe des Consultants Diagnostic d’IDEXX France pour leur aide dans la relecture et la validation de ce document vi intro dot plot info_FR2.indd 6 08/12/11 18:06 Introduction Des avancées technologiques remarquables ont été réalisées dans le domaine des analyseurs d’hématologie durant les 10 à 20 dernières années. Ces avancées ont eu lieu simultanément à la réduction des coûts de production, ce qui a permis le développement pour le vétérinaire exerçant en clientèle d’une série d’analyseurs d’hématologie de pointe à un prix abordable. Dennis DeNicola, DVM, PhD, DACVP, Responsable vétérinaire en chef, Pathologiste clinique Le Dr DeNicola a passé sa thèse en 1978 et son doctorat en 1981, tous deux à l’université de Purdue, aux États-Unis. Il a travaillé pendant plus de 20 ans en tant qu’enseignant en pathologie clinique et chirurgicale. Il a en outre dirigé le laboratoire de pathologie clinique ainsi que le service de pathologie chirurgicale et de cytologie du laboratoire de l’école vétérinaire. Il a également été à la tête d’un service de pathologie privé pendant 15 ans. Orateur à plus de 150 conférences éducatives nationales et internationales, le Dr DeNicola est l’auteur ou le coauteur de plus de 150 publications dans divers aspects de la pathologie clinique vétérinaire. Les performances des analyseurs varient de manière significative en fonction de leur technologie sous-jacente et de la qualité des données générées. IDEXX a lancé en 2002, l’analyseur d’hématologie LaserCyte®, le premier analyseur d’hématologie, spécifique à l’exercice en clientèle vétérinaire, fondé sur la technologie de cytométrie de flux laser. L’analyseur LaserCyte possède des performances semblables aux analyseurs dont disposent les laboratoires d’analyses médicales à la fois en termes de technologie et du nombre de résultats. Comme toute instrumentation de pointe, elle offre au vétérinaire une amélioration en matière du nombre de résultats obtenus lors d’analyses hématologiques. Ces nouvelles informations lui permettent d’aller au-delà de sa formation existante en hématologie et d’obtenir de précieuses informations à partir de ces variables supplémentaires. Vous trouverez dans ce manuel les informations nécessaires pour mieux comprendre les bases de cette évolution technologique et pour faire bon usage de toutes les données désormais disponibles à partir de votre analyseur d’hématologie à la clinique. Vous serez également à même de tirer au mieux profit de toutes les données hématologiques recueillies et de les valider rapidement. Il est raisonnable de vous demander pourquoi vous auriez besoin d’un analyseur d’hématologie fondé sur la cytométrie de flux laser. De nombreuses cliniques ont survécu pendant des années sans analyseurs d’hématologie et beaucoup se sont fiées à des technologies moins avancées telles que celle proposée par l’analyseur d’hématologie IDEXX VetAutoread™ou l’un des nombreux analyseurs faisant appel à la technologie de l’impédancemétrie actuellement sur le marché. Toutefois, le vétérinaire a le même objectif de développement clinique que nous possédons au sein de nos laboratoires d’analyses médicales qu’ils soient privés ou universitaires: l’obtention de données de laboratoire de la plus grande qualité. Tandis que la technologie de l’impédancemétrie trie les cellules uniquement par la taille, un analyseur d’hématologie utilisant la cytométrie de flux laser évalue non seulement la taille et la forme d’une cellule, mais également la densité intracellulaire et la complexité de la cellule, ainsi que la lobularité et la densité nucléaires, fournissant ainsi une évaluation plus complète et plus précise. Ceci est particulièrement important avec un spécimen sanguin issu d’un animal malade, pour lequel des modifications de taille (par exemple des neutrophiles immatures ou des lymphocytes réactifs plus gros) sont souvent observées et peuvent conduire à une classification cellulaire erronée si l’évaluation ne repose que sur la taille des cellules. Nous espérons que les avantages de l’analyseur d’hématologie LaserCyte® décrits dans ce manuel sont clairs et concis et constitueront une ressource précieuse à votre disposition pendant de nombreuses années. Il est important de se rappeler que malgré