Action de la vitamine et de Fantivitamine B6 sur le myocarde d

/. Embryol. cxp. Morph., Vol. 14, Part 1. pp. 53-61, August 1965
Printed in Great Britain
Action de la vitamine et de Fantivitamine B6 sur le
myocarde d'embryon de poulet cultive in vitro
par G. CONTI et G. MILIO1
Institut d'Histologie et d'Embryologie generate de VUniversite de Fribourg (Suisse)
AVEC TROIS PLANCHES
Nous avons essaye les effets de la vitamine (PX) et de l'antivitamine B6 (DPX)
sur des organes d'embryons de poulet cultives in vitro; et cela dans le but de voir
si Faction inhibitrice de la DPX se manifestait sur la croissance in vitro des
organes et si cette action inhibitrice eventuelle pouvait etre annulee, ou du moins
partiellement empechee, par l'adjonction simultanee de la vitamine B6 au milieu
de culture.
On a realise 512 explants de coeur d'embryons de poulet de
9 jours; le materiel
a explanter a toujours ete preleve sur le ventricule gauche. Les explants ont ete
cultives sur le milieu de culture mis au point par Wolff et Haffen en 1952 (milieu
standard). La DPX et la PX ont ete dissoutes dans du liquide de Tyrode et
ajoutees a differentes doses au milieu de culture. Les cultures ont ete maintenues
a l'etuve, a
38° C, et controlees tous les jours au stereomicroscope.
Les experiences ont ete divisees en 16 series dont chacune comportait 32
explants. Ceux-ci ont ete fixes dans du liquide de Bouin et colores
a Fhema-
toxyline-eosine. Les cultures destinees a l'etude de la reaction de la phosphatase
alcaline ont ete traitees selon la methode de Gomori.
Le schema complet du traitement est presente dans le Tableau 1.
RESULTATS
Etude morphologique
Structure normale du myocarde
Le coeur non cultive d'embryons de poulet de 9 et
13 jours (Planche 1, Fig. A)
montre des elements musculaires
qui, selon l'orientation de la coupe, se presentent
comme des elements ronds et d'aspect epithelial, ou bien comme des elements
allonges au sein desquels on peut parfois voir des myofibrilles paralleles; par
1
Adresse des auteurs: Institut d'Histologie et d'Embryologie generate, Universite de
Fribourg, Fribourg, Suisse.

54G. CONTI et G. MILIO
places, les myoblastes ressemblent encore, par leur aspect fusiforme, a des
elements conjonctifs. Les cellules en division mitotique sont toujours assez
nombreuses; la vascularisation est abondante. On ne reconnait pas, a cet age,
l'aspect anastomose syncytial. Entre l'age de 9 et
13 jours, on ne remarque pas
de difference sensible de structure.
rie 1 (controles)
„ 2 (traites)
,, 3
„ 4
» 5
„ 6
„ 7
„ 8 ,
,, 9
„ io
„ 11
,, 12
„ 13
„ 14
„ 15
„ 16 ,
rABLEAU
r 1
32 explants cultives sur milieu standard
DPX 40 y par explant
P
, 80y ,
, 120y ,
, 160y ,
X 2,5y ,
, 5y ,
, 10y ,
, 20y ,
, 40y ,
80 y ,
, 120y ,
, 160y ,
DPX-PX 1:1 (DPX: 160 y-PX: 160 y)
DPX-PX 1:10 (DPX: 160 y-PX: 16 y)
DPX-PX 1:100 (DPX: 160y-PX: l,6y)
Cultures de coeur sur le milieu standard
Sur le milieu standard, les fragments de myocarde vivent tres bien; meme
apres
4 jours de culture (Pianche i, Fig. B), l'aspect des cellules est parfaitement
conserve et les explants continuent a battre. Mais les elements cellulaires se
dedifferencient notablement en culture: ils prennent peu a peu un aspect fibro-
cytaire ou epithelioide, en perdant la morphologie d'elements allonges qu'ils
avaient au moment
de Pexplantation. La periode la plus delicate pour les explants
se situe au premier jour: les mitoses cessent presque completement et, par-ci,
par-la, on voit quelques signes de souffrance cellulaire; apres cette periode
initiale d'adaptation, le coeur reprend pleinement sa vitalite et Ton n'observe
jamais de signes de degenerescence. Par rapport au coeur non cultive, les mitoses
sont en nombre sensiblement inferieur.
Cultures de coeur sur le milieu standard
avec DPX
La dose de 40 y de DPX (Pianche 1, Fig. C) n'exerce aucune influence de-
favorable sur les cultures de coeur; parfois, on a seulement l'impression que la
dedifferenciation cellulaire est encore plus marquee par rapport aux cultures
standard.
La dose de 80 y commence a reveler des proprietes legerement toxiques: dans
les cultures de 3 ou 4 jours, on peut voir des elements presentant des signes
evidents de souffrance cytoplasmique (cytoplasme pulverulent ou fortement
eosinophile); mais ces elements restent toujours en nombre limite.
Les explants traites avec 120 y de DPX presentent, a parti r du troisieme et du

