protocole de l`extraction d`adn - WEB-SVT

PROTOCOLE DE L’EXTRACTION D’ADN
Libération de l’ADN hors de ses membranes cellulaires sans le léser :
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Va chercher ton milieu d’extraction dans un pot en verre. Ce milieu contient
 de l’eau distillée
 du sel (NaCl)
 de l’acide acide acétique (= vinaigre)
Coupe un oignon en 6, puis découpe toi un morceau en petits lambeaux.
Broie cette moitié d’oignon en ajoutant progressivement le milieu d’extraction dans le
mortier.
Séparation de l’ADN du reste des constituants cellulaires :
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Verse le broyat obtenu dans un seconde pot en utilisant un entonnoir muni d’une
passoire.
Récupère le filtrat obtenu et verse le dans un pot de yaourt en verre muni de l’entonnoir
et d’un papier filtre à café à la place de la passoire.
Floculation de l’ADN :
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Verse le filtrat obtenu dans un tube à essai que tu remplies à moitier. Verse dans un
seconde tube à essai la même quantité d’éthanol.
Fait couler l’éthanol doucement le long de la paroi du tube à esaai qui contient le
filtrat.
Observe le précipité blanc formé entre l’alcool et le filtrat : c’est l’ADN !
Si ton précipité n’est pas très gros, rajoute de l’éthanol (la même quantité que la première
fois). Place du parafilm (film élastique) au sommet du tube puis incline le doucement à
90° plusieurs fois jusqu’à obtenir un précipité blanc.
Coloration de l’ADN :
ATTENTION, cette opération est EXTREMEMENT DELICATE !
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Place dans un verre de montre du vert de méthyle avec un peu d’éthanol (2/3 gouttes).
A l’aide d’une pipette plastique, aspire un peu d’éthanol très doucement. La méduse
d’ADN devrait remonter. Attrape la méduse à l’aide d’une spatule et place la dans un
verre de montre.
Place du vert de méthyle dans le verre de montre et attends 5 minutes.
Place ensuite l’ADN dans l’eau pour le rincer.
Interprétation des résultats observés :
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Recommence les étapes de la coloration avec un bout de coton. Compare avec l’ADN.
Compare ton ADN avec la photo de cellules entières colorées par le vert de méthyle.
Observe au microscope ta méduse en la plaçant entre lame et lamelle.
Notes pour le prof :
Composition du milieu d’extraction :
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60 ml d’eau distillée
9 grammes de sel
4 gouttes d’acide acétique