Diagnostic et suivi de la gestation chez la lapine par échographie avec une sonde de 12,5 MHz M. CARON1, D. BENCHARIF1, L. BRIAND1, D. TAINTURIER1* 1Biotechnologie et Pathologie de la Reproduction, ONIRIS – Ecole Nationale Vétérinaire, Agroalimentaire et de l’Alimentation – Site de La Chantrerie, BP 40706, 44307 NANTES Cédex 03, FRANCE. *Auteur chargé de la correspondance : [email protected] RÉSUMÉ Six lapines (Néo Zélandais X Fauve de Bourgogne), sont suivies quotidiennement pendant leur gestation par échographie à l’aide d’une sonde de 12,5 MHz Les premières vésicules embryonnaires apparaissent le 6ème jour suivant la saillie, mais elles deviennent évidentes à J7. Le placenta bilobé est visible à J8, l’embryon à J9. Le foie, l’estomac, les poumons sont visibles à J17, l’ossification commence à J18 et se termine à J24. Les reins sont identifiables à J26. SUMMARY Diagnosis and ultrasonic examination of pregnancy in the rabbit with a probe of 12,5 MHz Pregnancy in 6 does (New Zealand x Fauve de Bourgogne) was monitored using ultrasonography with a 12.5 MHz probe. The first embryonic vesicles appear from the 6th day after mating. The bilobar placenta is visible on d8 and the embryo on d9. The liver, stomach, and lungs of the embryo are visible from d17; ossification begins on d18 and is complete by d24. The kidneys are identifiable on d26. Mots clés : Gestation, lapine, échographie. Keywords: Pregnancy, rabbit, ultrasonography. Introduction En raison des similarités de développement des premiers stades embryonnaires entre l’embryon humain et l’embryon de lapin, de la placentation hémochoriale de la lapine se rapprochant de celle de la femme, et de l’utilisation du lapin comme modèle dans le développement des biotechnologies de la reproduction (transgénèse, clonage…), les chercheurs ont besoin d’outils fiables pour diagnostiquer et suivre la gestation chez le lapine. Dans les élevages cunicoles, le diagnostic de gestation est réalisé autour du 12ème ou 14ème jour post-saillie. Selon les différentes études, l’échographie permet d’établir un diagnostic de gestation le 9ème ou le 10ème jour [2, 7, 8, 9]. L’échographie permet en outre d’estimer la taille de la portée [2]. Diagnostiquer précocément la gestation et suivre son bon déroulement permettrait aux éleveurs de remettre rapidement à la reproduction les lapines non gestantes et de détecter la présence d’éventuels troubles de la fertilité dans leur élevage. Le diagnostic et le suivi de gestation par échographie chez la chienne et la chatte est désormais bien référencé. Même si la population de lapins domestiques est moins importante que celle de chiens ou de chats, l’engouement actuel pour les NACs est à l’origine d’exigences accrues concernant les connaissances vétérinaires en médecine, chirurgie et reproduction chez les rongeurs et lagomorphes. Cependant, les études concernant le diagnostic et le suivi de la gestation par échographie chez la lapine sont encore peu nombreuses et ont été réalisées avec des sondes de fréquence de 5 ou 7,5 MHz. Revue Méd. Vét., 2012, 163, 6, 309-315 L’objectif de ce travail est de suivre la gestation chez la lapine à l’aide d’une sonde de 12,5 MHz afin d’évaluer la faisabilité de réaliser des diagnostics de gestation plus précoces que ceux obtenus dans les précédentes études et de créer une banque d’images de meilleure qualité que celles obtenues avec des sondes de plus faible fréquence. Matériel