Transfert d`un phénotype d`un organisme à un autre

Transfert d’un phénotype
d’un organisme à un autre

Introduction
On veut introduire un plasmide
contenant la séquence d’ADN codant
pour la protéine GFP dans des bactéries
pour qu’elles acquièrent les
caractéristiques de fluorescence de la
GFP.

GFP Gène de
résistance à la
Kanamycine
1 : ADN Génomique
2 : Plasmides
Extraction du plasmide
de la bactérie
Insertion des gènes codant pour la
fluorescence (GFP) et pour la
résistance à la kanamycine
Extraction et modification du plasmide
On extrait le plasmide contenant une part
de l’ADN de la bactérie. Il est utilisé
comme outil génétique car il est
facilement manipulable.
On insère dans le plasmides la séquence
d’ADN codant pour la protéine GFP et celle
codant pour la résistance à la Kanamycine.
La kanamycine sera ajoutée au milieu de
culture des bactéries afin de tuer toutes
celle qui n’ont pas intégré le plasmide et ne
sont donc pas résistantes à celle-ci

Obtention de bactéries compétentes
CaCl2
Bactéries
Le CaCl2crée des pores dans la paroi
des bactéries afin d’y laisser pénétrer
les plasmides.
Ajout des plasmides
Bactéries contenant le
plasmide modifié
On crée un choc thermique pour
refermer les pores de la paroi
42°
Bain Marie
On rajoute ensuite du milieu LB puis on fait incuber
les bactéries à 37° pendant 30 minutes afin de les
laisser proliférer.

Etalement des bactéries
On étale les bactéries
obtenues précédemment
sur un milieu LB
contenant de la
kanamycine.
La kanamycine détruira
toutes les bactéries
n’ayant pas le plasmide
résistant à l’antibiotique
et donc pas la GFP.
Cela permet donc de ne
sélectionner que les
bactéries ayant intégré
le plasmide contenant
l’ADN qui code pour la
GFP.
Milieu LB
Témoin Contenant
Ampiciline
Contenant
Kanamycine
Bactéries
Contenant le plasmide codant
pour la GFP et résistante à la
kanamycine.
Sans plasmide et résistante à
la kanamycine.
Contenant un plasmide non
modifié
On laisse incuber les bactéries durant la nuit.
L’ampiciline a détruit toutes les bactéries car elles ne possèdent pas de résistance à cet
antibiotique.
Les bactéries qui se sont développées prouvent que le plasmide à bien été intégré par les
bactéries car celles-ci ont résisté à l’antibiotique.
Les bactéries se sont développées comme on l’attendait, elle sont bien résistantes à la
kanamycine.
L’ampiciline a détruit les bactéries car elles ne possédaient aucune résistance à un
antibiotique.
Ces résultats ne concordent pas avec les résultats attendus, ils peuvent provenir d’une
résistance naturelle à l’antibiotique ou d’un antibiotique défaillant, voire d’une erreur de
manipulation.