toutes les avancées technologiques, l’examen du frottis sanguin au microscope RESTE crucial. Il s’agit toutefois d’un domaine où ces mêmes avancées permettent de réduire le temps passé à examiner ce dernier. En effet, un temps beaucoup plus important serait nécessaire avec des technologies plus basiques. L’examen du frottis sanguin, grâce à l’ensemble des données collectées avec l’analyseur LaserCyte, peut être réalisé en moins de 1 à 3 minutes au total. En effet, seules une validation rapide des données et une reconnaissance des changements morphologiques cellulaires sont nécessaires. Vous trouverez dans ce manuel douze études de cas cliniques qui montrent comment interpréter les données obtenues avec l’analyseur LaserCyte, et qui présentent différents graphiques de résultats. Il s’agit de cas réels auxquels vous pouvez être confrontés dans votre exercice quotidien. Vous trouverez également des exemples de photos de frottis sanguins qui corrèlent les données obtenues par l’analyseur. Nous espérons que ces cas contribueront à illustrer la valeur et l’utilité des données obtenues à l’aide d’un analyseur d’hématologie de pointe tel que l’analyseur IDEXX LaserCyte®. Dennis B. DeNicola, DVM, PhD, DACVP intro dot plot info_FR2.indd 7 08/12/11 18:06 viii intro dot plot info_FR2.indd 8 08/12/11 18:06 Cytométrie de flux laser L’analyseur d’hématologie LaserCyte® utilise la technologie dont dispose les laboratoires d’analyses médicales pour analyser les spécimens sanguins. En effet, l’analyseur émet un faisceau laser sur chaque cellule individuelle et quantifie la diffraction de la lumière sur quatre détecteurs distincts. Il mesure simultanément la durée nécessaire à une cellule pour se déplacer dans le faisceau laser. Complexité (diffraction petits angles vers le haut) Laser Extinction (absorption de la lumière) Taille (diffraction petits angles vers le bas) Granularité (diffraction à 90º ou “grand angle”) Diamètre cellulaire (temps de vol) Le temps de déplacement de la cellule est nommé «temps de vol». Il fournit des données sur le diamètre de la cellule. Pensez à une lampe torche comme analogie du laser. Une balle de golf passerait plus rapidement devant la lampe qu’un ballon de basket-ball. Tandis que le temps de vol, ou diamètre cellulaire, est mesuré, quatre autres détecteurs mesurent la quantité de lumière qui est diffractée pour chaque cellule, ou de la balle dans cette comparaison. En poursuivant l’analogie, la surface d’une balle de golf possède de nombreux creux et réfléchirait la lumière différemment de la surface lisse d’un ballon de basket-ball. La balle de golf serait ainsi classée comme une «cellule» différente du ballon de basket-ball. Les quatre détecteurs de l’analyseur LaserCyte mesurent essentiellement les mêmes caractéristiques qu’un biologiste évaluerait lorsqu’il examine un frottis sanguin. Il s’agit notamment de la taille, la complexité, la granulosité et l’absorption de lumière. Grâce à ces informations, l’analyseur LaserCyte peut analyser les globules rouges et, plus important, permet d’obtenir une numération réticulocytaire absolue. En outre, il est capable de donner une formule leucocytaire complète à cinq populations, fournissant ainsi les données nécessaires à un diagnostic plus complet. La cytométrie de flux laser offre de nombreux avantages par rapport aux autres méthodes •U n analyseur utilisant la technologie de cytométrie de flux laser permet d’évaluer de multiples variables (matériel nucléaire et cytoplasmique) concernant les hématies, les leucocytes et les plaquettes. Il fournit donc des numérations plus précises et plus fiables que les autres systèmes. •L es cellules ou les plaquettes agrégées peuvent être détectées et ignorées, ce qui permet d’éviter les interférences avec d’autres numérations cellulaires. •L es plaquettes de grande taille (souvent rencontrées chez le chat) peuvent être distinguées des hématies en raison de la différence de la diffraction de la lumière engendrée par les granules présents dans les plaquettes. •L es analyseurs utilisant la cytométrie de flux laser sont capables de compter rapidement de grands nombres d’hématies (> 200 000), ce qui est nécessaire pour obtenir des numérations réticulocytaires fiables. 