et Méthodes ANIMAUX Au cours de cette étude, six lapines primipares de plus d’un an, pesant entre 3,5 kg et 4,5 kg, de race croisée (Néo-Zélandais et Fauve de Bourgogne) ont été suivies. Les quatre mâles utilisés lors des saillies étaient du même croisement. Les animaux provenaient du service de biotechnologie et de pathologie de la reproduction de l’Ecole nationale Vétérinaire de Nantes et étaient hébergés dans des conditions identiques. ECHOGRAPHE L’échographe utilisé était un appareil Ixos N/B associé au logiciel Imagelab pour l’enregistrement des images et muni d’une sonde linéaire de fréquence réglable : 7,5, 10 et 12,5 MHz. MISE À LA REPRODUCTION DES LAPINES Le mode de reproduction utilisé était la saillie naturelle. Chaque lapine était laissée dans la cage d’un des mâles pendant 310 une demi-journée, si elle refusait clairement le mâle elle était rapidement retirée. SUIVI DE GESTATION TAINTURIER (D.) ET COLLABORATEURS découle de l’observation de ce qui est appliqué chez la chienne lors du suivi de gestation [4, 5] et des précédentes études chez la lapine [2, 3]. Lorsque plusieurs mesures étaient réalisées sur une même lapine, pour un paramètre et un jour donné, nous faisions la moyenne des valeurs obtenues pour les différents fœtus. Six gestations ont été suivies, menées sur quatre lapines différentes. Le suivi débutait, selon les gestations, au 4ème, 5ème ou 6ème jour post-saillie, en vue d’améliorer le diagnostic précoce de gestation, établi à J9 dans l’étude de Chavatte-Palmer (2008) [8]. Résultats DIAGNOSTIC DE GESTATION A la première séance, les lapines étaient tondues largement, de l’appendice xyphoïde jusqu’au pubis, le long de la ligne blanche et de part et d’autres des chaînes mammaires. Les lapines étaient placées en décubitus dorsal et maintenues par un ou deux aides. Les premières vésicules embryonnaires sont identifiées dès J6. Elles sont sphériques, anéchogènes, possédent deux points hyperéchogènes dorsalement et ventralement et s’accompagnent d’un renforcement postérieur. Elles mesurent 5 mm en moyenne (figure 1). L’examen durait entre 10 et 30 minutes. Le nombre de structures embryonnaires ou placentaires étaient moindre en début de gestation, l’examen était plus rapide. Toutes les vésicules embryonnaires sont visibles à J7. Le trophoblaste et le placenta sont alors nettement identifiables (figure 2). Dans la mesure du possible, les séances étaient quotidiennes, jusqu’au jour de la mise bas, sauf chez une lapine où le suivi a été arrêté le 10ème jour. Pour ces 6 gestations : 42 lapereaux sont nés (moyenne 7 nouveau-nés/lapine). Au cours de cette étude il n’y a eu aucun avortement, ni aucun mort-né. CHOIX DES ORGANES ET MESURES À CONSIDÉRER Les dates d’apparition des différentes structures et des différents organes embryonnaires et fœtaux ont été recherchées.. La longueur de la vésicule embryonnaire (J6-J13), la longueur de l’embryon (distance crânio-caudale la plus grande, à la base de la queue) (J10-J24), le diamètre bipariétal (distance entre les os pariétaux sur une coupe transversale de la tête) (J20-J31) et le diamètre abdominal (distance la plus grande sur une coupe transversale de l’abdomen passant par l’estomac) (J16-J31) ont été suivis. Le choix de ces paramètres FIGURE 1 : Ampoule embryonnaire au sein de la corne utérine au 6ème jour de gestation (MC). DÉVELOPPEMENT DES ANNEXES A partir de J8, le placenta est nettement visible et bilobé. Les