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dans 21 familles, soit 25 personnes (+ 4 familles en cours) atteintes de
NPS. Le diagnostic de NPS était retenu chez 19 patients index, en raison
d'anomalies caractéristiques des membres. Chez un patient le NPS était
considéré comme atypique en raison de son association à un retard mental,
sans délétion chromosomique en 9q34.1. Chez un patient présentant une
néphropathie et une cataracte sans anomalie des membres le diagnostic
était écarté. Nous avons identifié une mutation délétère de LMX1B chez
13/19 (68 %) des patients index typiques. Chez 9 patients (69 %) il s'agis-
sait de mutations tronquantes (« stop » ou « frame shift »). Quatre muta-
tions « faux sens » pouvaient être considérées comme délétères car déjà
décrites ou ségrégant avec l'affection dans la famille. Nous avons identifié
une mutation faux-sens non encore décrite mais située dans l'homéodo-
maine et survenue de novo chez le garçon avec NPS et retard mental
(celui-ci pouvant donc avoir une autre origine). Enfin deux mutations faux
sens situées dans l'homéodomaine mais non encore décrites sont proba-
blement délétères sans que ceci puisse être affirmé. Au total donc une
mutation de LMX1B a été retrouvée chez 16/20 patients index (80 %). Les
anomalies des membres étaient isolées dans 14/16 familles mutées. Dans
un cas sporadique (mutation p.Gln37X) une néphropathie était associée à
des anomalies des membres typiques avec synostose radio-cubitale. Dans
un cas familial (mutation pGlnl39X) un glaucome était associé aux ano-
malies des membres chez plusieurs sujets de la famille dont 2/3 testés. Les
mutations identifiées étaient par ordre de fréquence situées dans les exons
4 (7 cas), 2 et 5 (4 cas chacun), et 3 (1 cas). Chez trois patients index
typiques (deux familiaux et un sporadique) aucune mutation de LMX1B
n'a été identifiée. Dans les trois cas était observée une atteinte rénale. La
recherche de délétion de LMXIB est en cours chez eux. Aucune mutation
de LMXIB n'a été retrouvée chez le patient chez lequel le diagnostic de
NPS n'avait pas été retenu. En conclusion, il n'y a pas de corrélation
génotype-phénotype claire dans cette petite série, on peut cependant
observer que nous n'avons pas identifié de mutation LMXIB dans 3/4 des
familles avec atteinte rénale. Ce point demande à être exploré par la
recherche de grandes délétions du gène.
Mots-clés : Nail Patella syndrome, LMXIB, génotype-phénotype.
Génétique des maladies complexes
•P280 / 38. HSPD1 IS NOT A MAJOR SUSCEPTIBILITY GENE
FOR RHEUMATOID ARTHRITIS IN THE FRENCH CAUCASIAN
POPULATION
L. Jacq (1, 2), V.H. Teixeira (1, 3), S. Gantier (1), L. Michou (1), P.
Dieudé (1,4), D. Rocha (1), C. Pierlot (1), H. Mbarek (1), E. Petit-Teixeira
(1) F. Cornélis (1, 2, 5)
(/) GenHotel-EA3886-Evry ; (2) Hôpital Sud Francilien-Corbeil-
Essonnes, France ; (3) Faculty of Medicine-University of Coimbra-Por-
tugal ; (4) Hôpital Bichat-Paris ; (5) Hôpital Lariboisière-Paris
Rheumatoid arthritis (RA) is a common human systemic autoimmune
disease, for which previous studies have suggested the importance of
genetic factors. Two susceptibility gènes have been established so far:
HLA-DRB1 and PTPN22. A génome scan suggested 19 non-HLA suscep-
tibility loci in a French Caucasian population. The HSPD1 gene is located
in one of thèse loci (2q33), and encodes for a member of the chaperonin
family (heat shock 60kDa protein 1, HSP60). Heat shock proteins consti-
tute a family of proteins involved in cell homeostasis, immune and inflam-
matory reactions. HSP60 is a mitochondrial chaperonin, highly preserved
during évolution, responsible for protein folding. Homozygous Drosophila
melanogaster hspdl homolog -/- mutants die early during embryogenesis.
In human cells, knock-down of the HSPD1 gene compromises folding of
the mitochondrial matrix enzymes indicating an essential rôle of HSP60.
Furthermore, HSP60 can downregulate adaptive immune responses and is
involved in apoptosis in patients with systemic autoimmune diseases. Inte-
restingly, DNA vaccination with the hspdl gene can inhibit adjuvant
arthritis of the Lewis rats. HSPD1 is thus a positional and functional RA
candidate gene. The aim of this study was to test HSPD1 in the hypothesis
of a major susceptibility gene, using a family-based analysis from the
French Caucasian population. Three single nucleotide polymorphisms
(SNP) tagging the 3 linkage disequilibrium blocks of HSPD1 were studied
in 100 RA Trio families and 100 other families were used for replication.
Genetic analyses were performed using the comparison of allelic frequen-
cies, the transmission disequilibrium test and the génotype relative risk.
We observed a significant RA association for the C/C génotype of
rs2340690 in the first sample. However, this association was not confirmed
in the second sample. The 2 other SNPs (rs788016, rs2605039) and the
haplotype analysis did not show any significant resuit. We conclude that
HSPD1 is not a major RA susceptibility gene in the French Caucasian
population.
Mots-clés : HSPDI, rheumatoid arthritis, candidate gene.