1 intro dot plot info_FR2.indd 1 08/12/11 18:06 Technologie de l’impédancemétrie utilisée par la plupart des autres systèmes • Technologie plus ancienne fondée sur le principe de Coulter dans les années 1950. • Les cellules passent au travers d’une ouverture chargée électriquement qui génère une «impulsion». • Les numérations cellulaires sont déterminées par le nombre d’impulsions mesurées dans un volume connu de sang. • L’impulsion électrique est proportionnelle au volume cellulaire. Par conséquent, la taille seule permet l’identification des différents cellulaires. Cette technologie est intéressante dans la mesure où elle permet d’obtenir des résultats rapidement. •E lle fournit généralement des résultats relatifs aux hématies exceptés les réticulocytes, les leucocytes et un différentiel limité le plus souvent à 3 populations (granulocytes, monocytes et lymphocytes) sans différencier les différents granulocytes, ce qui masque des données importantes pour un diagnostic complet. Vide Circuit de détection – + Limites de l’impédancemétrie • Absence de données sur les réticulocytes • Parfois formule incomplète avec regroupement des granulocytes en une seule catégorie. • Capacité relativement médiocre à distinguer les différents leucocytes et à différencier leucocytes et érythroblastes (hématies nuclées). – La numération des leucocytes doit alors être corrigée en fonction du nombre d’hématies nucléés. • Chez le chat, le chevauchement de taille entre les plaquettes et les hématies entraîne une surestimation de la numération des hématies et une sous-estimation de la numération. • Seul le matériel nucléaire est analysé et non le matériel cytoplasmique. • Les agrégats plaquettaires peuvent être comptés comme leucocytes ; ceci est notamment problématique chez le chat. • Les numérations de leucocytes sont déterminées après lyse des hématies ; si l’intégralité des hématies n’est pas complètement lysée, les numérations de leucocytes sont faussement élevées. – Les hématies avec corps de Heinz ne sont pas lysés. Par conséquent, les spécimens sanguins pour lesquels des corps de Heinz sont présents en nombres élevés peuvent présenter des numérations leucocytaires, des valeurs de l’hémoglobinémie et des indices érythrocytaires (TGMH, CCMH) faussement élevés. – Les érythroblastes (érythrocytes anucléés immatures) sont plus résistants à la lyse et entraînent des numérations de leucocytes faussement élevées. 2 intro dot plot info_FR2.indd 2 08/12/11 18:06 Comprendre les graphiques de résultats Les graphiques de résultats sont une représentation visuelle de la numération formule sanguine. Ils sont utiles pour interpréter et vérifier rapidement les résultats. L’analyseur d’hématologie IDEXX LaserCyte propose ce type de graphiques, ainsi que l’analyseur ProCyte Dx. Ils sont uniques en ce sens. Les graphiques de résultats correspondent à des regroupements cellulaires Chaque point représente une cellule ayant été reconnue par le dispositif. Lorsqu’une numération formule est faite, deux temps analytiques se succèdent donnant naissance à des graphiques différents. L’un correspond à l’étude des hématies, des réticulocytes et des plaquettes ; l’autre à l’étude des leucocytes. Au sein de chaque graphique, on observe plusieurs nuages de points distincts correspondant à des types cellulaires distincts. Les nuages peuvent varier en taille, en forme, en position lors notamment d’atteinte de ces populations. Pour obtenir des informations complémentaires, il est alors nécessaire de regarder le frottis sanguin. Ainsi par exemple, si les nuages de points sont plus denses que la normale, il est probable qu’une numération pour cette population cellulaire en particulier soit augmentée et potentiellement observée lors de l’examen du frottis sanguin. Les graphiques donnent des informations importantes car les données numériques présentes sur le compte rendu de résultats du patient sont dérivées de ces mêmes graphiques. La lecture de ces graphiques permet ainsi de contrôler les résultats chiffrés et de comprendre ou suspecter d’éventuelles erreurs. Une augmentation de la numération des réticulocytes, une augmentation ou une diminution de la concentration des plaquettes sont nettement visibles sur les graphiques et reflètent ainsi