Transfert d`un phénotype d`un organisme à un autre

Transfert d’un phénotype
d’un organisme à un autre

Introduction
On veut introduire un plasmide
contenant la séquence d’ADN codant
pour la protéine GFP dans des bactéries
pour qu’elles acquièrent les
caractéristiques de fluorescence de la
GFP.

GFP Gène de
résistance à la
Kanamycine
1 : ADN Génomique
2 : Plasmides
Extraction du plasmide
de la bactérie
Insertion des gènes codant pour la
fluorescence (GFP) et pour la
résistance à la kanamycine
Extraction et modification du plasmide
On extrait le plasmide contenant une part de l’ADN
de la bactérie. Il est utilisé comme outil génétique
car il est facilement manipulable.
On insère dans le plasmides la séquence d’ADN
codant pour la protéine GFP et celle codant pour la
résistance à la Kanamycine. La kanamycine sera
ajoutée au milieu de culture des bactéries afin de
tuer toutes celle qui n’ont pas intégré le plasmide
et ne sont donc pas résistantes à celle-ci

Obtention de bactéries compétentes
CaCl2
Bactéries
Le CaCl2 crée des pores dans la paroi
des bactéries afin d’y laisser pénétrer
les plasmides.
Ajout des plasmides
Bactéries contenant le
plasmide modifié
On crée un choc thermique pour
refermer les pores de la paroi
42°
Bain Marie
On rajoute ensuite du milieu LB puis on fait incuber
les bactéries à 37° pendant 30 minutes afin de les
laisser proliférer.

Etalement des bactéries
On étale les bactéries
obtenues précédemment
sur un milieu LB
contenant de la
kanamycine.
La kanamycine détruira
toutes les bactéries
n’ayant pas le plasmide
résistant à l’antibiotique
et donc pas la GFP.
Cela permet donc de ne
sélectionner que les
bactéries ayant intégré
le plasmide contenant
l’ADN qui code pour la
GFP.
Milieu LB
Témoin Contenant
Ampiciline
Contenant
Kanamycine
Bactéries
Contenant le plasmide codant
pour la GFP et résistante à la
kanamycine.
Sans plasmide et résistante à
la kanamycine.
Contenant un plasmide non
modifié
On laisse incuber les bactéries durant la nuit.