Dosage du zinc : Mode d'emploi BioSystems

M12526f-05 01/2023
ZINC
BROMO-PAPS
ZINC
CODE 12526 50 mL
CONSERVER À 2-8ºC
Réactifs pour mesurer la concentration de zinc
Pour une utilisation in vitro en laboratoire uniquement
FONDEMENT DE LA MÉTHODE
Le zinc présent dans l’échantillon réagit avec le 5-Br-PAPS dans un milieu alcalin créant un complexe coloré qui
peut être quantifié par spectrophotométrie1.
CONTENU ET COMPOSITION
A1. Réactif. 2 x 15 mL. Carbonate de sodium 240 mmol/L, pH 10,0.
A2. Réactif. 2 x 5 mL. Citrate de sodium 170 mmol/L, Salicylaldoxime 24 mmol/L, conservateurs.
B. Réactif. 1 x 10 mL. Carbonate de sodium 50 mmol/L, 5-Br-PAPS 0,25 mmol/L.
S. Étalon zinc. 1 x 3 mL. Zinc 2000 g/dL (306 mol/L). Étalon primaire en phase aqueuse.
ATTENTION: H317: Peut provoquer une allergie cutanée. P302+P352: EN CAS DE CONTACT AVEC LA
PEAU: laver abondamment à l’eau et au savon. P333+P313: En cas d’irritation ou d'éruption cutanée:
consulter un médecin.
Pour d’autres mises en garde et précautions, voir la fiche de données de sécurité du produit (SDS).
CONSERVATION
Conserver à 2-8ºC.
Les réactifs sont stables jusqu’à la date de péremption indiquée sur l’étiquette, à condition de les conserver bien
fermés et d’éviter la contamination lors de leur utilisation.
Indications de détérioration :
 Réactifs: Présence de particules, turbidité, absorbance du blanc supérieur à 0,300 à 560 nm (cuvette de 1
cm).
 Étalon: Présence de particules, turbidité.
RÉACTIFS AUXILIAIRES
Calibreur de Bioquímica (BioSystems code 18011) ou Calibreur de Bioquímica Humain (BioSystems code
18044).
PRÉPARATION DES RÉACTIFS (Note 1)
Réactif A: vider le contenu du flacon de Réactif A2 dans le flacon du Réactif A1. Mélanger doucement. Si
d’autres volumes doivent être préparés, mélanger dans la proportion : 3 mL de Réactif A1 + 1 mL de Réactif A2.
Stable pendant 2 mois à 2-8ºC.
Réactif B et étalon (S): Prêts à l’emploi.
Les réactifs ouverts et conservés dans le compartiment réfrigéré de l’analyseur sont stables pendant 2 mois.
ÉQUIPEMENT SUPPLÉMENTAIRES
Analyseur, spectrophotomètre ou photomètre pour des lectures à 560 nm.
ÉCHANTILLONS
Plasma séminal: Liquéfiez l’échantillon de sperme frais par incubation à 37 ºC pendant 30 minutes. Centrifugez
l’échantillon de sperme restant après l’analyse de sperme pendant 10 minutes à 1000 g, afin de séparer les
spermatozoïdes, et faites décanter le plasma séminal2. Stable à -20 ºC.
Sérum ou plasma héparinisé recueilli moyennant des procédures standard. Stable 1 an à -20°C, 2 semaines à
4-8°C ou 1 semaine à 20-25°C.
CALIBRAGE
Pour la mesure dans le plasma séminal, utiliser l’Étalon zinc (S). Pour la mesure dans du sérum ou plasma
héparinisé, utiliser le Calibreur de Biochimie.
Il est recommandé de réaliser le blanc tous les jours et de calibrer au moins toutes les 2 mois, après un
changement de lot de réactif ou lorsque les procédures de contrôle de la qualité l’indiquent.
PROCÉDURE
Dilution de l’échantillon (plasma séminal) (Note 1)
L’étalon et les échantillons de sérum ou plasma héparinisé ne requièrent aucun traitement préalable.