les résultats numériques obtenus. Comment l’analyseur LaserCyte crée-t-il des graphiques? L’analyseur collecte des informations sur chaque cellule passant devant le faisceau laser (voir page 1) et examine les caractéristiques de chaque cellule selon une perspective multidimensionnelle. Par souci de clarté, ces résultats d’analyse vous sont présentés selon une vue bidimensionnelle. Graphique de résultats de l’absorption de la lumière en fonction de la granularité (Chien) Absorption de la lumière Doublets d’hématies Réticulocytes Hématies Fragments d’hématies Plaquettes 0 4096 Granularité 8192 12288 16384 Le graphique des hématies est composé d’un axe des abscisses et d’un axe des ordonnées. L’axe des ordonnées (axe vertical) mesure la quantité de lumière laser qui est absorbée par une cellule. Une hématie est plus grande donc qu’une plaquette et reste donc plus longtemps devant le faisceau laser absorbant plus de lumière. L’hématie plus grande que la plaquette est donc représentée plus haut sur l’axe des ordonnées que les plaquettes par exemple. L’axe des abscisses (axe horizontal) sur le graphique des hématies représente la granulosité de la cellule. Ainsi, dans le graphique relatif aux hématies, les réticulocytes sont les cellules les plus granuleuses car elles contiennent des filaments d’ARN colorés au nouveau bleu de méthylène. Par conséquent, l’évaluation de l’absorption de la lumière et de la granulosité participent à séparer de manière distincte les hématies, les réticulocytes et les plaquettes. Le graphique provenant d’un chien ayant une numération élevée de réticulocytes est donné à titre d’exemple à la page suivante. Notez la densité particulièrement élevée des points magenta correspondant aux réticulocytes et situés à la droite des globules rouges matures. 3 intro dot plot info_FR2.indd 3 08/12/11 18:06 Classification des globules rouges Graphique de résultats de l’absorption de la lumière en fonction de la granulosité (Chien) Absorption de la lumière Doublets d’hématies Réticulocytes Hématies Hématies Plaquettes Réticulocytes Doublets d’hématies Fragments de d’hématies Fragments d’hématies Plaquettes Granularité Lors de l’analyse des hématies, le LaserCyte distingue les populations suivantes: • Hématies (GR) – Les hématies sont principalement responsables du transport de l’oxygène vers les tissus et du transport du dioxyde de carbone hors de ces tissus. La population des hématies est représentée en rouge. • Plaquettes – Les plaquettes jouent un rôle essentiel dans les mécanismes de l’hémostase primaire et secondaire en participant à la coagulation. En raison de leur petite taille, elles restent moins longtemps devant le faisceau laser, absorbent moins de lumière et se trouvent donc plus près de la base de l’axe des ordonnées que les hématies. Les plaquettes sont représentées en bleu. • Réticulocytes – Les réticulocytes correspondent à des hématies immatures qui contiennent de l’ARN ribosomal. Le tube CBC5R contient du bleu de méthylène nouveau, qui précipite et colore l’ARN. Les réticulocytes sont aussi grands que les hématies matures les plus grandes et sont plus granuleux en raison de leur richesse en ARN. Ils se situent donc à la droite des hématies. Le graphique ci-dessus illustre un exemple de réticulocytose marquée. Sur les graphiques, les réticulocytes sont représentés en magenta. • Doublets d’hématies – Les doublets correspondent à deux hématies qui se trouvent à proximité l’un de l’autre lors de l’examen par le faisceau laser. Ils sont représentés sur le graphique en tant qu’évènement unique, mais comptés comme deux cellules. Ces événements sont représentés en vert. • Fragments d’hématies – Les fragments d’hématies sont des morceaux de membranes d’hématies issues de cellules rompues. Les particules ont une taille semblable aux plaquettes, mais réfléchissent la lumière de façon différente et sont donc situées à la gauche des plaquettes. Les fragments d’hématies sont représentés en rose. 4 intro dot plot info_FR2.indd 4 08/12/11 18:06 Classification des globules blancs Graphique de résultats de l’absorption de la lumière en fonction de la granularité (Chien) Absorption de la lumière Éosinophiles Neutrophiles Neutrophiles Monocytes Lymphocytes Éosinophiles