/. Embryol. exp. Morph. Vol. 14, Part 1
t A H
EXPLICATIONS DES PLANCHES
PLANCHE 1
Coeur d'embryons de poulet de controle, non cultive et cultive sur milieu standard; cultive sur
milieu standard avec DPX, PX et avec DPX-PX associees.
FIG. A. Coeur d'embryon de 13 jours, non cultive. HE, 200 x .
FIG. B. Coeur d'embryon de 9 jours, cultive sur milieu standard pendant 4 jours. L'image est
tres semblable a celle du coeur d'un embryon de 13 jours. HE, 200 x .
FIG. C. Coeur d'embryon de 9 jours cultive pendant 4 jours sur milieu standard avec 40 y de
DPX. HE, 300 x .
FIG. D. Coeur d'embryon de 9 jours cultive pendant 4 jours sur milieu standard avec 160 y de
DPX. HE, 300 x.
FIG. E. Coeur d'embryon de 9 jours cultive pendant 4 jours sur milieu standard avec 40 y de
PX. HE, 350 x.
FIG. F. Coeur d'embryon de 9 jours cultive pendant 2 jours sur milieu standard avec 160 y de
PX. HE, 500 x.
FIG. G. Culture de 96 hr. DPX-PX 160 y aa. HE, 300 x .
FIG. H. Culture de 96 hr. DPX 160 y-PX 16 y. HE, 300 x .
G. CONTI et G. MILIO {Facing page 55)

Action de Vantivitamine B$ sur le myocarde d'embryon 55
quatrieme jour de culture, des signes importants de degenerescence pulverulente
ou lipidique.
La dose de 160 y montre des effets toxiques encore plus marques: en effet, les
signes de degenerescence et de necrose augmentent parallelement a la duree de
la culture et atteignent le maximum vers le quatrieme jour (Planche 1, Fig. D).
Cultures de coeur sur le milieu standard avec PX
Avec la PX, nous avons du employer des dosages plus bas qu'avec la DPX
car nos premiers essais, avec 80 et 160 y, nous avaient montre que la PX a une
action toxique, pour les explants, nettement plus elevee que celle de la DPX aux
memes doses. Les doses de 2,5, 5 et 10 y sont bien tolerees par les explants.
Mais si Ton compare ces cultures agees de
4 jours avec les cultures analogues de
myocarde cultivees sur le milieu standard, on voit clairement que, sur le milieu
standard, les explants de coeur presentent une image nettement meilleure. Les
doses plus fortes (Planche 1, Figs. E & F), et cela deja a partir de 20 y, montrent
un effet toxique qui ne permet en aucune maniere la survie des explants.
En definitive, ces experiences nous montrent que la vitamine B6 est beaucoup
moins bien toleree par les explants de coeur que l'antivitamine, aux doses
correspondantes.
Cultures de coeur sur milieu standard
avec DPX-PX associees
Le but principal de ce groupe d'experiences etait de savoir si la dose nettement
toxique de DPX, c'est-a-dire la plus elevee que nous avions employee (160 y)
pouvait etre neutralised par des doses adequates de vitamine. A cet effet, nous
avons associe 160 y de DPX avec 160 y de PX (rapport 1:1); dans d'autres series
d'experiences, 160 y avec 16 y de PX (rapport 1:10) et dans d'autres enfin, avec
1,6 y de PX (rapport
1:100). Les resultats sont les suivants:
a. Rapport 1:1 {DPX 160 y + PX
160 y): L'association des deux substances a
ces doses elevees n'a fait qu'augmenter leur pouvoir toxique (Planche 1, Fig. G):
toutes les cultures, apres 2, 3 ou
4 jours, etaient presque totalement necrosees.
b. Rapport 1:10 {DPX
160 y + PX 16 y): L'image microscopique du myocarde
apres 24 heures de culture parait nettement meilleure que celle du myocarde
traite avec les deux substances separement (Planche 1, Fig. C & F.). Apres 2-3
jours, les explants sont encore discretement conserves et ils montrent une puls-
ation rythmique en culture; apres
4 jours, le coeur, tres dedifferencie, se presente
encore en etat passable de conservation, malgre que les signes de degenerescence
lipidique soient augmentes (Planche 1, Fig. H).
c. Rapport 1:100 {DPX 160 y + PX 1,6 y): Les explants cultives jusqu'au
quatrieme jour ne montrent pas de difference sensible par rapport a ceux du
groupe precedent.
Les resultats obtenus en ajoutant simultanement les deux substances au
milieu de culture permettent de ne resoudre que partiellement le probleme que