1. Pipeter dans un tube à essai:
Plasma séminal
200 L
Eau distillée
800 L
2. Mélanger légèrement. L’échantillon dilué est stable 8 heures à 15-25ºC ou 24 heures à 2-8ºC.
Procédure automatisée (Note 2)
A25
A15
GÉNÉRAL
Technique
ZINC
ZINC
Mode d’analyse
Différentiel bir
Différentiel bir
Type d’échantillon
SÉM/SÉR
SÉM/SÉR
Unités
g/dL
g/dL
Type de réaction
croissante
croissante
Décimaux
0/1
0/1
Nombre Répétitions
1
1
Nom de la technique dans le
rapport de patient
-
-
PROCÉDURE
Lecture
monochromatique
monochromatique
Volumes
Échantillon
3/15
3/15
Réactif 1
240
240
Réactif 2
60
60
Lavage
1,2
1,2
Facteur pré-dilution
5* /-
5* /-
Facteur post-dilution
2
2
Filtres
Principal
560
560
Référence
-
-
Temps
Lecture 1
105 s
120 s
Lecture 2
420 s
432 s
Réactif 2
120 s
144 s
CALIBRAGE
Type de calibrage
spécifique/multiple
spécifique/multiple
Répétitions calibreur
3
3
Répétitions blanc
3
3
Courbe de calibrage
-
-
OPTIONS
Limite absorbance blanc
0,3
0,3
Limite blanc cinétique
-
-
Limite de linéarité
30000/1 250
30000/1 250
* Prédilution par l’utilisateur
Procédure manuelle (Note 1, 3)
1. Pipeter dans des tubes à essai:
Blanc Réactif
Blanc
Échantillon
Calibreur
Échantillon
Eau distillée (SÉM/SÉR)
12/60 L
-
-
-
Étalon Zinc
-
-
12 L
-
Calibreur Biochimique
-
60 L
60 L
-
Plasma Séminal
-
-
-
12 L
Sérum / Plasma
-
60 L
-
60 L
Réactif A
960 L
1200 L
960 L
960 L
Réactif B
240 L
-
240 L
240 L
2. Bien mélanger et incuber pendant 5 minutes à température ambiante.
3. Lire l’absorbance (A) des Blancs d’Échantillon à 560 nm par rapport à l’eau distillée.
4. Lire l’absorbance (A) des Échantillons et du Calibreur à 560 nm par rapport au Blanc de Réactif.
5. Calculer la concentration de zinc en employant les formules suivantes :
Plasma Séminal
Sérum / Plasma
x 10000 = g/dL Zinc
x 1529 = mol/L Zinc
x C Calibreur = g/dL zinc
x C Calibreur = mol/L zinc
VALEURS DE RÉFÉRENCE
Plasma séminal3,4 : 5000 - 50000 g/dL (764 - 7644 mol/L).
Sérum5 : 80 - 120 g/dL (12 - 18 mol/L).
Ces valeurs ne sont données qu’à titre indicatif ; il est conseillé à chaque laboratoire d’établir ses propres
valeurs de référence.
CONTRÔLE DE QUALITÉ
Il est recommandé d’employer le Contrôle Biochimique de Fertilité (Cod. 18053) et les Sérums Contrôle
Biochimique niveaux I (Codes 18005 et 18009) et II (Codes 18007 et 18010) pour vérifier la fonctionnalité des
procédures de mesure.
Chaque laboratoire doit établir son propre programme de contrôle de qualité interne et des procédures de
correction si les contrôles sont hors des tolérances acceptables.
CARACTÉRISTIQUES MÉTROLOGIQUES
Les données suivantes ont été obtenues en utilisant un analyseur A25. Les résultats sont similaires à ceux de
l’A15. Les détails sur les données d’évaluation sont disponibles sur demande.
 Limite de détection: 176 g/dL = 27 mol/L (plasma séminal) ; 7,7 g/dL = 1,2 mol/L (sérum).
 Limite de linéarité: 30000 g/dL = 4586 mol/L (plasma séminal) ; 1250 g/dL = 191 mol/L (sérum). Pour
des valeurs supérieures, diluer l’échantillon traité 1/2 avec de l’eau distillée et répéter la mesure.
