Le choc septique chez la souris

Les réponses macro et microcirculatoires et la production de NO
hépatique induits par le choc
septique chez la souris.
Maître de stage : Jeanne-Marie Bonnet-Garin
Tuteur universitaire : Robert Bonvallet2
Edouard LEROY L3 (S6)
Licence Sciences et Technologies
mention Biologie, parcours Physiologie
UE « conduite de projet »
1
1ENVL
laboratoire de Physiologie,
INSERM ERI 22 : Agressions vasculaires et réponses tissulaires.
1,avenue Bourgelat
69280 Marcy l'Etoile
2UCBL
Batiment Raphael Dubois
43 Boulevard du 11 NOVEMBRE 1918
69622 VILLEURBANNE CEDEX
Problématique - contexte théorique :
• Sepsis = réponse systémique à une infection bactérienne,
endotoxique ou fongique
• Choc septique = défaillance circulatoire aiguë
• Pronostic vital = sombre : hypotension général et baisse de la
perfusion des organes résistantes aux solutés de remplissage
et aux dérivés adrénergiques
• Monoxyde d’azote (NO) impliqué :
– 3 NO synthases dont 1 inductible. La NOS inductible s’active lors
du sepsis
– Perrella et al. : TGF-β permettrait de diminuer les effets délétère du
NO
• Etude sur les effets du TGF-β (thèse en cours de rédaction)
– Première partie : réponses marcro et micro-circulatoires et la
production de NO hépatique induites par le choc septique chez la
souris, provoqué par une administration de LPS
Hypothèses :
• L’administration de lipopolysaccharides (LPS), endotoxines de
bactéries à Gram négatif, provoque un sepsis puis un choc
septique.
• Le sepsis puis le choc septique provoque une diminution du
débit.
• La cinétique de la chute de débit n’est pas la même au niveau
de la circulation générale et de la perfusion tissulaire.
• La production de NO hépatique augmente après
l’administration de LPS.
Méthodes
Procédure chirurgicale
Anesthésie : Isoflurane/O2
– Induction : richesse du mélange à 2%
– Entretien : richesse du mélange à 0,6%
Préparation chirurgicale :
Installation
Laparotomie
Appareillage de l’animal :
– Dilacérer le péritoine
– Installer la sonde débitmétrique
Induction du choc septique
• Administration de LPS
(QSP 0,1 mL) :
– G1 (n=3) : 60 mg/kg
– G2 (n=2) : 80 mg/kg
– G3 (n=3) : 100 mg/kg
• Administration de sérum
physiologique (NaCl 9‰) :
– G0 (n=4) : 0,1 mL
Paramètre enregistré :
Le débit aortique
Tests statistiques :
• Kruskal-Wallis : test d’identité non
paramétrique (pour plus de 2 échantillons)
• Mann-Whitney : test d’identité non
paramétrique (pour 2 échantillons)
Résultats :
• Durée de la survie des animaux
• Évolution du débit aortique en fonction du
temps après administration du produit (sérum
physiologique ou LPS)
Durée de la survie des animaux après
administration de LPS
Temps (min)
Grpe (dose reçue)
42
72
107
74
61
41
54
97
G1 (60 mg/kg)
G1 (60 mg/kg)
G1 (60 mg/kg)
G2 (80 mg/kg)
G2 (80 mg/kg)
G3 (100 mg/kg)
G3 (100 mg/kg)
G3 (100 mg/kg)
G1 : 74 min ± 9
G2 : 68 min ± 7
G3 : 64 min ± 17
Résultats présentés : moyennes ± SEM
(Standard Error of the Mean = écart type ÷
racine carré de l’effectif)
Figure 1. Tableau présentant les durées
de survie des animaux après l’administration
de LPS et en fonction de la dose de reçue.
Variation du débit
aortique (%)
Réponse macro-circulatoire à
l’administration de LPS
120
Administration du produit à t=5min
110
100
90
80
*
*
70
G0 (n=4)
G1 (n=3)
60
G2 (n=2)
*
50
G3 (n=3)
40
30
20
10
Temps (min)
0
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
110
Figure 2. Evolution du débit aortique chez la souris après administration de lipopolysaccharides à
60 mg/kg (G1), 80 mg/kg (G2), 100 mg/kg (G3) ou de sérum physiologique (G0) (0,1 mL NaCl 0,9%).
Les valeurs présentées sont les moyennes par période de 5 min ± SEM (standard error of the mean).
Discussion
• Modèle animale :
– L’anesthésie :
• est induite rapidement
• provoque un faible biais (12 % ± 7 de diminution
observée dans le groupe témoin)
– Les effets du LPS sont observés rapidement
– Le coût initial et d’entretien est faible
– Il est possible d’obtenir des animaux
transgéniques pour effectuer des investigations
plus poussées sur la voie du TGF-β
• Intérêt des lipopolysaccharides :
– Effets systémiques rapides
– Effets durables entrainant la mort de l’animal
• Choix anesthésique :
– Induction avec une richesse du mélange
Isoflurane/02 à 2 %
– Entretien avec une richesse du mélange
Isoflurane/02 à 0,6 %
=> Richesse plus faible que dans la littérature
(sans diminuer le confort de l’animal) permet de
diminuer le biais dû aux effets de l’Isoflurane
Avancées et perspectives
• Avancées :
– Intérêt du modèle murin confirmé
– Intérêt du LPS confirmé
– Protocole anesthésique affiné
• Perspectives :
– Résultats, en parallèle, de la perfusion hépatique
– Résultats de la production de NO hépatique
–Utilisation de souris KO pour le TGF-β dans certains
tissus
– Test d’un médicament (Tamoxifène®) activateur de la
voie du TGF-β
Amélioration du pronostic vital des patients en état
de choc septique
MERCI DE VOTRE
ATTENTION