Pourcentage de T reg et taux de CD4

Expression du pourcentage des cellules T régulatrices
+
high+
CD4 CD25
indépendante du taux de CD4 chez les sujets VIH-2
Djibril Wade1, Makhtar Camara1, Mbacke Sembene2, Ibrahima Ndiaye3, Pascale Ondoa4, Cris Vereecken4, Moustapha Mbow1, Abdoul Aziz Diallo1, Marema Fall1, Geraldine Daneau4,
Papa Alassane Diaw1, Farba Karam1, Luc Kestens4, Souleymane Mboup1 et Tandakha Ndiaye Dieye1
1 Unité
d’Immunologie du Laboratoire de Bactériologie Virologie, CHU Le Dantec, Dakar, Sénégal ; 2 Département de Biologie Animale, Faculté des Sciences et Techniques, Université Cheikh Anta Diop,
Dakar, Sénégal, 3 Service des Maladies Infectieuses, CHU Fann, Dakar, Sénégal; 4 Laboratoire d’Immunologie, Départment de Microbiologie, Institut de Médecine Tropicale, Anvers, Belgique.
Pour correspondance : Djibril WADE ; E-mail: [email protected]
Matériel et Méthodes
Introduction
La pandémie du SIDA est causée par deux rétrovirus: les virus de l’immunodéficience humaine de type 1 (VIH-1) et
de type 2 (VIH-2). L’infection à VIH est associée à une baisse du taux des lymphocytes T CD4+ et une activation
chronique du système immunitaire. Cette activation est régulée entre autres par les cellules T régulatrices
CD4+CD25high+ (T reg). Ces cellules T reg possèdent des propriétés inhibitrices vis-à-vis des réponses spécifiques des
cellules T CD4+ et T CD8+ dirigées contre le VIH.
Objectifs de l’étude
 Evaluer l’impact de l’infection à VIH sur l’expression des cellules T reg ;
 Déterminer la corrélation entre l’expression des cellules T reg et le taux de lymphocytes T CD4+ ;
 Comparer l’expression des cellules T reg entre les patients infectés par le VIH-1 et ceux infectés par le VIH-2 .
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25 patients infectés par le VIH-2 et 76 patients infectés par le VIH-1 ont été inclus dans cette étude.
30 individus sains VIH-séronégatifs ont été recrutés comme témoins.
Critères d’inclusion : Adulte mono infecté par le VIH-1 ou par le VIH-2, traité ou naïf au traitement antirétroviral.
Les prélèvements de sang ont été recueillis sur tubes EDTA.
Une numération des lymphocytes T CD4+ à l’aide du FACSCount® et une séparation cellulaire par gradient de Ficoll ont été réalisées.
Les cellules mononuclées du sang périphériques (PBMC) issus de cette séparation ont servi à l’immunophénotypage avec un marqueur des T reg : le CD25.
250.000 PBMC ont été marqués avec les anticorps monoclonaux anti-CD3-FITC, anti-CD25-PE et anti-CD8-PerCP.
La lecture a été effectuée par cytométrie de flux avec le FACSCalibur® en utilisant le programme CellQuest Pro pour l’acquisition et l’analyse des échantillons.
Les lymphocytes T CD4+ associés à un phénotype de T reg sont constitués par les CD4+CD25high+ et sont donnés en pourcentages de CD4 (Fig. 1 : A, B et C).
Les valeurs absolues des cellules T reg ont été déterminées en multipliant le pourcentage de cellules T reg par le taux de lymphocytes T CD4+.
Les données ont été analysées avec le logiciel SPSS 16.0. La comparaison entre deux groupes a été faite par le test non paramétrique de Mann-Whitney et entre plus
de deux groupes par le test non paramétrique de Kruskal Wallis. Les analyses de corrélation ont été effectuées en utilisant le test de "Spearman rank correlation
test". Les résultats sont considérés comme statistiquement significatifs pour des valeurs de P < 0,05.
Figures & Tableaux
Tableau II : Caractéristiques immunologiques des patients et des témoins
Tableau I : Caractéristiques démographiques des patients et des témoins
Variable
Age (années)
Patients VIH-1
Patients VIH-2
Témoins
38 (22-56)
48 (23-71)
37 (25-60)
Résultats
Variable
Patients VIH-1
Patients VIH-2
Témoins
P
Taux de TCD4+/µl
278 (170-490)
269 (216-526)
633 (446-693)
< 0,001
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Sexe (% homme)
26,3
32
53,3
Pourcentage de T reg (%)
ARV (% traités)
43 %
44 %
ND
Nombre absolu de T reg /µl
A
B
C
3,4 (2,2 - 5,1)
3,2 (1,8 - 4,0)
1,3 (1,0 – 1,8)
< 0,001
8,6 (4,7 – 15,5)
9,6 (5,3 – 12,3)
8,8 (4,7 – 10,7)
0,600
A
B
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Caractéristiques de la population d’étude
Les caractéristiques démographique et immunologique sont consignées respectivement dans les tableaux I et II.
Les patients infectés par le VIH-2 sont plus âgés que ceux infectés par le VIH-1.
Par contre, il n’ y a pas de différences concernant le nombre de patients sous traitement antirétroviral (ARV) entre les deux groupes.
Pas de différences significatives entre les deux groupes de patients concernant les taux de lymphocytes T CD4+.
L’infection à VIH-2 comme celle à VIH-1 entraine la hausse du pourcentage de T reg (Figure 2 et tableau II)
Les patients infectés par le VIH-1 et ceux infectés par le VIH-2 comparés aux témoins pour les mêmes taux de CD4 présentaient une
hausse significative du pourcentage de T reg CD4+CD25high+ (Tableau II). Il en est de même en stratifiant les CD4 (Figure 2).
Aucune différence significative n’a été notée entre les patients infectés par le VIH-2 et ceux infectés par le VIH-1 pour ce qui est du
pourcentage de T reg (P = 0,244).
Le nombre absolu de T reg est accru chez les patients infectés par le VIH (Figure 3)
 Pris globalement, les patients et les témoins présentent des nombres absolus de T reg comparables (P = 0,600). Mais en stratifiant les
CD4, les résultats sont différents.
 Ainsi pour des taux de CD4 compris entre 200-500/µl, les patients infectés par le VIH-1 et ceux infectés par le VIH-2 présentent des
nombres absolus de T reg plus élevés que les témoins (P = 0,002). Il en est de même pour l’intervalle de CD4 ≥ 500 (P = 0,008). Ces
résultats suggèrent que l’infection à VIH conduit à l’accroissement du nombre absolu des T reg (Figure 3).
 Par ailleurs, aucune différence significative (P = 0,784 et P = 0,701, respectivement sur ces deux intervalles) n’a été observée entre les
patients infectés par le VIH-1 et ceux infectés par le VIH-2.
Figure 1 : Détermination des T-reg CD4+CD25hi+ avec le logiciel CellQuest Pro
(A) Détermination des lymphocytes (R1) à partir des PBMC.
(B) Détermination des lymphocytes T CD4+ (R2) en pourcentages des lymphocytes.
(C) Détermination des lymphocytes T régulateurs CD4+CD25high+ (R4) en pourcentage de CD4
Figure 4 : Pourcentage de T reg et taux de CD4
(A) : Corrélation entre pourcentage de T reg et taux de CD4 dans l’infection à VIH-1
(B) : Corrélation entre pourcentage de T reg et taux de CD4 dans l’infection à VIH-2
A
B