Basophiles qualiBeads R7 GR non lysés Monocytes R7 Basophiles Lymphocytes GR non lysés qualiBeads Granularité Après avoir effectué la numération des hématies, des plaquettes et des réticulocytes, le LaserCyte réalise un cycle de rinçage, puis reaspire du sang pour l’étude des leucocytes. Le LaserCyte permet de distinguer les populations leucocytaires suivantes : •N eutrophiles – Les granulocytes neutrophiles correspondent généralement à la population de leucocytes la plus importante. Les neutrophiles constituent la première barrière de défense contre les infections et ont des propriétés de phagocytose. Ils correspondent généralement à la population la plus dense et comme vous le verrez plus loin dans les études de cas présentées dans ce manuel,une forte densité du nuage de points correspondant à cette population permet de suspecter un processus inflammatoire ou infectieux et justifier des examens supplémentaires. Les neutrophiles sont situés au dessus et à la droite de la population des monocytes, et sont représentés en violet sur le graphique. •M onocytes – Les monocytes sont responsables de la régulation de la réponse inflammatoire et de la phagocytose. Les monocytes sont généralement plus grands que les lymphocytes, et ils absorbent donc plus de lumière lors de leur exposition au faisceau laser. Ils présentent également une plus forte granulosité que les lymphocytes et se trouvent donc au dessus et légèrement à la droite de ces derniers. La population est représentée en rouge. •L ymphocytes – Les lymphocytes font partie du système immunitaire et sont importants pour la production d’anticorps et de cytokines. Les lymphocytes sont de petite taille en comparaison des autres populations de leucocytes. Puisque les petites cellules ont tendance à absorber moins de lumière, les lymphocytes se retrouvent sur la moitié inférieure de l’axe des ordonnées. La population de lymphocytes est représentée en bleu. •É osinophiles – Les éosinophiles sont associés aux allergies et aux infestations parasitaires en y répondant par libération d’histamine, suite à la fixation d’antigènes parasitaires ou d’allergènes sur les mastocytes. La granulosité de ces cellules varie beaucoup d’une espèce à une autre. Les différences de granulosité affectent la diffraction de la lumière et donc la position relative, d’une espèce à une autre, de cette population par rapport aux autres populations de leucocytes. Vous trouverez à la page 6 par exemple le graphique pour le cheval. Les éosinophiles sont représentés en vert. •B asophiles – Les basophiles contiennent à la fois de l’héparine, qui joue un rôle important dans la réponse inflammatoire car elle empêche la coagulation, et de l’histamine, qui est associée aux réactions d’hypersensibilité. Les basophiles constituent la plus petite des populations principales de globules blancs détectés par l’analyseur LaserCyte. Ces cellules se trouvent directement à la droite des monocytes et sous les neutrophiles. La population est très peu abondante. Elle est représentée en turquoise. Représentations ou évènements autres que ceux associés à la lignée des globules blancs •R 7 – Fragments de cellules suite à l’analyse des hématies. Le LaserCyte ne tient pas compte de cette population de cellules dans l’estimation de la numération des leucocytes. La population R7 est représentée en magenta. •G R non lysés – La population de globules rouges non lysés (uRBC) est composée d’hématies qui n’ont pas été lysés lors de l’analyse des leucocytes. La population des GR non lysés est représentée en orange. •T echnologie qualiBeads® – Chaque tube CBC5R contient une quantité connue de qualiBeads. Le LaserCyte compte les qualiBeads à la fois lors de l’analyse des hématies et des leucocytes en tant que méthode d’assurance qualité pour chaque analyse individuelle. Si l’analyseur dénombre une quantité trop élevée ou trop faible de particules qualiBeads, ce problème sera mentionné dans le rapport. La population de qualiBeads est représentée en gris. 5 intro dot plot info_FR2.indd 5 08/12/11 18:06 Autres espèces Chaque espèce possédant des cellules spécifiques et uniques, l’analyseur LaserCyte produira des graphiques différents correspondant à chaque espèce. Vous trouverez ci-après les graphiques