TEST ELISA: POINT ESSENTIELS PRECISIONS TECHNIQUES POURQUOI REALISER CETTE ETAPE Préparer anticorps Préparer la veille par notre professeure Avoir les anticorps pour la suite du tp -100 μL de l’anticorps/puits Préparer la veille par notre professeure Les anticoprs de captures sont des anti HCG qui vont interagir par des liaison faibles avec le palstique particulier des plaques et s’adsorber sur le fond et la base de puit Lavage : remplir chaques puits avec 1X PBST et vider directement (5fois) Tenir les barettes à l’envers et tapotez fermement sur une serviette en papier pliée pour éliminer l’excès de liquide. Nettoyer l’assiette pour éliminer tout ce qui ne s’est pas lié 50 μL de solution standard(x3), 50 μL de l’échantillon de MR X(x3) et 50 μL de d’eau(x2) - les échantillons doivent être réaliser 3fois Disperser les échantillons dans chaques puits incuber toute une nuit au réfrigérateur (4 °C) Le froid permet de les conserver Ajouter 50μl de l’enzyme conjuguer anticorps à 10 mL ECI tampon Mélanger soigneusement l’Hcg va se fixer entre les deux anticorps Laver les assiettes 4fois Laver les assiettes eliminer les impurtés 100uL de l’enzyme par puit Mettre lenzyme dans les puits Incuber la plaque pdt 2heures ( T° ambiante) Permets aux anticoprs de se fixer à l’HGC Préparer 10 mL de tampon de 1X PNP à la température ambiante pour 2 comprimés. Puis ajoutez les tablettes PNP au tampon. Laver la plaque 5 fois avec 1X PBST. Enlever bulle dair dans les puits Mettre 100uL de PNP dans chaque puits Incuber la plaque pendant 15 à 60 minutes. Eliminer les AC non liés. Active la phosphatase alcaline. Les bulles d’air présentes au moment de la lecture peuvent modifier les résultats. Les cassers avec le bout de la pipette. Mesurer sur un lecteur de plaque à 405 nm Permet de visualiser nos résultats TEST DE MANCINI : Points essentiels Precisions technique Préparation du gel d’agar Réaliser par notre professeure Ajouter dans le tube à hémolyse l’agar Attention à la solidification du gel 100 μL d’anticorps antiHGC, et agiter Pourquoi Avoir un gel homogène Verser le gel dans la boite de pétri pour obtenir une couche homogène et horizontale. Puis on laisse solidifier l’agar Poser la boite sur une surface plane et ne plus la bouger Avoir un gel pour faire les puits Quand l’agar est bien figé, réaliser 6 puits distancés d’un centimètre. Avec un pipette et une poire. (s’entrainer au préalable sur d’autre gel simple) Pouvoir observer un cercle autour des puits Déposer 9 μL de chaque échantillons ( M1/M2/M3/M4 et Mr X) dans chaques puits. Ne pas se tromper dans l’identification des puits. On rempliera deux puits de X pour avoir un résultat plus précis. Après avoir laissé les échantillons s’absorber dans l’agar on met les boites a incuber Placer les lames au frais Le gel va permettre à l’HCG de se disperser autour des puits.
