Origine et principes généraux

Présentation du Dr Hanna SOVALAT
de l’Institut de Recherche en Hématologie et
Transplantation –MULHOUSE
stage PAF : Cytométrie en flux du 26/11/07

Origine de la cytométrie en flux
1. Originalité de la méthode:
–Observation des cellules circulantes dans un flux liquide qui
permet de les aligner l’une derrière l’autre (séparation d’au
moins 1mm) et facilite ainsi la distinction de chacune par
rapport aux autres.
–Les cellules défilent à grande vitesse (plus de 30km/h)
devant une source lumineuse (un laser: argon, krypton) ou
une lampe (mercure).

Origine de la cytométrie en flux
2. Historique:
24 Août 1934 à Montréal: Naissance de la cytométrie en flux,
premier appareil applicable au comptage des cellules est décrit
par Andrew Moldavan:
«…un fin tube capillaire, allongé à la flamme est placé sous
l’objectif d’un microscope.
Les cellules en suspension dans l’eau (globules rouges ou
levures) circulent sous pression dans le capillaire.Un
microcapteur photo-électrique est ajusté sur l’oculaire et
connecté avec un appareil de mesure.
Le but de l’expérience est d’obtenir que chaque cellule passant
dans le tube soit prise en compte par le détecteur… »

Origine de la cytométrie en flux
De 1949-1953: Le compteur devient un analyseur.
–Application de la propriété qui consiste en 2 flux laminaires
coaxiaux de ne point se mélanger immédiatement, pour
réaliser un système dans lequel la gaine interne contient les
cellules, et le flux externe tient le rôle de liquide
d’entraînement de l’ensemble du capillaire liquide.
– La présence d’une cellule dans le milieu (flux de liquides
ionisés) fait varier l’impédence proportionnellement au
volume cellulaire
•Application: Mesure du volume de la cellule.

Origine de la cytométrie en flux
A partir de 1965: Quantification de signaux optiques grâce à
l’apparition des photomultiplicateurs.
A partir de 1969: Utilisation du laser comme source lumineuse.
Permet une meilleur focalisation du faisceau lumineux sur la
cellule.
La monochromaticité et la forte puissance du laser concentré sur
une faible surface permettent d’éxcité des molécules
fluorescentes spécifiquement fixées sur des composants
cellulaires.