HPV - Institut National Du Cancer
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HPV – Cervical Project and Protocols in Gabon Dr N. Berthet et Dr I.H. Koumakpayi Durban, South Africa CERVICAL CANCER IN GABON, CENTRAL AFRICA: WHICH STRATEGIES FOR A BETTER MEDICAL CARE? Pamela Moussavou, Hervé Koumakpayi, Dieudonné Nkoghe, Antoine Gessain, Eric Leroy, Ernest Belembaogo and Nicolas Berthet Centre International de Recherches Médicales de Franceville, Franceville, Gabon Institut de Cancérologie de Libreville, Libreville, Gabon Institut Pasteur, Paris, France Centre National de la Recherche Scientifique, Paris, France UMR MIVEGEC, Institut de Recherche pour le Développement (IRD), Montpellier, France Introduction 150 types de HPV identifiés BR BETA HR Type: souche présentant une différence de séquence nucléotidique du gène L1 de 10 % par rapport à tout les type de HPV connu 40 types de HPV infectent la sphère génitale GAMMA ALPHA Source: Mark Schiffman et al Cancer Res 2010 3 Introduction Tableau: Classification épidémiologique et phylogénique des types HPV Classification phylogénétique Classification épidémiologique High-risk Low-risk High-risk 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 68, 82, 26, 53, 66 70 Low-risk 73 6, 11, 40, 42, 43, 44, 54, 61, 72, 81, Toutes ces données sont basées sur les études menées dans les pays développés 4 Introduction Biologie du virus human Papillomavirus Petit virus épithéliotropes non-enveloppé, Un une capside icosaédrique double brin d’ADN circulaire de 8kb Huit (8) protéines: Early (E) et Late (L) 5 Introduction Transmission par contact direct peau à peau ou muqueuse à muqueuse La persistance de l’infection au Papillomavirus humain (HPV) de Haut-risque (HR-HPV) 90% Régression Evolution, 10 à 20 ans Co-facteurs: -Type viral -Terrain immunologique -Comportement sexuel -Utilisation de contraceptif -Tabagisme Evolution vers une infection HR dans 3 à 10% des cas 6 Epidemiological data on cervical cancer Epidemiological data on cervical cancer Epidemiological data on cervical cancer in Gabon women Epidemiological data on cervical cancer in Gabon women Rational Epidémiologie moléculaire Pays Souches dominantes Maroc HPV 16 (13,7%) HPV 18 (8,9%) HPV 31 (3,2%) Afrique du sud HPV 83 (2,6%) HPV 53 (2,2%) HPV 16 (2,0%) Zimbabwe HPV 58 (5,0%) HPV 16 (4,7%) HPV 70 (2,7%) Congo HPV 68 HPV 35 HPV 51 Gabon HPV 53 (12%) HPV 58 (11%) HPV 16 (10%) France HPV 16 (3,6%) HPV 53 (1,4%) HPV 6 (1,0%) Espagne HPV 16 (17,8 %) HPV 31 (12,8%) HPV 52 (12,4%) Japon HPV 52 HPV 16 HPV 51 USA HPV 16 HPV 52 HPV 53 Moyens de prévention Deux vaccins ont une AMM en France: – le vaccin quadrivalent [HPV 6, 11, 16, 18] Gardasil®, AMM le 20 septembre 2006; – le vaccin bivalent [HPV 16, 18] Cervarix®, AMM le 20 septembre 2007. Il n’y a pas de recommandation pour ces vaccins au Gabon. 11 Rational Problématique Peu d’études en Afrique centrale Méthodologies divers : PCR conventionnel, qPCR, cyto/histopathologie Taille et qualité de l’échantillonnage Peu d’information sur la variabilité moléculaire des souches circulant au Gabon et en Afrique centrale Les vaccins disponible ciblent 2 et 4 souches spécifiques Aucune recommandation sur la vaccination au Gabon Objectives Développement d’une plateforme de diagnostic des HPV (Transfert technologique) Mise en place de campagnes de dépistage dans différentes populations du Gabon (urbaines, rurales et forestières reculées) Caractérisation des génotypes qui circule dans la population gabonaise et vivant au niveau du basin du Congo Intégration de cette plateforme dans un réseau global au niveau des principaux instituts de recherche situés en Afrique Central et francophone. Personnes impliquées CIRMF : Dr N. Berthet (50%), Expert