Approche du mécanisme d`action du monophosphate trisodique

APPROCHE DU MECANISME D'ACTION DU MONOPHOSPEATE TRISODIQUE
( TSP, AVGATd@)
SURLES BACTERIES A GRAM NEGATTT
Vincent Sophie,Ponato Isabelle'DesnottesJ.F.
Rhône-PoulencRorer,Biologie Antibactériens,13 quai JulesGuesdeBP 14, 94403VitrylSeine Cedex
Résumé
Développepar Rhône-Poulenccommedécontaminantsur les chaînesd'abattagede volailles, le TSP permet de
réduirede 1,5 log au moins le nombrede bactéries( Salmonellatyphimurium,Escherichiacoli) présentessur
les volailles. Un modèlein vitro a montré I'effet bactéricideélevé du TSP, lorsqu'il est utilisé à l0 o/o.Sur des
en semmphysiologique,le TSP a
aeruginosa)resuspendues
bactéries(5. typhimurium,E. coli et Pseudomonas
montré un effet bactériolytique,et une action au niveau des membranesbactériennes( restaurationde I'activité
antibactériennede la spiramycine,macrolide inactif sur les bactériesà Gram négatif ; étudesde microscopie
électroniquemettanten évidencedesaltérationsdesparois).
Introduction
Rhône-Poulenca développéun procedé de decontaminationà base de monophosphatetrisodique ( TSP,
AvGard@)utilisé sur les chaînes d'abattagede volailles. Des études préliminaires ont montré sa grande
efficacité contre des bactériesà Gram négatif ( Salmonella typhimurium, Escherichia coli't ( Somerset al.,
1994),notammentau niveaude la paroibactérienne( Mendoncaet al., 1994).
Matériclset Méthodes
L Bactéricidie
Des bactéries[5. typhimuriumPL,5.106 UnitésFormantColonieVml,( UFC/ml)] ont été misesen contact
en serumphysiologique,et
avecdiftrentes concentrations
de TSP. Aprèscentrifugation,lavage,resuspension
dilution, un dénombrement
a étéeffectuéaprèsune nuit d'incubationà 37oCsur milieu Luria-Bertani( LB) en
boîtesde Petri.
IL Effet lytique
Après resuspensionen serum physiologique,des bacéries ( S. typhimurium IPL en phase statonnaire ou
exponentielle,106UFCyml)ont étémisesen contactavecdu TSP ( I et l0 7o).La densitéoptique a été mesurée
pendant 5 min au spectrophotomètreBeckman DU?O. Un dénombrementbactérien sur boîtes de Petri a été
efrectuéà la fin de I'expérience.
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Résultats
Un dénombrementbactériensur boîtes de Petri a été effectuéafin de mesurerle pouvoir bactéricidedu TSP
utilisé à différentesconcentrations( de I à lO "/ù.A partir d'un inoculum de 5.106IJFC/mt, une chute de 2 log
est déjà observeeen présencede 2 o/ode TSP. Une bactéricidiemaximale( 5 log) est mise en évidenceavecdes
concentrationsde TSP comprisesentrc 8 et lO %o( Figure l).
FIGLIRE I : Mezurede la bactéricidiede S. typhimuriumIPL en présencede difrérentesconcentrationsde TSP.
10000000
10000m
100000
10000
à
h
1000
100
l0
I
En milieu LB, le TSP n'induit pas d'effet lytique. En revanche,desbactériesen phasestatonnaire ou en phase
exponentielle,resuspendues
en serumphysiolosique.misesen présencede TSP ( l, 5, ou l0 7o)présententune
lyse ( Figwes 2 et 3). Cette lyse est plus importante pour les bactériesen phase exponentielle ( entre 60 et
85 o/o)que pour cellesen phasestationnaire( entre 25 et 45 Vù.De plus, cet effet lytique est inversement
proportionnelà la concentrationde TSP. Néanmoins,le maximum de lyse est atteint en moins de I min, quels
que soient l'état physiologiquedes bactérieset la concentrationde TSP utilisée. A la fin de I'expérience,un
prélèvementa été effectuéafin de dénombrerles bactériessurvivantes.L'effet bactéricidedu TSP ( rc %) a été
confirmé puisqu aucunecoloniebactériennen'a pu être détectéeaprès18 h d'incubationà 37oC.
FIGURE 2 : Cinétiquede lyse de S. typhimuriumDL ( phasestationnaire)en présencede TSP L %o(o),
5 %o(t), et lO yo (f ). Les résultatssontexprimésen pourcentage
du contrôle.
S80
Âæ
ê
É
E
-..-TS 1016
-+Tæstt
5'|()
...-Tæl%
!æ
254
FIGURE 3 : Cinétique de lyse de S. typhimurium IPL ( ohaseexoonentielle)en présencede TSP I %o(o),
5 Yo(t), et lO %o(a). Les résultatssontexprimésen pourcentagedu contrôle.
.+TSl09/o
-.-1S5%
-.-TSl%
Discussion
L'étude du mode d'action du TSP est renduediffrcile du fait mêmede son effrcacité svr S. typhimurium, noùs
obligeantà utliser de forts inocula bactériens,bien superiewsà la réalité rencontreesur les chaînesd'abattage
de volailles. Néanmoinsle TSP, utilise à l0 oZ,démontreun fort effet bactéricide( 5log) sur un inoculum
bactériende 5.106UFC/ml, ainsi qu'un effet lytique, qui varie entre 25 et 60 o/oselon l'état physiologiquedes
bactéries.Un dénombrement,effectuésur la fracton non lysée,a montré une bactéricidietotale. L'efficacité du
TSP laisseà penserà une déstabilisationde la membraneexterne.Cettedéstabilisationpeut être expliquéepar
une chélationde cationsinduisantune modiFrcationde I'osmolarité.
Références
Mendonca4.F., AmorosoT.L., KnabelS.J.,1994.Appl.Environ.Microbiol.,60,4009-4014.
SomersE.B., SchoeniJ.L.,WongA.C.L., 1994.Int. J. FoodMicrobiol.,22,269-276.
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