Proposition de Stage M2 ou Ingénieur LIEU DE STAGE Nom et affiliation du laboratoire : Physiologie de la reproduction et des comportements UMR 6175 INRA-CNRS-Univ. Tours-HarasNationaux Adresse du laboratoire : Centre INRA Val de Loire (Tours), PRC F-37380 Nouzilly Nom, prénom du directeur de l’unité de recherche : Guillou Florian MAITRE DE STAGE Nom, Prénom, Qualité du Maître de stage : CAYLA Xavier, CR1, HDR N° de tél. : 0247427964 Courriel : [email protected] DETAILS DU STAGE: Durée 6 mois Titre du projet : Etude par imagerie cellulaire du jeu croisé des récepteurs de la GnRH, du Kiss et des RfRP3. Les GpCR tels que les récepteurs de la GnRH, du peptide Kiss (GPR54) et des RfRP3 ou GnIH (GPR147) participent au contrôle de l’axe gonadotrope et se côtoient dans les neurones à GnRH, voire dans les cellules gonadotropes. Aujourd'hui le rôle des interactions moléculaires potentielles de ces récepteurs en dimères et du jeu croisés de leurs signalisations dans une même cellule ne sont pas connus. Dans le cadre d'un financement par l'ANR (Agence Nationale de la Recherche), ce stage s’inscrit dans un projet d’étude par imagerie cellulaire visant à la compréhension du rôle du côtoiement de ces récepteurs dans une même cellule. Les récepteurs d'intérêt fluorescents (protéine chimèrique GpCR-eGFP et GpCR-mCherry ainsi que des GpCR-NmCherry et GpCR-CmCherry) ont déjà été générés au laboratoire et ils permettent de suggérer que les dimérisations de récepteur existent dans des cellules en culture. Nous disposons de deux microscopes confocaux (LSM780 et LSM700) dont un est dédié à l'étude sur les cellules ou tissus en culture. Une station de FRET plein champ permet de suivre les signalisation cellulaire l'aide de senseur en FRET. L’objectif du stage sera d’étudier dans la cellule vivante les récepteurs par plusieurs stratégies expérimentales impliquant des techniques modernes d'imagerie cellulaire: -le Fret qui permet de suivre des interactions de manière dynamique mais également de suivre la signalisation dans le cellule vivante, la BiFc (bi-molecular fluorescence complémentation) qui implique des reconstitutions de fluorophores fonctionnels dans la cellule. Des résultats obtenus cette années, en s'appuyant sur ces stratégies expérimentales, sont très encourageants et suggèrent l'hétéro-dimérisation de certains récepteurs et la régulation de la signalisation du GPR147 par le récepteur du Kiss lorsqu'ils sont exprimés dans une même cellule. Principales techniques employées : Culture de lignées cellulaires, imagerie cellulaire en microscopie de fluorescence, FRET, BiFC.