02bis – TP

EXTRACTION ET VISUALISATION DE L’ADN HUMAIN (GENETHON 2002)
Objectif de connaissances : L’ADN (Acide DésoxyriboNucléique) est localisé dans le noyau des cellules.
Objectifs méthodologiques : Concevoir et réaliser : mettre en œuvre un protocole expérimental.
Protocole expérimental :
Sur le tube à essai, tracer deux traits : un d’une hauteur de 1 cm et un d’une hauteur de 1,5cm
1) Recueil des cellules buccales.
Se frotter les joues contre les dents et saliver dans le tube. Il faut récolter 1 cm de liquide (sans compter la
mousse !).
2) Dissolution des membranes (celle qui entoure la cellule et celle qui entoure le noyau).
Ajouter quelques gouttes de liquide vaisselle (la moitié du liquide récolté, soit ½ cm).
Remuer délicatement, pour éviter la mousse, en bouchant le tube avec le pouce.
3) Précipitation de l’ADN.
Ajouter une pincée de sel.
Remuer délicatement en bouchant le tube avec le pouce.
Verser doucement de l’alcool à 70% non modifié, le long de la paroi du tube, afin d’obtenir deux phases distinctes
(les deux liquides eau/alcool ne sont pas miscibles).
Résultats :
Vous observez la « méduse » d’ADN se former à l’interface des deux phases, au bout de quelques minutes. Puis
comme l’ADN est plus léger que l’alcool, il remonte doucement à la surface.
Vous récupérez l’ADN en l’entourant autour d’un cure-dent
Vous pouvez le conserver dans de l’alcool.
Principe de l’extraction
 Le sel permet de désolidariser l’ADN de certaines autres molécules (protéines) contenues dans les
cellules et il augmente la densité de l’eau.
 L’alcool permet de compacter l’ADN sous forme d’une pelote. L’ADN précipite car il est insoluble dans
l’alcool.
Production attendue ;
1) Colorez la méduse d’ADN obtenue au vert de méthyle
2) Prélevez vos cellules buccales avec un coton tige.
Réalisez un montage entre lame et lamelle en le colorant au vert de méthyle également.
3) Comparez vos observations : que pouvez-vous en déduire ?
4) Quelle expérience feriez-vous pour prouver que l’ADN est une molécule spécifique des êtres
vivants ? Réponse attendue des élèves : extraire sur une substance non vivante. (Extraction et
coloration à réaliser sur de l’argile par exemple)