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Biokar Diagnostics – Rue des Quarante Mines – ZAC de Ther – Allonne – B.P. 10245 – F60002 Beauvais Cedex – France
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MODE D’EMPLOI
UTILISATION EN TUBES (avec D-cyclosérine)
- Dans chaque tube, ajouter stérilement 0,2 mL de supplément sélectif D-cyclosérine 200 mg
(BS006) reconstitué. Homogénéiser.
- Chauffer le produit à analyser afin de détruire les formes végétatives et d’activer les spores.
- Transférer 1 mL de l’inoculum et de ses dilutions décimales dans les tubes en évitant au
maximum d’incorporer de l’air au milieu.
- Homogénéiser parfaitement.
- Refroidir dans un bain d’eau glacée.
- Incuber à 46°C ou bien à 37°C pendant 20-24 heures, suivant le protocole analytique utilisé.
NOTA :
Le chauffage des tubes après ensemencement doit être évité.
UTILISATION EN BOITES ø 90 mm (Milieu de base + D-cyclosérine)
- Pour 100 mL de milieu de base, ajouter stérilement 1,0 mL de supplément sélectif D-
cyclosérine 200 mg reconstitué (BS006). Homogénéiser.
- Transférer 1 mL de l’inoculum et de ses dilutions décimales dans les boîtes.
- Couler 15 à 20 mL de milieu complet.
- Homogénéiser parfaitement.
- Laisser solidifier sur une surface plane.
- Les boîtes inoculées doivent être incubées en jarre d’anaérobiose pendant 24 heures à 37°C
en présence d’un mélange gazeux d’hydrogène et de dioxyde de carbone.
- La lecture sera effectuée aussitôt après l'ouverture de la jarre, sinon les colonies risquent de
pâlir par suite de l’oxydation du sulfure de fer.
- Faire les tests de confirmation nécessaires à l'identification de Clostridium perfringens :
coloration de Gram, catalase, test de réduction des nitrates, mobilité, hydrolyse de la gélatine,
subcultures sur bouillon Lactose-Sulfite (LS) (BK140), etc...
Milieu de base + D-cyclosérine + jaune d’oeuf
Pour mettre en évidence la lécithinase produite par Clostridium perfringens, le milieu peut être
additionné d’une émulsion stérile de jaune d’oeuf (BS066) à raison de 8 mL pour 100 mL de
milieu de base fondu, ramené à 44-47°C.
UTILISATION EN BOITES ø 55 mm (Milieu de base sans D-cyclosérine)
Pour le contrôle des eaux par la méthode de filtration sur membrane
- Couler une première couche d’environ 2 mm de milieu dans les boîtes.
- Laisser solidifier sur une surface froide.
- Chauffer l’inoculum afin de détruire les formes végétatives et d’activer les spores.
- Filtrer la quantité d’eau appropriée.
- Déposer la membrane dans la boîte, face supérieure tournée vers le bas, en s’assurant qu’il
ne reste pas de bulles d’air emprisonnées sous le filtre.
- Couler une deuxième couche de gélose dans les plus brefs délais, de façon à porter
l’épaisseur totale de gélose à 5 mm environ.
- Laisser solidifier sur une surface froide.
- Incuber en conditions anaérobies pendant 20 et 44 heures à 37°C.