Biofilm
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ROYAUME DU MAROC MINISTÈRE DE LA SANTÉ DIRECTION RÉGIONALE TANGER-TÉTOUAN Biofilm et infections nosocomiales Pour plus de modèles : Modèles Powerpoint PPT gratuits Équipe de Biotechnologies et Microbiologie Appliquées, Powerpoint Templates Faculté des Sciences de Tétouan. Présentée par Dr Badia DOUHRI MD, PhD SSPSE, DRSTT Page 1 PLAN Introduction Biofilm ? mode de formation Résistance aux Antibiotiques Phytothérapie Expérimentation Matériel et méthodes Résultats Pour plus de modèles : Modèles Powerpoint PPT gratuits Conclusion Page 2 Introduction Pour plus de modèles : Modèles Powerpoint PPT gratuits Powerpoint Templates Page 3 Introduction Utilisation abusive et injustifiée d’antibiothérapie Adaptation de la bactérie (résistante) Antibiotiques inefficaces Pour plus de modèles : Modèles Powerpoint PPT gratuits Page 4 Introduction Résistances bactériennes Acquises Naturelles Patrimoine génétique Mutation chromosomique Diminution de Pour plus de modèles : Modèles Powerpoint PPT gratuits BIOFILM la perméabilité Modification de la cible Acquisition d'un (ou de plusieurs) gène Production d'enzymes Page 5 Biofilm ? Pour plus de modèles : Modèles Powerpoint PPT gratuits Powerpoint Templates Page 6 Définition • 65% des infections bactériennes chez l’Homme sont liées à des biofilms, • 50 à 60 % des infections nosocomiales y sont associées. Figure 1: Biofilm: plaque dentaire, calcification sonde urinaire ou drain de redon….. Pour plus de modèles : Modèles Powerpoint PPT gratuits Bactéries qui se développent en communauté sur une surface (sessiles) = Biofilm Page 7 Formation et développement du biofilm Étape 1 : attachement initial Étape 2 : attachement irréversible Étape 3 : maturation I du biofilm Étape 4 : maturation II Étape 5 : érosion et dispersion/ détachement autogène Figure 2: Pour plus de modèles : Modèles Powerpoint PPT gratuits Page 8 Formation et développement du biofilm Staphylococcus aureus Pasteurella multocida Corynebacterium renale Figure 3: Principales étapes de formation du biofilm de Staphylococcus epidermidis sur un implant transcutané (von Eiff et al., 2002). 1. Les bactéries adhèrent à la surface de l’implant par des interactions non spécifiques (forces de Van der Waals, interactions hydrophobes, adhésines présentes à la surface des cellules). 2. L’adhésion des bactéries s’effectue par reconnaissance spécifique de certains constituants du film de plasma formé sur la surface du cathéter (Heilmann et al., 2003). Pour plus de modèles : Modèles 3. Les bactéries se multiplient, produisentPowerpoint une matricePPT gratuits d’exopolymères pour former des communautés sessiles persistantes. Page 9 Bibliographie: recherches Contrôle positif Après 24 h d'exposition à l’ATB Figure 7: Réduction du nombre de S. epidermidis 1457 (biofilm) après de 24 h de traitement Pour plus de modèles : Modèles Powerpoint PPT(microscopie gratuits avec Farnésol (300µg/ml) électronique à balayage) F. Gomes, B. Leite, P. Teixeira and R. Oliveira, 2014. Strategies to control Staphylococcus epidermidis biofilms, Czech J. Food, Vol. 32, Page 10 No. 2: 137–144 Sci. Résistance bactérienne Pénicilline Méticilline S. Aureus pénicillino-résistant S. aureus 1950 1970 S. Aureus méticillino-résistant (MRSA) Vancomycine Pour plus de modèles : Modèles Powerpoint PPT gratuits Page 11 Phytothérapie Selon les statistiques de l’OMS en 2002, 80% de la population mondiale a recours à la médecine traditionnelle en matière de la santé primaire. 400 000 espèces végétales recensées dans le monde, 20 000 espèces sont citées dans la pharmacopée internationale, 5000 sont utilisées en industrie pharmaceutique OMS Stratégie pour la médecine traditionnelle (2002–2005) visant à garantir l'innocuité et l’efficacité de la phytothérapie, à promouvoir sonPowerpoint utilisation Pour plus de modèles : Modèles PPTrationnelle gratuits à fournir des critères de recherche pour son évaluation Page 12 Expérimentation: Matériel et méthodes Pour plus de modèles : Modèles Powerpoint PPT gratuits Powerpoint Templates Page 13 Matériel et méthodes Extraction des Huiles essentielles Séchage plante séchée (40°C) 24 à 48 h Hydrodistillation par appareil Clevenger Pour plus de modèles : Modèles Powerpointtype PPT gratuits Page 14 Matériel et méthodes Détermination de l’activité antibactérienne des huiles essentielles: Aromatogramme Technique de diffusion en puits Pour plus de modèles : Modèles Powerpoint PPT gratuits Page 15 Matériel et méthodes Détermination de l’effet bactériostatique et bactéricide LB inoculé par la bactérie Rapport=CMI/CMB Incubation + Résazurine Dilutions de l’HE CMI Contrôle négatif Détermination de la CMI méthode de microdilution Pour plus de modèles : Modèles Powerpoint PPT gratuits (milieu liquide) et CMB (milieu solide) CMB Page 16 Matériel