Guide d`interprétation : Panel d`analyse des marqueurs protéiques

Guided’interprétation:Paneld’analysedesmarqueursprotéiquesdansleliquide
céphalorachidienetméthodeEP‐QuICpourledépistagedelamaladiedeCreutzfeldt‐Jakob
sporadique
Préambule
Leprésentguidefournitunecourtedescriptiondecesépreuvesetdesrecommandationspour
l’interprétationdesrésultats.Pourdeplusamplesrenseignements,veuillezcommuniqueravecla
Sectiondesmaladiesàprionsau204‐789‐6083ouànml.cjd@phac‐aspc.gc.ca,ouavecleSystèmede
surveillancedelamaladiedeCreutzfeldt‐Jakobau888‐489‐2999(numérosansfrais).
Contexte
Lesencéphalopathiessubaigües,dontfaitpartielamaladiedeCreutzfeldt‐Jakob(MCJ),constituentun
vastegroupehétérogèned’affectionsducerveauquipeuventêtredifficilesàdiagnostiquer1.Parmi
cesaffections,laMCJestspécialementurgenteàdiagnostiquer,carellepeutsetransmettred’une
personneàl’autreparunmécanismesemblableàceluid’uneinfection.Lediagnosticestdifficileà
établir,carlesagentsinfectieuxnesontpasdesbactériesoudesvirusconventionnels,maisplutôtune
isoformepathogènemalrepliée(PrPd)delaprotéineprion(PrP)del’hôte.Cetteparticularitérend
inefficaceslestechnologiesconventionnellescommelaPCRetlasérologie,quisontcouramment
utiliséespourladétectiondirected’autresagentsinfectieux.
LaméthodeemployéepourdiagnostiquerlaformelapluscourantedeMCJ,àsavoirlaMCJsporadique,
reposeactuellementsuruntableaucliniquenormaliséetsurdesobservationscomplémentaires,telles
quel’élévationdesmarqueursprotéiquesindirectsdelamaladiedansleliquidecéphalorachidien(LCR)
despatients.Lesmarqueurslespluscourammentutiliséssontlaprotéine14‐3‐32,laprotéinetau
associéeauxmicrotubules3etlaprotéineS1004.Mêmesiaucundecesmarqueursnepermetàluiseul
deposerundiagnostic,ilsprésententtousdessensibilitésetdesspécificitésutilespourlediagnosticde
laMCJ5.Despercéestechnologiquesrécentesontmenéàlamiseaupointd’unenouvelleépreuve,
appeléeconversionprovoquéepartremblementaupointfinal(EP‐QuIC).Contrairementàlaméthode
existante,quiciblaitlesmarqueursindirects,laméthodeEP‐QuICpermetdedétecterdirectementla
protéinepathogène.
Disponibilitédutest
LaSectiondesmaladiesàprionsdel’AgencedelasantépubliqueduCanadaoffreunpaneld’analyse
desmarqueursprotéiquesdansleLCRdestinéaudosageimmunologiquedesprotéines14‐3‐3ettau
etàladétectiondirectedelaformepathogènedelaprotéineprionparEP‐QuIC.Letestdedétection
delaprotéinetauesthomologuéenvertudelanormeCan‐P4E(ISO/CEI17025).
Principesdestests
L’analysedesprotéinesestréaliséeparuneméthodeELISAensandwichaumoyendetrousses
commercialesdeCycLexCo.(protéine14‐3‐3)etdeFujirebio(protéinetau).DansuneanalyseparELISA
ensandwich,l’antigèneprotéiqueàmesurerestfixéentrel’anticorpsdecapture(liéàlaplaque)et
l’anticorpsdedétection(conjuguéàuneenzyme).L’ajoutd’unsubstratenzymatiquegénèreunproduit

