O F F R E

 O F F R E
TECHNOLOGIQUE
Nouveau procédé d’identification d’utilisation d’un gène
de résistance au virus de la panachure jaune du riz
Résumé
Cette invention concerne l’utilisation des outils de la biologie moléculaire pour l’identification d’un gène majeur de la résistance au virus de la panachure jaune du riz (RYMV). Laboratoire
IRD – France ADRAO – Bénin Chercheur
M. C. BRUGIDOU M. J‐P. BRIZARD M. A. GHESQUIERE Contact
IRD
Département
Ce procédé mis au point par les chercheurs de l’IRD, en partenariat avec l’Association pour le Développement de la Riziculture en Afrique de l’Ouest (ADRAO), permet d’identifier un polymorphisme lié au locus du gène de résistance pour déterminer les phénotypes résistants au virus. Cette invention ouvre des perspectives pour le clonage de ce gène et le développement de variétés résistantes au virus. Expertise & Valorisation
Le Sextant
44, boulevard de Dunkerque
CS 90009
F-13572 Marseille cedex 02
France
Tél. [+33] (0)4 91 99 96 26
www.dev.ird.fr
Type de transfert
• Brevet prioritaire français
FR99/07831 déposé le 21
Juin 1999 – Extension PCT
n° PCT / FR2000 / 01723
déposée le 21 Juin 2000
• Disponible pour licence de
brevet et de savoir-faire
Ref. dev/OT34 Partenariat
‐
Permet de déterminer si une plante est sensible ou résistante au virus RYMV. ‐
Permet le clonage de la séquence comprenant le locus du gène [email protected]
Avantages
www.ird.fr
L’IRD est un établissement public
français, à caractère scientifique et
technologique, placé sous la tutelle
conjointe des ministres chargés de
la Recherche et de la Coopération
‐
Obtention de marqueurs de grande spécificité vis‐à‐vis du locus d’un gène majeur de résistance au RYMV Applications industrielles
Prédiction de phénotype résistant au virus RYMV. Clonage du gène de résistance et développement de variétés résistantes.
Technologie
‐ Procédé permettant le clonage du gène de résistance au virus RYMV pouvant être transféré à des variétés sensibles par voie conventionnelle pour développer facilement et rapidement des variétés résistantes. ‐ Permet l’amélioration des plantes basés sur des résistances naturelles aux pathogènes des végétaux. Stade de développement : Preuve de concept réalisée Description
Cette invention consiste en l’identification de marqueurs moléculaires du locus d’un gène majeur intervenant pour la résistance au virus de la panachure jaune du riz. Cette résistance au RYMV est liée à un gène récessif présent dans les 2 souches Oryza sativa et Oryza glaberrima. Ce procédé permet aussi l’établissement de la cartographie physique de la résistance et le clonage du gène. Sa mise en œuvre nécessite l’amplification sélective par PCR de fragments d’ADN de riz d’individus résistants et sensibles. Ces fragments sont préalablement soumis à une étape de digestion, avec les enzymes de restriction EcoRI et MesI, puis de ligation pour fixer des adaptateurs complémentaires d’amorces ayant, à leur extrémité, un ou plusieurs nucléotides spécifiques. L’une des amorces du couple est marquée aux fins de révélation. La séparation des produits PCR se fait par électrophorèse sur gel dans des conditions dénaturantes. L’étude comparative des profils obtenus avec les fragments provenant des variétés parentales révèlent 2 bandes polymorphes spécifiquement présentes chez les variétés sensibles, le polymorphisme étant génétiquement lié au locus de résistance. Le taux de recombinaison génétique entre le marqueur et le locus de résistance peut être calculé pour valider les résultats. Ces 2 bandes polymorphes de 510 et 140pb déterminent 2 segments chromosomiques inférieurs à 10cM flanquant le locus de résistance. L’isolement et le clonage de ces fragments permettent l’obtention d’un ADNc capable de s’hybrider avec un clone BAC criblé à partir d’une banque disponible auprès de l’IRRI. Cette banque est constituée de fragments d’ADN de 100 à 150 kb d’une variété de riz telle que IR64. L’ADNc peut s’hybrider avec un clone appartenant à un contig renfermant les séquences d’ADN des marqueurs identifiés à partir des souches sensibles. Cet ADNc peut donc être utilisé en tant que marqueur de haute spécificité vis‐à‐ vis du locus pour prédire un phénotype résistant.