types pour les espèces suivantes: chat, chien et cheval. GR Absorption de la lumière 1238 1238 8192 8192 4096 4096 0 4096 8192 12288 16384 0 Granularité GB 1634 Absorption de la lumière Chat 0 Cheval 4096 0 4096 12288 16384 12288 16384 12288 16384 Granularité GB 8192 4096 0 GR 0 4096 8192 Granularité GB –EOS équins 1634 1238 1238 8192 8192 4096 4096 0 4096 8192 12288 16384 0 Granularité 0 4096 8192 12288 16384 Taille Remarque: en raison des variations de granularité, les éosinophiles équins sont représentés sur un graphique bidimensionnel différent. Les graphiques GR et GB (EOS équins) peuvent être imprimés systématiquement sur la feuille de résultats (cf. procédure) Configuration -> rapport -> cocher la case “nuages LaserCyte” GB Absorption de la lumière Chien 8192 Diamètre cellulaire Absorption de la lumière 8192 Granularité 1634 1634 4096 1238 8192 0 0 1634 1238 0 GR 1634 Absorption de la lumière Absorption de la lumière 1634 1238 8192 Comment imprimer les graphiques de résultats : 4096 0 1. 2. 3. 4. Granularité 5. 6. 7. 8. À la page d’accueil, sélectionnez Instruments. Sélectionnez l’onglet LaserCyte. Appuyez sur le bouton Diagnostique LaserCyte. Lorsque le message «Avertissement: ces options sont des fonctions avancées de diagnostic. Elles ne doivent être utilisées qu’avec l’assistance des représentants du Support Technique d’IDEXX.» apparaît, appuyez sur «OK» pour continuer. Sélectionnez l’onglet Données. Appuyez sur Imprimer. Sélectionnez le patient pour lequel vous souhaitez imprimer des graphiques et appuyez sur la touche Voir Archives, puis OK. Sélectionnez l’analyse que vous souhaitez imprimer, puis appuyez sur Imprimer. 6 intro dot plot info_FR2.indd 6 08/12/11 18:06 Exemple de rapport IDEXX interne à votre clinique Patient: MandyDoctor: Species: Adult Canine Client: Elizabeth PrescottClient ID: 83921 Hématologie Mesure de la masse globale en globules rouges – gravité de l’anémie Description de la population de GR Mesure objective de la variation de taille des GR Mesure objective de la régénération Pour une interprétation précise, le nombre total de leucocytes doit être utilisé conjointement à la formule leucocytaire Formule leucocytaire complète à 5 populations essentielle pour une interprétation précise 12/5/2007 4:32:33 PM LaserCyte® GR = 6.39 M/μL ( 5.50 – 8.50) 6.27 HCT = 45.5 % ( 37.0 – 55.0) 44.9 HGB = 14.1 g/dL ( 12.0 – 18.0) 14.3 VGM = 71.1 fL ( 60.0 – 77.0) 71.6 TCMH =22.06 pg ( 18.50–30.00) 22.81 CCMH = 31.0 g/dL ( 30.0 – 37.5) 31.8 IDR ( 14.7 – 17.9) = 15.3 % %RETIC = 0.5 % RETIC = 30.8 K/μL ( 5.50 –16.90) 11.3 GB = 9.87 K/μL %NEU = 66.5 % 67.9 %LYM = 19.0 % 20.8 %MONO = 9.9 % 8.6 %EOS = 4.6 % 2.7 %BASO = 0.1 % 0.1 NEU = 6.56 K/μL ( 2.00 –12.00) 7.67 LYM = 1.87 K/μL ( 0.50 – 4.90) 2.35 MONO = 0.98 K/μL ( 0.30 – 2.00) 0.97 EOS = 0.45 K/μL ( 0.10 – 1.49) 0.30 BASO = 0.01 K/μL ( 0.00 – 0.10) 0.01 Nombre total de plaquettes PLT = 241. K/μL ( 175. – 500.) 325. VPM = 6.34 fL 9.23 Description de la population de plaquettes TDP = 17.3 % 16.1 PCT = 0.2 % 0.3 7 intro dot plot info_FR2.indd 7 08/12/11 18:06 5 questions à se poser lors de l’interprétation des numérations de GR, GB et plaquettes Source: Alan Rebar, Fred Metzger. Interpreting hemograms in cats and dogs. The Veterinary CE Advisor. December 2001. Numérations des hématies Les résultats chiffrés comprennent la numération des globules rouges, l’hématocrite, la concentration en hémoglobine, les indices érythrocytaires (VGM, TCMH, CCMH, IDR) et une numération réticulocytaire (en pourcentage et valeur absolue). 1. La masse érythrocytaire est-t-elle augmenté (polyglobulie), diminué (anémie) ou normale ? Les réponses à ces questions sont obtenues grâce à la lecture des variables appréçiant masse érythrocytaire (numération des hématies, hématocrite, hémoglobinémie) 2. En cas de diminution de la masse érythrocytaire, l’anémie est-elle régénérative ou arégénérative ? La régénération est déterminée par la numération absolue des réticulocytes 3. Si l’anémie est régénérative, quelle en est l´origine: des saignements ou une hyper-hémolyse ? • L´anamnèse, les signes et l’examen clinique sont des éléments clés pour identifier l´origine. • Les numérations des réticulocytes > 200 000/µl sont en faveur d’une hémolyse ; des numérations de réticulocytes plus faibles peuvent être associées à une hémolyse ou à des saignements. 