Technique International – co-coordination P. Moussavou, PhD student (100%) – screening HPV A. Nkili, M2 student (100%) – analyse bioinformatique Dr D. Knoghe, chef de service URAM – coordination des campagnes de dépistage Institut de Cancérologie de Libreville : Dr I.H. Koumakpayi (50%) - Mise en place des dépistages et dépistage Pr E. Belembaogo Hôpital Universitaire d'Angondje : Service de Gynécologie Obstétrique Pr Jean-François Meye et Dr Jacques Albert Bang HIA OBO (Hôpital des Instructions des Armées - Omar Bongo Ondimba) : Pr Jerome Miloundja (ORL) Dr Corinne Engohan (Anatomie et Cytologie Pathologique) HUCL (Hôpital Universitaire Central de Libreville) : Dr Nathalie Ambounda Organization of screening campaigns in Gabon HPV Project design Ethic Committee and Health Authority Other Involved Persons Screening campaigns Population Urban – Rural – Remote Forest Samples Bloods and Cervical smears Investigations cytological, virological and biological Méthodologie Prélèvement d’échantillon Le prélèvement des cellules du col de l'utérus à l’aide du kit de prélèvement ThinPrepMD ( flacon de 20 ml) 16 ml Analyse anatomo-pathologie Biomnis Analyse morphologique des modifications épithéliales liées aux HPV 2 ml Analyse de biologie moléculaire Institut Pasteur Détection d’un panel de 24 types 18 HPV-HR 6 HPV-LR 16 Méthodologie : Aspect généraux • Réalisation des frottis cervicaux lors des campagnes de dépistage • Conservation sur place puis transfert dans les différents laboratoires impliqués - Analyses biologiques de base - Analyse cytologique dans un laboratoire privé - Investigations virologiques • Investigations virologiques - Recherche des principaux génotypes d’HPV - Détermination de la séquence du génome Méthodologie : Investigations virologiques • Investigations virologiques - Recherche de 24 génotypes d’HPVs (18 Haut Risque et 6 Bas Risque) avec le kit Papillocheck. - Système de détection se basant sur une association d’une PCR ciblée sur le gène L1 et d’une puce à ADN pour la révélation des amplicons. Séquençage des génomes HPV - Séquençage à haut-débit pour déterminer la ou les séquences des génomes HPV présent dans les échantillons. Plateformes HTS (MiSeq) et analyses bioinformatique disponible au CIRMF. - Sélection des frottis à séquencer par HTS en priorité avec en fonction des résultats des analyses cytologiques (cancer et de lésions HSIL, LHSIL et ASCUS). Détermination séquences des génomes d’HPV. Recherche d’autres génotypes non recherchés avec le kit PC. Méthodologie : Nombre attendus • Période : 2014-2015, • 4000 à 5000 femmes Résultats Données sociodémographiques Résultat de génotypage par le kit Papillocheck En cours… Résultats des analyses d’anatomo-pathologie Conclusions (I) • Développement de différents aspects techniques pour l’investigation virologique : (i) Plateforme de diagnostic basée sur la trousse commerciale Papillocheck (ICL) (ii) Développement et validation d’outils spécifiques (qPCR) sur les principaux génotypes qui auront été mis en évidence (CIRMF-ICL) (iii) Plateformes de séquençage et analyse bioinformatique pour investigation virologique plus poussée (CIRMF) • Mise en commun des compétences de chaque institut • Suggestion d’intégration dans le réseau francophone des HPV (i) Création un ou deux centres de références au niveau des différentes sous-région du réseau (ii) Mise en commun des techniques, d’un transfert de technologies et protocoles entre partenaires Conclusions et Suggestions (II) • Encourager le génotypage du HPV dans les lésions précancéreuses et cancéreuses du col de l’Utérus en Afrique Francophone; • Harmoniser les méthodologies afin de pouvoir comparer les études • Emettre des recommandations au terme des études.
