protocole de l`extraction d`adn - WEB-SVT

PROTOCOLE DE L’EXTRACTION D’ADN
Libération de l’ADN hors de ses membranes cellulaires sans le léser :
- Va chercher ton milieu d’extraction dans un pot en verre. Ce milieu contient
 de l’eau distillée
 du sel (NaCl)
 de l’acide acide acétique (= vinaigre)
- Coupe un oignon en 6, puis découpe toi un morceau en petits lambeaux.
- Broie cette moitié d’oignon en ajoutant progressivement le milieu d’extraction dans le
mortier.
Séparation de l’ADN du reste des constituants cellulaires :
- Verse le broyat obtenu dans un seconde pot en utilisant un entonnoir muni d’une
passoire.
- Récupère le filtrat obtenu et verse le dans un pot de yaourt en verre muni de l’entonnoir
et d’un papier filtre à café à la place de la passoire.
Floculation de l’ADN :
- Verse le filtrat obtenu dans un tube à essai que tu remplies à moitier. Verse dans un
seconde tube à essai la même quantité d’éthanol.
- Fait couler l’éthanol doucement le long de la paroi du tube à esaai qui contient le
filtrat.
- Observe le précipité blanc formé entre l’alcool et le filtrat : c’est l’ADN !
- Si ton précipité n’est pas très gros, rajoute de l’éthanol (la même quantité que la première
fois). Place du parafilm (film élastique) au sommet du tube puis incline le doucement à
90° plusieurs fois jusqu’à obtenir un précipité blanc.
Coloration de l’ADN :
ATTENTION, cette opération est EXTREMEMENT DELICATE !
- Place dans un verre de montre du vert de méthyle avec un peu d’éthanol (2/3 gouttes).
- A l’aide d’une pipette plastique, aspire un peu d’éthanol très doucement. La méduse
d’ADN devrait remonter. Attrape la méduse à l’aide d’une spatule et place la dans un
verre de montre.
- Place du vert de méthyle dans le verre de montre et attends 5 minutes.
- Place ensuite l’ADN dans l’eau pour le rincer.
Interprétation des résultats observés :
- Recommence les étapes de la coloration avec un bout de coton. Compare avec l’ADN.
- Compare ton ADN avec la photo de cellules entières colorées par le vert de méthyle.
- Observe au microscope ta méduse en la plaçant entre lame et lamelle.

Notes pour le prof :
Composition du milieu d’extraction :
- 60 ml d’eau distillée
- 9 grammes de sel
- 4 gouttes d’acide acétique