4. Si l’anémie est arégénérative, l´origine peut-elle être déterminée sans ponction de moelle osseuse ? Anémie secondaire à une maladie inflammatoire, une infection par le virus FeLV, une carence en fer ou une insuffisance rénale. 5. En cas d’augmentation de la masse érythrocytaire, la polyglobulie est-elle relative ou absolue ? • La polyglobulie relative (causée par une déshydratation) est la forme la plus courante. • La polyglobulie absolue peut être primaire ou secondaire à une cause sous-jacente. Numérations de leucocytes Tous les leucocytes, y compris les neutrophiles, les lymphocytes, les monocytes, les éosinophiles et les basophiles, doivent être comptés. 1. Inflammation ? (La numération des leucocytes peut être basse, normale ou élevée) Une éosinophilie, une monocytose et/ou une déviation vers la gauche de la courbe d’Arneth (neutrophiles dont le noyau n’est pas segmentés) persistantes, seules ou en association, révèlent la présence d’une inflammation. 2. Stress ? (douleurs, syndrome de Cushing, cancer) • La lymphopénie est le signe le plus fréquent. • Une éosinopénie, une neutrophilie légère et/ou une monocytose légère sont possibles. 3. Augmentation de la demande en macrophages ? (corps étrangers, AHMI, cancer, infections fongiques, nécrose tissulaire) Monocytose. 4. Hypersensibilité systémique ? (parasites, dirofilariose, allergies, asthme) Éosinophilie et/ou basophilie persistante(s). 5. Modifications morphologiques des leucocytes sur le frottis sanguin ? • La présence de neutrophiles toxiques ou immatures (noyau non segmenté) sur le frottis sanguin est en faveur d’un processus inflammatoire. • La présence de lymphocytes réactionnels (Lymphocytes à grains, lymphocytes hyperbasophiles, lymphocytes dont le noyau est nucléolé) indique une stimulation antigénique systémique. 8 intro dot plot info_FR2.indd 8 08/12/11 18:06 Numérations plaquettaires Les résultats chiffrés comprennent la numération plaquettaire totale et les indices plaquettaires (VMP, IDP, PCT). 1. La numération plaquettaire est-elle normale ? • Une numération plaquettaire située dans l’intervalle de référence est essentielle pour assurer une bonne hémostase primaire et secondaire. 2. La numération plaquettaire est-elle diminuée ? • La présence d’agrégats plaquettaires (examen du frottis sanguin) peut conduire à des numérations plaquettaires faussement diminuées. • En cas de thrombopénie vraie, recherchez une baisse de la production (insuffisance de la moelle osseuse), une augmentation de consommation (processus de coagulation de type CIVD, phénomène inflammatoire), une destruction plus importante au niveau du sang périphérique (origine immunitaire, infectieuse), une séquestration (hypersplénisme). 3. Existe-t-il des signes cliniques de thrombocytopénie ? • Thrombopénie persistante avec des numérations plaquettaires très inférieures à la valeur de l’intervalle de référence puisque seules des numérations inférieures à (20 000-40 000/_l) sont nécessaires pour observer des pétéchies. • Si des pétéchies sont observées sans thrombopénie, explorez les fonctions plaquettaires avec notamment une exploration du temps de saignement de la muqueuse buccale (BMBT). 4. Une ponction de moelle osseuse est-elle nécessaire pour identifier l’origine de la thrombopénie ? • Dans la plupart des espèces, à l’exception du chat, des plaquettes de grande taille suggèrent une accélération de la thrombopoïèse au niveau de la moelle osseuse en réponse à une augmentation de la demande périphérique. La thrombopénie est le plus souvent d’origine périphérique (consommation ou destruction accrue) et rarement liée à une insuffisance médullaire. • Si une ponction de moelle osseuse est nécessaire, réalisez si possible à la fois un examen cytologique et histologique de moelle osseuse. 5. La numération plaquettaire est-elle augmentée ? • Rarement observée en médecine vétérinaire ; a confirmer par un examen du frottis sanguin. • Recherchez d’éventuelles hémorragies chroniques et les maladies myéloprolifératives (leucémie mégacaryocytaire). 9 intro dot plot info_FR2.indd 9 08/12/11 18:06 intro dot plot info_FR2.indd 10 08/12/11 18:06
