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Visualization of the intracellular
behavior of HIV in living cells

Cycle du VIH
Règne : virus
Groupe VI : ssRNA RT
Famille : Retroviridae
Sous-famille : Orthoretrovirinae
Genre : Lentivirus
Virus de l’immunodéficience humaine

Introduction
Pour atteindre le pore nucléaire, traversée du cytoplasme
Diffusion des particules est limitée : viscosité du cytoplasme
Moyen de transport : le cytosquelette , not. les dynéines le long des
microtubules.
Objectif de l’étude : grâce à la fluorescence
Caractérisation du trafic intracellulaire permettant de détecter des complexes
d’origine virale
Observation du mouvement du virion dans la cellule
Observation des interactions du VIH avec les éléments cytoplasmiques

Production virale
CoTransfection de cellules 293 T avec pLAI- Yu (DNA proviral)
peGFPC3
Collecte du surnageant contenant les virus
Suivi du virus suivi de la GFP-Vpr (Vpr reste associée à l’ADN viral)
Vpr : protéine accessoire du VIH
Incorporation Vpr –
GFP par interaction
avec la région gag
p6 pendant
l’assemblement viral
peGFPC3
GFP Vpr
P
PGènes
proviraux
pLAI- Yu

Exposition cellule cible
(exprimant le CD4) avec
surnageant
Observation de la
fluorescence
Infection précoce
Signaux dans toute
la cellule
Après 2h d’incubation
Accumulation du
signal GFP dans la
région péri nucléaire,
au niveau des MTOC
+ Ac anti-tubuline (rouge)