et méthodes Sélection des HE Composition chimique Origanum elongatum Choix de 3 HE Effet antibactérien Souches bactériennes Origanum grosii S. aureus MBLA S. aureus CECT 976 S. aureus ATCC 25923 Thymus capitatus Pour plus de modèles : Modèles Powerpoint PPT gratuits Antibiotique: Vancomycine Page 17 Résultats Etude phytochimique Huile essentielle Composés majoritaires Pourcentages (%) Origanum elongatum Thymol γ-Terpinène Carvacrol 35,51 26,72 6,52 Origanum grosii Carvacrol p-Cymène Thymol 39,51 16,32 9,95 Thymus capitatus Carvacrol p-Cymène Thymol 70,92 6,34 0,38 Pour plus de modèles : Modèles Powerpoint PPT gratuits Page 18 Matériel et méthodes Détermination des concentrations minimales inhibitrices et bactéricides 100 µl HE allant de 4 % à 0,0625 % ou ATB 16 à 0,125 µg/ml Culture bactérienne dans TSB Incubation à 37° C pendant 24 h Étalement sur milieu TSA Incubation à 37° C pendant 24 h Absorbance à 570 nm Pour plus de modèles : Modèles Powerpoint PPT gratuits Détermination de la CMB Page 19 Matériel et méthodes Quantification de la formation du biofilm bactérien 100 µl Le milieu a été remplacé par du TSBG frais tout les 8 à 10 h durant ces 24 h d’incubation Culture bactérienne dans TSBG Incubation à 37° C pendant 24 h Lavage par PBS Absorbance à 492 nm Lavage H2 O 125 µl du cristal violet à 0,1 % Pour plus de modèles : Modèles Powerpoint PPT gratuits Page 20 Matériel et méthodes Détermination de la concentration minimale inhibitrice du biofilm (CIB) et de la concentration minimale d’éradication du biofilm (CEB) HE allant de 4 % à 0,0625 % ou ATB 16 à 0,125 µg/ml Absorbance à 570 nm Culture bactérienne dans TSB Incubation à 37° C pendant 24 h Raclage par un ensemenceur Incubation à 37° C pendant 24 h Etalement sur TSA Pour plus de modèles : Modèles Powerpoint PPT gratuits Détermination de laPage CEB21 Matériel et méthodes Effet sur la formation du biofilm HE allant de CMI à CMI/16 Culture bactérienne dans TSBG Le pourcentage relatif de la formation du biofilm Incubation à 37° C pendant 24 h Absorbance à 570 nm Lavage par PBS Lavage H2 O 125 µl du cristal violet à 0,1 % Pour plus de modèles : Modèles Powerpoint PPT gratuits Page 22 Matériel et méthodes Effet sur le biofilm formé Incubation à 37° C pendant 24 h Culture bactérienne dans TSBG (microplaques) Incubation à 37° C pendant 24 h HE allant de 8 CMI à CMI/4 Le pourcentage d’éradication du biofilm Mesure de la DO (t0) Absorbance à 570 nm Lavage par PBS Lavage H2 O 125 µl du cristal violet à 0,1 % Pour plus de modèles : Modèles Powerpoint PPT gratuits Page 23 Résultats Quantification de la formation du biofilm bactérien 1,2 1 DO 492nm 0,8 0,6 0,4 0,2 0 S.A. MBLA S.A. ATCC 25923 S.A. CECT 976 CN Souches bactériennes Absorbance (DO492nm) du biofilm des trois souches de référence (S. aureus aureusPowerpoint CECT 976 S. aureus ATCC 25923 ; CN= contrôle négatif) Pour plus deMBLA, modèles S. : Modèles PPT et gratuits Page 24 Résultats: Calcul de la CMI, CMB, CIB et CEB Sensibilité des cellules planctoniques et du biofilm à l'huile essentielle (HE) d’O. grosii (OG), d’O. elongatum (OE) et de T. capitatus (TC) et au Vancomycine (Vmy). Souche bactérienne CMI CIB CMB CEB (% v/v) / (µg/ml) (% v/v) / (µg/ml) (% v/v) / (µg/ml) (% v/v) / (µg/ml) Vmy 4 8 4 16 TC 0,25 0,5 0,5 1 OG 0,25 1 2 4 OE 0,5 2 1 >4 Vmy 4 8 4 >16 TC 0,25 0,5 0,5 1 OG 0,25 2 1 4 OE 0,5 1 0,5 2 Vmy TC 8 0,5 >16 1 >16 1 >16 2 OG 0,25 1 2 4 OE 0,5 2 1 HE ou ATB S. aureus MBLA S. aureus CECT 976 S. aureus ATCC 25923 Pour plus de modèles : Modèles Powerpoint PPT gratuits >425 Page Résultats: Effet sur la formation du biofilm Pour plus de modèles : Modèles Powerpoint PPT gratuits Pourcentage relatif de la formation du biofilm (% RFB) sous l’effet des trois HE de T. capitatus (TC), d’O. grosii (OG) et d’O. elongatum (OE) à différentes concentrations Page 26 de S. aureus MBLA , S. aureus ATCC 25923 et S. aureus CECT 976 Résultats: Effet sur le biofilm formé Pour plus de modèles : Modèles Powerpoint PPT gratuits Éradication du biofilm formé par S. aureus MBLA, S. aureus ATCC 25923 et S. aureus CECT 976, après traitement avec les trois différentes huiles essentielles à différentes Page 27 concentrations Conclusion Les huiles essentielles de T. capitatus, d’O. grosii et d’O. elongatum présentent un effet remarquable sur le biofilm bactérien après avoir éradiqué complètement les bactéries planctoniques à des CMI<CIB et CMB<CEB. Les huiles essentielles testées sont capable d’éradiquer les biofilms préformés ainsi que néoformés d’une façon dose dépendante. Le monde végétale source naturelle à exploiter Phytochimie et phytothérapie peut mener à une solution au problème de la formation de biofilms indésirables. Pour plus de modèles : Modèles Powerpoint PPT gratuits Page 28 Merci de votre attention Pour plus de modèles : Modèles Powerpoint PPT gratuits Page 29
