la synthèse de l`oxyde nitrique est un facteur clé de l
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LA SYNTHÈSE DE L’OXYDE NITRIQUE EST UN FACTEUR CLÉ DE L’ACTIVITÉ DE LA METALLOPROTEINASE-9 ET DU CARACTÈRE INVASIF DU CARCINOME LARYNGÉ (Nitric oxide synthesis is a key factor of MMP-9 activity and laryngeal carcinoma invasiveness) Nora Kariche1, Samir Benyahia2, Nabila Moulai3, Wahiba Ouahioune3, Djamel Djennaoui2,Chafia Touil-Boukoffa1& Mehdi Bourouba1. 1-Laboratoire de biologie cellulaire et moléculaire (LBCM), Equipe Cytokine et NitricOxide Synthases. Immunité et pathogénie, Faculté des sciences biologiques, Université des sciences et technologie Houari Boumediene (USTHB), Bab-ezzouar, Alger, Algérie. 2-Service d’oto-rhino-laryngologie (ORL), centre hospitalier universitaire Mustapha Pacha, Alger, Algérie. 3-Service d’anatomo-pathologie, centre hospitalier universitaire Frantz fanon, Blida, Algérie. Incidence du CL dans le monde: -156.877 nouveaux cas en 2012, -1,2 % de l’ensemble des cancers, -1,6 % des décès par cancer. En Algérie l’incidence du CL est en augmentation continue 10 Fréquence du CL parmi l'ensemble des cancers masculins en Algérie 4,4% 5 5,3% 6,3% 1,6% 0 1986 2009 2012 2020 Globocan 2012, Hamdi chrif et al., 2010 INTRODUCTION Le cancer du larynx constitue un réel problème de santé public. Les tumeurs du larynx sont très agressives et invasives diminue significativement pour les stades les plus évolués Taux de survie des patients CL après 5ans du diagnostic Sous glotte Glotte Epiglotte 0 20 40 60 % de survie après 5 ans Un taux de récurrence important en fonction du stade d’évolution de la tumeur: -Tumeur T1 5 à 13% -Tumeur T2 25 à 30% -Tumeur T3/T4 30 à 50% American Cancer Society. Survival rates for laryngeal and hypopharyngeal cancer by stage, 2011., Jin et al., 2013. INTRODUCTION Le taux de survie après 5 ans varie entre 59 à 90% pour le stade I. Toutefois il Maintien des signaux prolifératifs Insensibilité aux signaux antiprolifératifs Dérégulation du métabolisme énergétique Echappement au système immunitaire Echappement à l’apoptose Réplication illimitée et immortalité Mutations et instabilité génomique Induction de l’angiogènése Inflammation induisant la progression Invasion et métastases Hanahan et Weinberg, 2011 INTRODUCTION Modèle d’oncogènése de Hanahan et Weinberg. Free Radical ROS /NO Haitian Lu et al; 2006 INTRODUCTION Implication de l’inflammation dans la progression tumoral (Le microenvironnement tumoral) Les rôles pathologiques du NO sont associés à ses fortes concentrations Sheetal Korde et al; 2012, INTRODUCTION L’oxyde nitrique, un radical libre synthétisé par les Nitric oxyde synthase La famille des MMP comprend 24 endopeptidases présentant une homologie structurelle et qui peuvent être diviser en 5 sous familles en fonction de leur capacité de dégrader un ou plusieurs composants de la matrice extracellulaire: - Les collagènases interstitiels, -Les -Lesgélatinases, gélatinases - Les stromélysines, -Les matrilysines -Les MMP transmembranaires membrane. (Graesslin et al., 2013). INTRODUCTION Les MMP, une famille de protéases impliquées dans la dégradation des composants de la matrice extracellulaire MMP-2 Expression Constitutive Cellules productrices • Fibroblastes, • Les cellules. épithéliales • Les cellules endothéliales PM 72 KDa Rôle o o 62 kDa L’apoptose L’inhibition de la néovascularisation Les gélatinases peuvent également dégrader d’autres composants de la matrice extra cellulaire tels que la collagène de type I, IV, V, VII, X et de type MMP-9 XI, La laminine l’elastine, la Inductible fibronectine, l’entactine ainsi Conditions que lephysiologiques: protéoglycanemo/mɸ Conditions pathologiques: cellules stromales et tumorales (microenvironnement Tumoral) 92 KDa o o o 82KDa Le développement embryonnaire, La cicatrisation de plaies L’invasion tumorale. (Klein et al., 2011, Graesslin et al., 2013). INTRODUCTION Les MMP gélatinases dégradent préférentiellement la gélatine (collagène dénaturée), principale composante de la membrane basale Une surexpression et une sur-activation des MMP gélatinases (MMP-2 et MMP-9) a été observée dans plusieurs types de cancers tels que le cancer du sein, de la prostate, des poumons, du colon, des ovaires et les cancer de la sphère ORL Recrutement de cellules inflammatoires INTRODUCTION Les MMP gélatinases jouent un rôle crucial dans l’invasion des tumeurs malignes 1 • Explorer la qualité de l’état inflammatoire (NO) associé au développement du carcinome laryngé. 