Origine et principes généraux
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Présentation du Dr Hanna SOVALAT de l’Institut de Recherche en Hématologie et Transplantation – MULHOUSE stage PAF : Cytométrie en flux du 26/11/07 Origine de la cytométrie en flux 1. Originalité de la méthode: – Observation des cellules circulantes dans un flux liquide qui permet de les aligner l’une derrière l’autre (séparation d’au moins 1mm) et facilite ainsi la distinction de chacune par rapport aux autres. – Les cellules défilent à grande vitesse (plus de 30km/h) devant une source lumineuse (un laser: argon, krypton) ou une lampe (mercure). Origine de la cytométrie en flux 2. Historique: 24 Août 1934 à Montréal: Naissance de la cytométrie en flux, premier appareil applicable au comptage des cellules est décrit par Andrew Moldavan: « …un fin tube capillaire, allongé à la flamme est placé sous l’objectif d’un microscope. Les cellules en suspension dans l’eau (globules rouges ou levures) circulent sous pression dans le capillaire.Un microcapteur photo-électrique est ajusté sur l’oculaire et connecté avec un appareil de mesure. Le but de l’expérience est d’obtenir que chaque cellule passant dans le tube soit prise en compte par le détecteur… » Origine de la cytométrie en flux De 1949-1953: Le compteur devient un analyseur. – Application de la propriété qui consiste en 2 flux laminaires coaxiaux de ne point se mélanger immédiatement, pour réaliser un système dans lequel la gaine interne contient les cellules, et le flux externe tient le rôle de liquide d’entraînement de l’ensemble du capillaire liquide. – La présence d’une cellule dans le milieu (flux de liquides ionisés) fait varier l’impédence proportionnellement au volume cellulaire • Application: Mesure du volume de la cellule. Origine de la cytométrie en flux A partir de 1965: Quantification de signaux optiques grâce à l’apparition des photomultiplicateurs. A partir de 1969: Utilisation du laser comme source lumineuse. Permet une meilleur focalisation du faisceau lumineux sur la cellule. La monochromaticité et la forte puissance du laser concentré sur une faible surface permettent d’éxcité des molécules fluorescentes spécifiquement fixées sur des composants cellulaires. Origine de la cytométrie en flux 3. Caractéristiques principales du cytomètre d’aujourd’hui: A. Un cytomètre est composé de 4 systèmes majeurs: 1. Fluidique 2. Optique 3. Electronique 4. Analyse B. En option: Tri Principaux éléments d’un cytomètre en flux Principaux éléments d’un cytomètre en flux A.1/ Système fluidique: Injection de l’échantillon Principaux éléments d’un cytomètre en flux A.1/ Système fluidique Principaux éléments d’un cytomètre en flux A.2/ Système optique: Illumination et circuit optique Principaux éléments d’un cytomètre en flux A.3/ Système électronique: Transformation des signaux optiques en signaux électriques Principaux éléments d’un cytomètre en flux A.4/ Système électronique: Conversion des signaux électriques en signaux numériques Principaux éléments de la cytométrie en flux B/ Option: Tri cellulaire Principaux éléments d’un cytomètre en flux B/ Option: Cytomètre en flux avec cloneur Les principaux paramètres analysés et leurs significations biologiques 1. Diffusion de la lumière à petit angle 2. Diffusion de la lumière à angle droit (90°) 3. La fluorescence Les principaux paramètres analysés et leurs significations biologiques 1. Diffusion de la lumière à petit angle 2. Diffusion de la lumière à angle droit (90°) Les principaux paramètres analysés et leurs significations biologiques Les principaux paramètres analysés et leurs significations biologiques Les principaux paramètres analysés et leurs significations biologiques Les principaux paramètres analysés et leurs significations biologiques 3. Fluorescence: C’est une propriété des fluorochromes qui transforme la lumière incidente en radiation lumineuse de longueur d’onde supérieure. Les principaux paramètres analysés et leurs significations biologiques Les principaux paramètres analysés et leurs significations biologiques Les principaux paramètres analysés et leurs significations biologiques Fluorochromes spécifiques d’éléments cellulaires Les principaux paramètres analysés et leurs significations biologiques Les principaux paramètres analysés et leurs significations biologiques Les principaux paramètres analysés et leurs significations biologiques