vésicules embryonnaires mesurent en moyenne 8,8 mm de diamètre. A ce stade, la vésicule vitelline occupe entièrement la cavité de l’ampoule embryonnaire. A J11 le cordon ombilical, très court peut être observé : il s’insère entre les deux lobes du placenta (figures 3 et 4). Sur certaines coupes l’allantoïde est reconnaissable (figure 5). Le diamètre des vésicules embryonnaires atteint 14,3 mm. L’amnios est difficilement observable : à partir de J13, il se présente sous la forme d’une fine ligne échogène presqu’accolée à l’embryon (figure 6). FIGURE 2 : Vésicules embryonnaires : trophoblaste et placenta (J7) (MC). Revue Méd. Vét., 2012, 163, 6, 309-315 EXAMEN ÉCHOGRAPHIQUE DE LA GESTATION DE LA LAPINE 311 FIGURE 3 : Cordon ombilical 11 jours après la saillie (MC). FIGURE 4 : Cordon ombilical 14 jours après la saillie (MC). FIGURE 5 : Sac allantoïdien entourant l’embryon (J12) (MC). FIGURE 6 : Sacs allantoïdien et amniotique 13 jours après la saillie (MC). SUIVI ÉCHOGRAPHIQUE DE L’EMBRYON moins échogènes que le foie (figure 12). Les membres sont formés. L’embryon mesure environ 18,2 ± 1,1mm (n = 8). L’embryon est visualisé dès J9 (figure 7). Il mesure 2 mm. Les battements cardiaques sont repérables dès ce stade. A J11, la tête est distincte du corps et mesure la même longueur. Le tube neural est reconnaissable (figure 8). L’embryon mesure 5.4 ± 1,1 mm (n = 7). A partir de J13, la tête devient plus courte que le corps. A J14, l’embryon est aussi long que le placenta (11,4 mm en moyenne). Deux nouvelles structures apparaissent : le bourgeon caudal (figure 9) et la moelle épinière (figure 10). A J15 les vésicules optiques et les bourgeons des membres se discernent (figure 11). L’embryon est devenu plus long que le placenta 14,6 ± 1,5 mm, (n = 12). Barone (1990) considère que le stade fœtal chez le lapin est atteint au 17ème jour de gestation [1]. A ce stade, le foie, l’estomac et les poumons sont reconnaissables, de même que la vessie selon son état de réplétion. Les poumons sont alors Revue Méd. Vét., 2012, 163, 6, 309-315 SUIVI ÉCHOGRAPHIQUE DU FŒTUS Les os de la face et les côtes (os maxillaires, mandibulaires et nasaux) débutent leur ossification à partir de J18 : ces dernières forment des taches de plus en plus échogènes s’individualisant progressivement (figure 13). Dès ce stade, le bourgeon génital peut être observé (figure 14). Les premiers cônes d’ombres apparaissent à J21 sous les os du crâne et les côtes (figure 15), et le squelette des membres antérieurs commencent à s’ossifier. Le diamètre abdominal atteint 13,9 mm en moyenne et le diamètre bipariétal 9,7 mm. A J22, les poumons deviennent plus échogènes que le foie. Cette différence s’accentue par la suite (figure 16). A J23 les trois points d’ossification de la colonne vertébrale sont observables (figures 17 et 18). Le diamètre bipariétal mesure 11 mm et le diamètre abdominal 18,9 mm. 312 TAINTURIER (D.) ET COLLABORATEURS FIGURE 7 : Embryon J9 (MC). FIGURE 8 : Embryon en coupe longitudinale à J11 : tête, corps, et tube neural (MC). FIGURE 9 : Embryon en coupe longitudinale à J14 : bourgeon caudal (MC). FIGURE 10 : Embryon en coupe longitudinale à J14 : moelle épinière (MC). FIGURE 11 : Embryon en coupe longitudinale à J15 : bourgeons des membres antérieurs et vésicules optiques (MC). FIGURE 12 : Coupe longitudinale d’embryon à J17 (MC). Revue Méd. Vét., 2012, 163, 6, 309-315 EXAMEN ÉCHOGRAPHIQUE DE LA GESTATION DE