protocoles immuno

TEST ELISA:
POINT ESSENTIELS PRECISIONS TECHNIQUES POURQUOI REALISER
CETTE ETAPE
Préparer anticorps Préparer la veille par notre
professeure
Avoir les anticorps pour la suite
du tp
-100 μL de l’anticorps/puits Préparer la veille par notre
professeure
Les anticoprs de captures sont
des anti HCG qui vont interagir
par des liaison faibles avec le
palstique particulier des
plaques et s’adsorber sur le
fond et la base de puit
Lavage : remplir chaques puits avec
1X PBST et vider directement
(5fois)
Tenir les barettes à l’envers et
tapotez fermement sur une
serviette en papier pliée pour
éliminer l’excès de liquide.
Nettoyer l’assiette pour
éliminer tout ce qui ne s’est pas
lié
50 μL de solution standard(x3), 50
μL de l’échantillon de MR X(x3)
et 50 μL de d’eau(x2)
- les échantillons doivent être
réaliser 3fois
Disperser les échantillons dans
chaques puits
incuber toute une nuit au
réfrigérateur (4 °C)
Le froid permet de les
conserver
Ajouter 50μl de l’enzyme
conjuguer anticorps à 10 mL ECI
tampon
Mélanger soigneusement l’Hcg va se fixer entre les deux
anticorps
Laver les assiettes 4fois Laver les assiettes
eliminer les impurtés
100uL de l’enzyme par puit Mettre lenzyme dans les puits
Incuber la plaque pdt 2heures ( T°
ambiante)
Permets aux anticoprs de se
fixer à l’HGC
Préparer 10 mL de tampon de 1X
PNP à la température ambiante
pour 2 comprimés. Puis ajoutez les
tablettes PNP au tampon.

Laver la plaque 5 fois avec 1X
PBST.
Enlever bulle dair dans les puits Eliminer les AC non liés.
Mettre 100uL de PNP dans chaque
puits
Active la phosphatase alcaline.
Incuber la plaque pendant 15 à 60
minutes.
Les bulles d’air présentes au
moment de la lecture peuvent
modifier les résultats. Les cassers
avec le bout de la pipette.
Mesurer sur un lecteur de plaque à
405 nm
Permet de visualiser nos
résultats
TEST DE MANCINI :
Points essentiels Precisions technique Pourquoi
Préparation du gel d’agar Réaliser par notre professeure
Ajouter dans le tube à hémolyse l’agar
100 μL d’anticorps antiHGC, et agiter
Attention à la solidification du gel Avoir un gel homogène
Verser le gel dans la boite de pétri
pour obtenir une couche homogène et
horizontale. Puis on laisse solidifier
l’agar
Poser la boite sur une surface
plane et ne plus la bouger
Avoir un gel pour faire les
puits
Quand l’agar est bien figé, réaliser 6
puits distancés d’un centimètre.
Avec un pipette et une poire.
(s’entrainer au préalable sur
d’autre gel simple)
Pouvoir observer un cercle
autour des puits
Déposer 9 μL de chaque échantillons
( M1/M2/M3/M4 et Mr X) dans
chaques puits.
Ne pas se tromper dans
l’identification des puits.
On rempliera deux puits de X
pour avoir un résultat plus
précis.
Après avoir laissé les échantillons
s’absorber dans l’agar on met les
boites a incuber
Placer les lames au frais Le gel va permettre à l’HCG
de se disperser autour des
puits.