Le pourcentage de T reg n’est pas corrélé au taux de CD4 chez les patients infectés par le VIH-2 (Figure 4)
Chez les patients infectés par le VIH-1, le pourcentage des T reg est inversement corrélé au taux de CD4 (r = - 0,411 , P < 0,001 ; Fig. 4A).
Par contre chez les patients infectés par le VIH-2, aucune corrélation significative n’a été notée (r = - 0,090 , P = 0,669 ; Fig. 4B).

Le nombre absolu de T reg est directement corrélé au taux de CD4 chez les patients infectés par le VIH (Figure 5)
Chez les patients infectés par le VIH-2, le nombre absolu des T reg est directement corrélé au taux de CD4 (r = 0,658 , P < 0,001 ; Fig. 5A).
Il en était de même chez les patients infectés par le VIH-1 (r = 0,717 , P < 0,001 ; Fig. 5B).
Conclusions
Figure 2 : Variations du pourcentage de T reg en fonction du taux de CD4
Résumé :
• L’infection à VIH-2 comme celle à VIH-1 entraine la hausse du pourcentage et du nombre absolu des lymphocytes T régulateurs.
• Le taux de CD4 est directement corrélé au nombre absolu de T reg aussi bien chez les patients infectés par le VIH-1 que chez ceux
infectés par le VIH-2.
• Par contre, le pourcentage de cellules T reg est inversement corrélé au taux de CD4 uniquement chez les patients infectés par le VIH-1.
Figure 3 : Variations des T reg absolus en fonction du taux de CD4
Figure 5 : Nombre absolu des T reg et taux de CD4
(A) : Corrélation entre T reg absolus et taux de CD4 dans l’infection à VIH-2
(B) : Corrélation entre T reg absolus et taux de CD4 dans l’infection à VIH-1
Conclusion :
• Ce travail préliminaire est la première étude des lymphocytes T régulateurs portant sur des sujets infectés par le VIH-2. Globalement,
nos résultats n’ont révélé aucune différence significative entre les patients infectés par le VIH-1 et ceux infectés par le VIH-2 pour
l’expression des T reg, hormis la différence dans la corrélation des pourcentages de T reg avec le taux de CD4.