LA LAPINE 313 FIGURE 13 : Foetus en coupe sagittale à J18 : visualisation des côtes (MC). FIGURE 14 : Bourgeon génital et os de la face (J18) (MC). FIGURE 15 : Fœtus à J21 : cônes d’ombre sous les os pariétaux et maxillaires (MC). FIGURE 16 : Fœtus à J24 : visualisation des cônes d’ombres sous la colonne vertébrale et différence d’échogénicité entre le foie et les poumons (MC). FIGURE 17 : Fœtus en coupe longitudinale à J23 : observation de deux points d’ossification par vertèbre (MC). FIGURE 18 : Fœtus en coupe transversale à J23 : observation des trois points d’ossification d‘une vertèbre lombaire (MC). Revue Méd. Vét., 2012, 163, 6, 309-315 314 TAINTURIER (D.) ET COLLABORATEURS A partir de J24 l’ensemble du squelette du fœtus est ossifié (présence de cônes d’ombres). Les intestins sont visualisés (figure 19), alors que les reins deviennent identifiables à J26 (figure 20). Le diamètre abdominal mesure 23,6 mm en moyenne et atteint 26,2 mm en fin de gestation (J29), tandis que le diamètre bipariétal passe de 13,3 mm à 15,5 mm. FIGURE 19 : Masse intestinale à J24 (MC). FIGURE 18 : Fœtus à J26 : observation des reins (MC). Jours 6 7 8 9 11 13 14 15 17 18 21 22 23 24 26 Le tableau n°1 résume les dates d’apparitions des différents organes embryonnaires et fœtaux Déroulement de la gestation Premières vésicules embryonnaires Trophoblaste et placenta Placenta bilobé Embryon Coeur Cordon ombilical Allantoïde Tube neural Tête et corps de même longueur Tête bien délimitée, plus courte que le corps Amnios Bourgeon caudal Moelle épinière Embryon aussi long que le placenta Cordon ombilical nettement distinguable Bourgeons des membres bien visibles Vésicules optiques Embryon plus long que placenta Les membres sont formés (doigts visibles) Foie, poumons, estomac, poumons moins échogènes que le foie Bourgeon génital Début de l’ossification des côtes et des os du crâne Apparition de l’ombre des côtes et des os du crâne Début de l’ossification du squelette appendiculaire antérieur et des vertèbres cervicales Poumons légèrement plus échogènes que le foie Trois points d’ossification de la colonne vertébrale Tous les os ont un cône d’ombre. Intestins Reins TABLEAU I : Dates d’apparition des différents organes et principaux faits marquants en fonction du stade de gestation chez la lapine. Revue Méd. Vét., 2012, 163, 6, 309-315 EXAMEN ÉCHOGRAPHIQUE DE LA GESTATION DE LA LAPINE 315 Discussion SUIVI DES ANNEXES EMBRYONNAIRES DIAGNOSTIC DE GESTATION Chez la lapine, le placenta est discoïde et bilobé, ce que nous pouvions facilement visualiser à l’échographie à partir du 8ème jour post-saillie. La vésicule vitelline régresse à partir de J11 au profit de l’allantoïde, et disparait à J17 [1]. L’amnios était difficilement observable : il apparait normalement au 10ème jour de gestation, nous l’avons observé occasionnellement à partir de J13. Avec des sondes de 5 à 7,5 MHz, les vésicules embryonnaires ont été mises en évidence de manière certaine à partir de J9 dans les précédentes études [2, 7, 8, 9]. Machet (2006) estime que les vésicules embryonnaires peuvent être confondues avec les fèces avant le 8ème jour [6]. Le meilleur pouvoir de résolution des sondes de 12,5 MHz nous a permis de mettre en évidence les premières vésicules embryonnaires dès le 6ème jour et de préciser la taille de la portée dès J7. Chez la lapine, comme chez toutes les espèces à ovulation multiple, les ovulations sont étalées dans