Liste des abréviations

Université de François Rabelais TOURS
Ecole doctorale : Santé, Sciences et Technologie
Année Universitaire : 2000-2001
Pour l'obtention du Grade de Docteur de l'Université de Tours
discipline du doctorat: Science de la vie et de la santé
Option : Virologie Moléculaire
par
Fabien Dorange
Expression et caractérisation de quatre protéines du virus de la maladie de Marek homologues
aux protéines majeures de tégument VP22, VP16, VP13/14 et VP11/12 du virus HSV-1.
Présentée et soutenue le
19 décembre 2001
M.J.F. Vautherot
Jury :
Examinateur M. P.Coursaget
Rapporteur M. A. Epstein
Examinateur M. A. Jestin
Rapporteur M. E. Thiry
Président M.P. Roingeard
Directeur de thèse M. J.F. Vautherot
Liste des abréviations
aa : acide aminé
ADN Acide désoxyribonucléique

ARNm Acide ribonucléique messager
AcMo Anticorps monoclonal
Bluo-Gal halogenated indolyl-β-D-galactoside
CAPS 3-cyclohexyl-amino-1-propane-sulfonic acid
CESC Chicken Embryo Skin Cell
CEF Chicken Embryo Fibroblast
Da, kDa Dalton, kiloDalton
DNTP 2’-désoxynucléotide 5’-triphosphate
°C degré Celsius
EDTA Acide Ethylène Diamine Tétracétique
E.coli Escherichia coli
HEPES Acide N-2-hydroxyéthylpipérazine-N’-2-éthane sulfonique
HSV-1 Herpes Simplex Virus type 1
HVT Herpes Simplex of Turkey
IF(I) Immunofluorescence (indirecte)
ORF “Open Reading Frame” cadre ouvert de lecture
MTT 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide
MDV Marek’s Disease Virus
m.o.i multiplicité d’infection
NBT/BCIP Nitro Blue Tetrazolium/5-Bromo-4-Chloro-3-Indolyl Phosphate
Kb kilobase

PBS Phosphate Buffer Saline
PCR Polymerase Chain Reaction
SDS Sodium Dodécyl Sulfate
u.f.p unité formant page
SAB Sérum albumine bovine
SP Sérum de poulet
SVF sérum fœtal de veau

1 PARTIE BIBLIOGRAPHIQUE
1.1 LES HERPESVIRIDAE
La famille des herpesviridae est composée de virus enveloppés à ADN bicaténaire de 120 à 235
kpb présents dans la majorité des espèces animales (mammifères, reptiles, oiseaux, poissons,
amphibiens et mollusques) (Roizman et Sears, 1996). Bien qu’ayant intégré dans leur génome
des gènes codant pour des protéines impliquées dans le métabolisme des acides nucléiques
(thymidine kinase, dUTPase, etc), dans la synthèse de l’ADN (DNA polymérase, hélicase,
primase) et dans la modification des protéines (protéine kinase), les herpèsvirus sont dépendants
de la machinerie de transcription de l’hôte (ARN polymérase) ainsi que des enzymes impliquées
dans la réparation de l’ADN. La réplication de l’ADN viral s’effectue donc dans le noyau des
cellules infectées. Les herpèsvirus vont également contrôler la traduction, en détournant la
machinerie de traduction de l’hôte au profit de la synthèse des protéines virales, en réprimant
l’expression des gènes cellulaires et en inhibant la synthèse protéique cellulaire.
L’accomplissement de leur cycle de réplication se traduit par la libération de particules virales
infectieuses et par la lyse de la cellule infectée. Les herpèsvirus peuvent également entrer en
latence dans la cellule infectée en n’exprimant qu’un nombre restreint de gènes (Roizman et
Sears, 1996).
1.1.1 Structure des virions.
Les herpèsvirus forment un groupe relativement homogène en terme de structure. Le core
contenant l’ADN viral est inclus dans une capside icosahédrique d’une taille variable 100 à 110
nm de diamètre entourée d’un tégument et d’une enveloppe dans laquelle sont ancrées les
glycoprotéines virales (Fig. 1) (Roizman et Sears, 1996). La taille variable des virions (120 à 300
nm) pourrait être due à l’épaisseur du tégument qui diffère entre chaque virus (Granzow et al.,
2001).
Figure 1: Structure de l’herpèsvirus
simplex 1 (HSV-1) en microscopie
électrique en coloration négative (De Hans
Ackerman; adresse internet :
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/ICTVdb/Ima
Figure 1: Structure de
l’herpèsvirus simplex 1
(HSV-1) en microscopie
électrique en coloration
négative (De Hans Ackerman;
adresse internet :
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/
ICTVdb/Images/Ackerman/Anima
lvi/Herpesvi/025-01.htm).
tégument
capside
enveloppe
100 nm

ges/Ackerman/Animalvi/Herpesvi/025-01.htm).
fig1
1.1.1.1 Le core
Le core d’un virus contient l’ADN viral double brin sous la forme d’un tore à l’intérieur de la
capside. L’ADN viral, linéaire à l’intérieur de la capside, se circularise immédiatement dès son
entrée dans le noyau après sa sortie de la capside (Garber et al., 1993). La taille des ADN viraux
varie de 120 kb (varicella-zoster virus (VZV) à 235 kb (mouse cytomegalovirus, human
herpesvirus 8 (HHV8) et cytomegalovirus (CMV)). La structure des génomes varie
essentiellement en raison de la distribution de séquences répétées, ce qui permet de distinguer six
groupes de A à F (Fig. 2).
Figure 2 : Organisation génomique des herpèsvirus des groupes A à F (Roizman et Sears, 1996).
Les lignes horizontales représentent les régions uniques. Les domaines répétés sont figurés par
des rectangles et sont ainsi désignés : domaine répété gauche ou droit (LTR et RTR) pour le
groupe A, domaines répétés internes R1 à R4 pour le groupe C et domaines répétés internes et
terminaux (IR et TR) pour le groupe D. Les séquences terminales du groupe B sont composées
de séquences réitérées présentes en nombre variable à chaque extrémité du génome. Le nombre
de ces séquences réitérées peut varier entre les deux extrémités. Le groupe E est composé d’une
séquence unique longue (UL) et d’une séquence unique courte (US) délimitées par des séquences
répétées internes et externes (TRL, TRS, IRL et IRS). Aucune répétition terminale n’a été décrite
pour le sous-groupe F.
fig2
L’action de détergent non ionique (NP-40) seul ou en conjonction avec des solutions de force
ionique élevée a permis de différencier chaque élément structural (enveloppe, tégument et
capside), de les purifier et d’en déterminer la composition protéique (Spear et Roizman, 1972)
(Lemaster et Roizman, 1980) (McLauchlan et Rixon, 1992). Le détergent non-ionique NP-40
seul permet de séparer les glycoprotéines de l’ensemble tégument-capside ; l’augmentation de la
molarité en NaCl permet la séparation des protéines de tégument de la capside (Fig. 3). Des
études plus récentes portant sur la séparation des différents éléments mettent en évidence des
interactions résistantes aux forces ioniques entre certaines protéines de tégument et la capside
(Ojala et al., 2000).