56 G. CONTI et G. MILIO
nous nous etions pose au debut de ces recherches, a savoir si la vitamine a la
propriete d'annuler, sur le coeur en culture, les effets toxiques de l'antivitamine.
L'adjonction de la vitamine a doses egales a la DPX ne fait qu'augmenter la
toxicite se manifestant par une necrose totale des explants a partir du deuxieme
jour. L'adjonction de la vitamine a 1'antivitamine a des doses sensiblement
inferieures (16 et 1,6 y) attenue sans doute
1'erTet toxique, sans toutefois le faire
totalement disparaitre. Bien entendu, il est difficile, voire meme impossible, en
se basant sur les simples resultats offerts par la culture d'organes, d'arriver a une
conclusion precise. La seule donnee valable que Ton peut tirer de nos experiences
est la suivante: chacune des deux substances a, en culture d'organes, et a certaines
doses, un effet deletere sur les explants de coeur d'embryon de poulet. Nous
n'avons jamais pu, par les doses que nous avons employees, faire disparaitre
totalement ces effets toxiques.
Etude histochimique:
la phosphatase alcaline
Nous avons etudie le comportement de la phospho-monoesterase alcaline sur
le coeur non cultive, sur le coeur cultive sur milieu standard seul ou avec ad-
jonction de DPX, de PX ou de DPX-PX
associees. Les resultats sont les suivants:
V activite phosphatasique
alcaline du myocarde d'embryons depoulet de 9 et 13 jours
Sur le myocarde de 9 jours, la reaction se manifeste deja apres 15 minutes
d'incubation, bien que de facon tres faible et discontinue; une heure apres, la
positivite augmente d'intensite et, apres 2 heures, elle devient encore plus mar-
quee. La reaction se stabilise d'une maniere definitive apres environ 4 heures
d'incubation. Les elements qui ne presentent pas de reaction positive a cette
periode restent negatifs meme apres 24 heures (temps d'incubation le plus long
que nous ayons employe). La reaction est surtout positive dans le noyau inter-
cynetique: le ou les deux nucleoles apparaissent comme des plages tres noires,
ce qui demontre une forte activite enzymatique; les grains de chromatine,
disperses dans le noyau, sont brun-noir, bien definis mais moins positifs que les
nucleoles. La membrane nucleaire et le sue ne sont pas visibles. Les cytoplasmes
sont negatifs. La reaction est egalement positive dans la paroi
des petits vaisseaux.
Les images observees dans
le myocarde d'embryons ages de 13 jours (Planche 2,
Figs. A et B) sont essentiellement les memes.
Cultures de
coeur sur le milieu standard
Sur les explants cultives, il n'a pas ete possible d'avoir un nombre sufnsant
de coupes permettant de realiser la reaction a des temps echelonnes. Nous avons
par consequent choisi la periode d'incubation qui permettait d'observer des
images de reaction nette: cette periode a ete de
12 hr. d'incubation.
Seuls les explants cultives pendant 24 hr. (Planche
2, Fig. C) rappellent quelque