le temps, c’est la raison pour laquelle toutes les vésicules embryonnaires ne sont pas visibles le 6ème jour et qu’elles peuvent avoir des tailles fort différentes. Conclusion Une sonde de fréquence 12,5 MHz peut être utilisée pour le suivi échographique de la gestation chez la lapine afin d’établir un diagnostic de gestation dès le 6ème jour, d’estimer la taille de la portée dès le 7ème jour après la saillie, d’observer l’embryon à partir du 9ème jour et d’estimer sa viabilité grâce aux battements cardiaques et de suivre précisément son développement jusqu’au 26ème jour. SUIVI DE L’EMBRYON Dans les précédentes études [8, 9], l’embryon était visualisé pour la première fois au 10ème jour de gestation. Nous avons pu l’identifier à partir de J9, et dès ce stade les battements cardiaques nous permettaient d’évaluer la viabilité des fœtus. L’apparition du bourgeon caudal, de la moelle épinière, des bourgeons des membres, des vésicules optiques, l’évolution de la longueur de la tête par rapport à celle du corps et celle de l’embryon par rapport au placenta n’avaient pas encore été observés par échographie. SUIVI DU FŒTUS A ce stade, nous pouvions distinguer à l’échographie la majorité des organes, et les membres étaient visibles L’évolution de l’ossification du squelette fœtal par échographie n’avait pas encore fait l’objet d’études. Chez la chienne, l’ossification du squelette fœtal commence par les os du crâne et les côtes, puis le squelette axial et les membres antérieurs et enfin les membres postérieurs [3], ce qui est analogue à nos observations. Certains auteurs ont visualisé les reins dès J21 [2, 6]. Nous n’avons pu les mettre en évidence que tardivement (J26). Cependant, Machet (2006) précise que l’observation des reins reste rare et délicate. Revue Méd. Vét., 2012, 163, 6, 309-315 Bibliographie 1. - BARONE R. : Appareil urogénital. In : Anatomie comparée des mammifères domestiques – Tome IV – Splanchnologie II : appareil uro-génital, fœtus et ses annexes, péritoine et topographie abdominale. Vigot frères Editeur, Paris, 1990, 435-441, 512-601. 2. - CHAVATTE-PALMER P., LAIGRE P., SIMONOFF E., CHESNE P., CHALLAH-JACQUES M., RENARD J.P.: In utero characterisation of fetal growth by ultrasound scanning in the rabbit. Theriogenology, 2008, 69, 859-869. 3. - CHETBOUL V., POUCHELON J.L., TESSIER-VETZEL D., BUREAUAMAGLIO S., BLOT S., COTARD J.P., SIMON M., TAINTURIER D. : Echographie et doppler du chien et du chat. Masson, Paris, 2005, 3-12, 380-402. 4. - ENGLAND G.C.W., ALLEN W.E., PORTER D.J.: Studies on canine pregnancy using B, mode ultrasound: Developpement of the conceptus and determination of gestational age. J. Small Anim. Pract., 1990, 31, 324-329. 5. - GARAND A. : Diagnostic ultra précoce et suivi de gestation chez la chienne, par échotomographie à l’aide d’une sonde de 12,5 MHz. Th. D. Vet., Nantes, 2006. 6. - MACHET E. : Caractérisation de la croissance fœtale in utero par échographie chez la lapine. Th. D. Vet., Alfort, 2006. 7. - RINCK I., SEHIC M., BUTKOVIC V., STANIN D., KADUNC I.: Ultrasonographic diagnosis of pregnancy in the rabbit. Veterinarski archiv., 1993, 63, 61-65. 8. - TAINTURIER D., FIENI F., ESCOUFLAIRE P. : Diagnostic de la gestation chez la lapine par échotomographie. Rev. Méd. Vét., 1986 , 137, 3, 163-167. 9. - YPSILANTIS P., SARATSIS P.: Early pregnancy diagnosis in the rabbit by real time ultrasonography. World Rabbit Science, 1999, 7, 2, 95-99.