colorédontlaconcentrationfinaleestcorrélée,dansuneplagelinéairecaractéristique,avecla
concentrationdelaprotéineprésentedansl’échantillondedépart.
L’épreuveEP‐QuICestfondéesurlacapacitédelaPrPdd’induirelaconversiondelaformecellulaire
normaledelaprotéineprion(PrPc)enuneformemalrepliée.DanslaméthodeEP‐QuIC,leséchantillons
duLCRdespatientssoupçonnésd’êtreatteintsdelaMCJsontversésdansdespuitscontenantune
protéineprionrecombinante(PrPr).Lemélangeestensuiteincubéà42°Cavecuneagitation
intermittente.SileLCRdupatientcontientlaPrPd,ilconvertiralaPrPrenuneformemalrepliée.Les
agrégatsinsolublesdelaPrPrissusdecetteméthodeselierontensuiteàlathioflavineT(uncolorant),
cequientraîneraunemodificationduspectred’émissiondefluorescencedel’échantillonpouvantêtre
mesuréeaumoyend’unspectrofluorimètre.
Interprétationdesrésultats
Lescaractéristiquesderendementdutestdedétectiondesprotéinestau(ISO/CEI17025)ontété
évaluéessurunepopulationde1000patientscanadiensrecrutésdefaçonséquentiellepourlesquels
laMCJsporadiquefiguraitparmilesdiagnosticsdifférentiels.Avecunevaleurintermédiairede
976pg/mLcommeseuiloptimal,lasensibilitéetlaspécificitédiagnostiquesdutestdedétectiondes
protéinestaudanscettecohortedepatientsétaientde91%et88%,respectivement7,8.
Laprécisiondesdiagnosticsétaitcomparabledanslesautresétudesayantportésurcemarqueur5.
LatrousseELISAcommercialevisantlesprotéines14‐3‐3(CycLexMC)aétévalidéeparunconsortium
international.Enutilisant20000unitésarbitrairesparmillilitre(UA/mL)commeseuilàpartirduquel
unrésultatétaitconsidérécommepositifpourlaprotéine14‐3‐3,cegroupeinternationalaévaluéune
cohortedepatientsoùlaprévalencedelaMCJétaitsemblableàcelleobservéeauCanada:ila
obtenudesestimationsdelasensibilitéetdelaspécificitéde88%et96%,respectivement9.Nous
nousattendonsàobtenirunrendementsemblable.
LescaractéristiquesderendementdelaméthodeEP‐QuIContétéestiméesdansuneanalyse
rétrospectivede91patientscanadienscomprenant45casconfirmésdeMCJet46cassansMCJ.Un
puitsindividueld’uneplaquede96puits(3puitsrépliquésparéchantillon)étaitconsidérécomme
positifsilesignaldefluorescencefinalétait4foisplusélevéquelesignaldefluorescencededépart.
UnéchantillondeLCRétaitconsidérécommepositifsiaumoins2des3réplicatsanalysésserévélaient
positifs.Danslescasoù1des3réplicatsd’unéchantillonétaitpositif,unenouvelleanalyseétait
effectuée;silasecondeanalysedonnaitaussiunrésultatpositifpour1des3puitsrépliqués,
l’échantillonétaitclassécommeindéterminé.
Aprèsexclusiondes3échantillonsclasséscommeindéterminés(1casdeMCJet2cassansMCJ),la
sensibilitéetlaspécificitédiagnostiquesdelaméthodeEP‐QuICétaientde100%et96%,
respectivement.

Marqueur SensibilitéSpécificité RV+ RV-
EP-QuIC 100% 96% 22,0 0
N= 88 92-100% 85-99% 5,7-85,2 
14-3-3* 88% 96% 24,1 0,13
N= 2177 83-92%
95-97%
19,1-30,4 0,09-0,18
Tauǂ 91% 88% 7,6 0,10
N= 1000 84-95 % 85-90 % 6,9-7,8 0,06-0,20
*D’aprèslesrésultatsdeSchmitzetal.9
ǂD’aprèslesrésultatsdeCoulthartetal.8
Lesvaleursdanslescellulesombragéesreprésententdeslimitesdeconfianceà95%.
RV=rapportdesvraisemblances.
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