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La chromatographie
La chromatographie
aspects généraux
aspects généraux
Méthode de séparation et de quantification de composés Méthode de séparation et de quantification de composés
présents dans une phase homogène liquide ou gazeuse.
présents dans une phase homogène liquide ou gazeuse.
Le principe est basé sur les équilibres successifs des Le principe est basé sur les équilibres successifs des
composés présents entre 2 phases dont l’une est dite
composés présents entre 2 phases dont l’une est dite
stationnaire, emprisonnée dans la colonne et l’autre, dite
stationnaire, emprisonnée dans la colonne et l’autre, dite
mobile qui se déplace en entraînant les substances.
mobile qui se déplace en entraînant les substances.
L’entraînement différentiel des composés présents dans la
L’entraînement différentiel des composés présents dans la
colonne conduit à leur séparation.
colonne conduit à leur séparation.
Intérêt: couplage avec des détecteurs très sensibles. Intérêt: couplage avec des détecteurs très sensibles.
9
9le chromatogramme permet d’obtenir des informations qualitatives le chromatogramme permet d’obtenir des informations qualitatives
(temps de rétention d’un composé) et quantitative (surface ou
(temps de rétention d’un composé) et quantitative (surface ou
hauteur du pic chromatographique).
hauteur du pic chromatographique).
9
9domaine de mesure: 10 domaine de mesure: 10-
-3 3–
–10 10-
-9 9. Ordre du nanogramme.
. Ordre du nanogramme.

Sélectivité
?
RésultatsRésultats
ANALYSE
SéparationSéparation DétectionDétection
Préparation
d’échantillon
Types de matrices
Nombre d’échantillons à traiter
Appareillage à disposition
Type de détection (UV, Fluo, NPD, MS)
Possibilité d’automatisation
Types de matrices
Types de matrices
Nombre d’échantillons à traiter
Nombre d’échantillons à traiter
Appareillage à disposition
Appareillage à disposition
Type de détection (UV, Fluo, NPD, MS)
Type de détection (UV, Fluo, NPD, MS)
Possibilité d’automatisation
Possibilité d’automatisation
L’analyse de composés dans des matrices complexes (sang, urine,…
L’analyse de composés dans des matrices complexes (sang, urine,…) )
nécessite souvent une optimisation de la séparation
nécessite souvent une optimisation de la séparation chromatographique chromatographique. .
Processus analytique
Processus analytique

La chromatographie: historique
La chromatographie: historique
La chromatographie La chromatographie(du grec
chroma: couleur et graphein: écrire) a été inventée par
le botaniste Mikhail Tswett au début du XXème siècle.
Une colonne de CaCO3permet de séparer des
pigments végétaux (chlorophylles et xanthophylles).
Par adjonction de solvant, on obtient des bandes
colorées qui se déplacent le long de la colonne à des
vitesses propres.
Le Prix Nobel de chimie est attribué en 1952 aux
biochimistes Martin et Synge pour leur contribution au
développement de la chromatographie moderne.

Principe de base
Principe de base
¾
¾Le principe qui régit pratiquement toute Le principe qui régit pratiquement toute
purification / séparation en chimie, se base sur la
purification / séparation en chimie, se base sur la
(ré)partition d’une substance A (analyte) entre
(ré)partition d’une substance A (analyte) entre
deux phases
deux phases
Cristallisation Cristallisation: partition phase liquide : partition phase liquide – –phase phase
cristalline
cristalline
Distillation Distillation: partition phase liquide : partition phase liquide – –phase gazeuse phase gazeuse
Sublimation Sublimation: partition phase solide : partition phase solide – –phase gazeuse phase gazeuse
Extraction Extraction: partition entre deux phases liquides non : partition entre deux phases liquides non
miscibles (LLE) ou phase liquide
miscibles (LLE) ou phase liquide – –phase solide (SPE) phase solide (SPE)
Chromatographie Chromatographie: partition phase stationnaire : partition phase stationnaire – –
phase mobile.
phase mobile.

Principe de séparation
Principe de séparation
¾
¾Si le composé B a une grande affinité pour la phase Si le composé B a une grande affinité pour la phase
stationnaire et le composé A une grande affinité pour la
stationnaire et le composé A une grande affinité pour la
phase mobile, le composé A aura tendance à être
phase mobile, le composé A aura tendance à être élué élué
plus rapidement. Son temps de rétention sera plus petit
plus rapidement. Son temps de rétention sera plus petit
que le temps de rétention de B.
que le temps de rétention de B.
¾
¾Cette différence d’affinité pour les deux phases est le Cette différence d’affinité pour les deux phases est le
principe même de la chromatographie!
principe même de la chromatographie!
¾
¾Il existe diverses méthodes de chromatographie utilisées Il existe diverses méthodes de chromatographie utilisées
quotidiennement par les chimistes, biologistes, etc.
quotidiennement par les chimistes, biologistes, etc.
GC GC
HPLC HPLC
CCM CCM
EC EC
Etc Etc… …