 Répétabilité (intrasérie):
Plasma Séminal
CV
n
Sérum
CV
n
6990 g/dL = 1070 mol/L
1,6 %
20
69,8 g/dL = 10,7 mol/L
4,1 %
20
13600 g/dL = 2080 mol/L
0,9 %
20
95,7 g/dL = 14,6 mol/L
2,9 %
20
 Reproductibilité (intersérie):
Plasma Séminal
CV
n
Sérum
CV
n
6990 g/dL = 1070 mol/L
2,1 %
25
69,8 g/dL = 10,7 mol/L
4,8 %
25
13600 g/dL = 2080 mol/L
2,0 %
25
95,7 g/dL = 14,6 mol/L
3,6 %
25
 Véracité: Les résultats obtenus avec cette procédure n’ont pas montré de différences systématiques par
rapport à ceux obtenus avec une procédure de référence. Les détails des expériences de comparaison sont
disponibles sur demande.
 Interférences: La bilirubine (20 mg/dL) n’interfère pas. La lipémie (triglycérides 10 g/L) et l’hémolyse
(hémoglobine 1,25 g/L) peuvent affecter les résultats. D’autres médicaments et substances peuvent
interférer6.
CARACTÉRISTIQUES DIAGNOSTIQUES
Le zinc est un métal de transition essentiel dans la nutrition humaine. Les sources diététiques les plus riches en
zinc se trouvent dans la viande rouge et le poisson. Plus de 200 métalloenzymes de zinc se produisent dans les
six catégories de systèmes d’enzymes.
Les niveaux de zinc dans le plasma séminal sont rattachés à la fertilité masculine. Sa concentration est
employée comme marqueur de la fonction sécrétoire de la glande prostatique. Des valeurs faibles indiquent une
altération de la fonction sécrétoire, possiblement suite à l’obstruction des conduits due à une inflammation à
caractère aigu ou chronique4.
Une carence sévère de zinc dans le sang se traduit par des retards de la croissance et l’augmentation du risque
d’avoir des maladies infectieuses. Des carences moins sévères produisent des altérations de la fonction
immune, diarrhée, altérations cognitives, alopécie, lésions oculaires, entre autres résultats cliniques adverses.
Une alimentation contaminée de zinc implique une augmentation de la concentration de l’ion dans le sang,
provoquant une douleur abdominale, diarrhée, nausées et vomissements. Habituellement, le zinc est mesuré
dans le plasma héparinisé et non pas dans le sérum, pour éviter les contaminations découlant des érythrocytes,
plaquettes et leucocytes pendant la coagulation et centrifugation5.
NOTES
1. Le matériel employé doit être exempt de zinc. Il est conseillé d’utiliser un matériel jetable ou un matériel en
verre lavé à l’acide.
2. Ces réactifs peuvent être utilisés dans la plupart des analyseurs automatiques. Pour un grand nombre de
ceux-ci, les instructions sont disponibles sur demande.
3. Le blanc d’échantillon n’est réalisé que pour les échantillons de sérum ou de plasma héparinisé.
BIBLIOGRAPHIE
1. Makino T, Siato M, Horiguchi D, Kina KA. Highly sensitive colorimetric determination of serum zinc usign
water-soluble pyridylazo dye. Clin. Chim. Acta 1982; 120: 127-135.
2. Poirot C, Cherruau B. Infertilidad masculina. Aspectos clínicos e investigaciones biológicas. Acta Bioquim.
Clin. Latinoam. 2005; 39: 225-241.
3 Chia SE, Ong CN, Chua LH, Ho LM, Tay SK. Comparison of zinc concentrations in blood and seminal
plasma and the various sperm parameters between fertile and infertile men. Journal of andrology 2000;
21:53-57.
4 WHO laboratory manual for the examination and processing of human semen. WHO Press, 5th ed, 2010.
5. Tietz Textbook of Clinical Chemistry and Molecular Diagnostics, 4th ed. Burtis CA, Ashwood ER, Bruns DE.
WB Saunders Co, 2005.
6. Young DS. Effects of drugs on clinical laboratory tests, 5th ed. AACC Press , 2000.
AÉchantillon - ABlanc Échantillon
ACalibreur - ABlanc Calibreur