2 • Evaluer les taux d’expression et d’activation des MMP gélatinases (MMP-2 et MMP-9) dans les plasmas des patients CL 3 • Confirmer l’expression de la MMP-9 dans les tumeurs laryngées par une étude immunohistochimique. 4 • Etudier les corrélation NO/MMP 9 afin de déterminer les valeurs protumorales en NO. BUT ET OBJECTIFS Objectifs de l’étude Démarche expérimentale 40 patients CL Consentement libre et éclairé Un prélèvement sanguin Dosage du NO par la méthode de Griess modifiée Analyse statistique des résultats à l’aide du logiciel GraphPad Prism7 à un taux d’erreur de 5 %. Analyse des MMP gélatinases par zymographie sur gel de gélatine Analyse densitométrique des gels par logiciel ImagJ Biopsie Nature de la tumeur par coloration HE Analyse de l’expression tissulaire de la MMP-9 par IHC DÉMARCHE EXPÉRIMENTALE 20 volontaires sains • - - Concordance avec les données de la littérature : Une surproduction du NO dans les sérums de patients atteint du carcinome laryngé (Taysi et al., 2003), mais aussi dans d’autres cancers ORL tels que le NPC (Bourouba et al., 2015), Une augmentation de l’expression de l’iNOS dans les tissus tumoraux du larynx (Shigyo et al., 2001 et 2007), Le développement du CL s’accompagne d’une forte production du NO à l’échelle systémique, une élévation qui pourrait participer à l’installation de plusieurs événements liés à la progression tumorale. RÉSULTATS Les patients atteints de carcinome du larynx sont caractérisés par des taux importants du NO carcinome importants Témoins du larynx sont d’expression et Patients CL Témoins (N=20) Patients (N=40) p Pro MMP-9 20/20 (100%) 33/40 (82.5%) 0.083 MMP-9 0/20 (0%) 14/40 (35%) 0.0024 Pro MMP-2 6/20 (30%) 11/40 (27.5%) >0.99 MMP-2 14/20 (70%) 29/40 (72.5%) >0.99 -Une conversion totale de la pro MMP-9 en MMP-9 chez 5 patients sur 40 (12.5%) contrairement aux témoins où seule la forme zymogéne est révélée. -Une conversion totale de la pro MMP-2 en MMP-2 active chez 14 témoins (70%) et 24 patients (60%). RÉSULTATS Les patients atteints de caractérisés par des taux d’activation de la MMP-9. carcinome importants du larynx sont d’expression et Le développement du cancer du larynx serait associé à une surexpression et une activation de la MMP-9 au niveau circulatoire, sans que les niveaux d‘expression et d’activation de la MMP-2 ne soient affectés. RÉSULTATS Les patients atteints de caractérisés par des taux d’activation de la MMP-9. HE IHC: MMP-9 Tissu sain GX100 GX100 Tissu tumoral GX100 GX100 GX100 RÉSULTATS Une importante expression de la MMP-9 dans les tumeurs du larynx, localisée au niveau épithélial et stromal IHC: MMP-9 Tissu tumoral GX100 GX400 l’analyse immunohistochimique confirme l’absence de l’expression de la MMP-9 dans les tissus sains, contrairement au tissu tumoral où une importante expression de la MMP-9 a été observée au niveau stromal et épithélial GX100 RÉSULTATS Une importante expression de la MMP-9 dans les tumeurs du larynx, localisée au niveau épithélial et stromal les faibles valeurs en NO ([NO-2] < 50μM) sont en faveur de l’expression et de l’activation de la MMP-9. RÉSULTATS Les taux d’expression et d’activation de la MMP-9 corrèlent négativement avec les taux des NO2- chez les patients CL et les témoins 1 Le développement du cancer du larynx s’accompagne d’un état inflammatoire caractérisé par une surproduction du NO. 2 L’implication de la MMP-9 dans le développement du cancer du larynx et ce grâce à une caractérisation zymographique et immunohistochimique. 3 Une expression stromale et épithéliale de la MMP-9 suggérant une interaction tumeur-stroma en faveur d’une invasion tumorale. 4 Le rôle contributif du NO sur l’induction de l’expression et l’activation de la MMP-9 lors du développement du cancer du larynx. 5 Les plus faibles valeurs pathologiques en NO contribuent clairement au développement du cancer du larynx via l’induction de l’expression et de l’activation de la MMP-9 alors que les valeurs les plus élevées en NO semblent avoir un effet anti-tumoral. CONCLUSION Conclusion Laboratoire de biologie cellulaire et moléculaire, Equipe Cytokines et NO Synthase, Immunité et Pathogénie, Faculté des sciences biologiques, USTHB - Dr Mehdi BOUROUBA Pr Chafia TOUIL-BOUKOFFA Service d’oto-rhino-laryngologie (ORL), CHU Mustapha Pacha, Alger. - Pr Djamel DHENNAOUI Dr Samir BENYAHIA Service d’anatomo-pathologie, centre hospitalier universitaire Frantz fanon, Blida. - Pr Wahiba OUAHIOUNE Dr Nabila MOULAÏ REMERCIEMENTS Remerciements Merci pour votre attention
