Terminale S Fiche Méthode – Réaliser une électrophorèse PRINCIPE Cuve à électrophorèse Bande de papier filtre Placées dans un champ électrique (entre une anode + et une cathode -, séparées par une solution conductrice), des molécules chargées électriquement migrent vers l’une des électrodes, de signe opposé à leur charge. Les protéines sont des polymères d’acides aminés. Chacun des 20 acides aminés est soit neutre, soit porteur d’une charge positive ou négative. La charge électrique d’une protéine est la somme des charges des différents acides aminés qui la constitue. PROTOCOLE 1. 2. ATTENTION Toujours manipuler la bande en la tenant par les tranches ou à l’aide d’une pince, car les traces de doigts peuvent limiter la migration. Immerger la bande dans la cuve pendant 10 minutes 3. Sortir la bande, la sécher entre deux feuilles de papier filtre Fixer la bande sur la plaque support (face mate absorbante vers le haut, coin coupé en bas à droite côté cathode). Les deux extrémités de la bande doivent tremper dans la solution tampon de la cuve La migration est d’autant plus importante que leur masse moléculaire est faible. OBJECTIF Détecter des variations de concentrations plasmatiques en protéines (par exemple en fonction d’un état immunitaire.) MATERIEL Solution conductrice tampon pH 9,2 (à ce pH basique, les fonctions acides sont ionisées COO-, ce sont donc des anions, et les fonctions bases sont neutres NH2) Différents colorants 4. Déterminer le côté (par rapport à l’anode ou la cathode) où doit être placé le dépôt 5. 6. Appliquer, à l’aide d’un cure-dents, une goutte de chacun des colorants. Déposer la lamelle dans le cristallisoir 7. Fermer la cuve 8. Régler la tension sur 160 V ; brancher les électrodes sur le générateur ; mettre sous tension. S’assurer que la diode rouge entre les 2 électrodes est allumée ; sinon, vérifier la fermeture de la cuve 9. Laisser migrer pendant 20 minutes. 10. Débrancher l’alimentation électrique. 11. Laisser sécher sur une plaque de verre. Les autres fiches méthodes utilisées en classe sont disponibles sur le site http://theosvt.free.fr bsavoye2011