•P281 / 54. ÉTUDE GÉNÉTIQUE DE LA KÉRATODERMIE PAL-
MOPLANTAIRE DE BUSCHKE-FISCHER-BRAUER DANS UNE
FAMILLE TUNISIENNE
O. Mamay (1), M. Gribaa(l), I. Amri (2), S. Kacem (1), N. Ghariani (2),
A. Saad (1)
(/) Laboratoire de Cytogénétique, de Génétique Moléculaire et de Biologie
de la Reproduction Humaines, CHU Farhat HACHED, SOUSSE ; (2) Ser-
vice de Dermatologie, CHU Farhat HACHED, SOUSSE
Introduction : La kératodermie palmoplantaire (KPP) ponctuée ou KPP de
Buschke-Fischer-Brauer (KPP-BFB) est une maladie dermatologique rare
de la peau épaisse à transmission autosomique dominante, caractérisée par
des lésions hyperkératosiques d'aspect papuleux. Cette pathologie est
classée parmi les maladies orphelines et dont le gène responsable est encore
inconnu. Deux loci liés à cette maladie ont été décrits : le locus
8q24.13-8q24.21 qui fait 9.89 cm et le locus 15q22.2-15q22.31 qui fait
5.06 cm. Matériel et méthodes : Nous disposons d'une famille Tunisienne
atteinte de la KPP-BFB. Cette famille est formée de 29 individus s'éten-
dant sur cinq générations dont 19 sont atteints et 10 sont phénotypiquement
sains. Tous les atteints ont bénéficié : - d'un examen clinique détaillé, -
d'une biopsie de leur lésion pour une étude anatomopathologique, - des
prélèvements sanguins pour le dosage des marqueurs biologiques de rou-
tine et de certains marqueurs tumoraux ainsi que pour l'extraction d'ADN
génomique. L'étude de liaison génétique a été effectuée par l'amplification
des 6 marqueurs STRs sur le chromosome 8 et 10 autres marqueurs sur le
chromosome 15. Le calcul du LOD score pour évaluer la possibilité de la
liaison génétique a été réalisé par deux méthodes : deux-points par le logi-
ciel FastLink et multipoints par SimWalk. Résultats et discussion : Pour
le locus du chromosome 8, l'analyse des haplotypes a montré l'absence
de ségrégation des 6 marqueurs étudiés avec la maladie. Le calcul du LOD
score a confirmé ce résultat avec des valeurs autours de zéro. Ceci élimine,
dans notre famille, la liaison génétique de la KPP-BFB à ce locus. Pour
le locus du chromosome 15, nous avons obtenu un Zmax du LOD Score
de 3.018 en faveur de la liaison génétique. L'observation des recombinai-
sons au niveau des haplotypes construits avec le minimum de recombi-
naison a permis de réduire la taille de ce locus à 3.261 Mb. Conclusion :
L'étude de cette grande famille tunisienne nous a permis de lier leur
KPP-BFB à la région 15q22.2-15q22.31 tout en réduisant sa taille à
3.261 Mb. L'étude des gènes candidats de ce locus nous permettra d'iden-
tifier l'anomalie responsable et par conséquent les bases moléculaires régis-
sant cette pathologie.
Mots-clés : lod score, str,haplotypes, keratodermies palmoplantaires,
réduction, locus.
•P282 / 100. IMPORTANCE DU CHOIX DE LA MÉTHODE DANS
L'ESTIMATION DES RISQUES ASSOCIÉS À DES MUTATIONS
GÉNÉTIQUES
F. Alarcon (1), C. Bourgain (1), V. Planté-Bordeneuve (2), D. Stoppa-
Lyonnet (3), C. Bonaïti-Pellié (1)
(1) INSERM, U535, Villejuif; (2) Dépt Neurologie, CHU Bicêtre, Le Kre-
mlin Bicêtre ; (3) Unité de génétique oncologique, Institut Curie, Paris,
France
Certaines maladies à âge de début variable sont dues à la présence d'une
mutation prédisposante dans un gène. Pour ces maladies, l'estimation pré-
cise du risque cumulé d'être atteint selon l'âge chez les porteurs de la
mutation (appelée fonction de pénétrance) permet une meilleure compré-
hension des mécanismes sous-jacents de la maladie et permet également
d'améliorer et de développer des stratégies de prévention. L'estimation de
la pénétrance ne peut se faire qu'à partir de familles sélectionnées sur
l'existence d'un ou de plusieurs atteints. Cependant, la plupart des études
utilisent des méthodes d'estimation qui ne tiennent pas compte du biais
introduit par cette sélection. Or, dans ce cas, les risques sont fortement
surestimés. Il est donc indispensable de développer des méthodes adaptées,
qui prennent en compte ce biais et corrigent pour la sélection. Dans cette
étude, nous avons étudié le cas où les familles sont sélectionnées sur l'exis-
tence d'au moins un atteint. Nous avons comparé deux méthodes corrigeant
pour ce type de sélection : 1) La Vraisemblance Prospective qui tient
compte de la sélection en modélisant explicitement les critères de sélection
(Planté-Bordeneuve et ai, 2003) ; 2) La Proband's phénotype Exclusion
Likelihood (ou PEL), une méthode que nous avons récemment développée.
Cette méthode intuitive est inspirée de la méthode de Weinberg (1912)
utilisée en analyse de ségrégation ; elle permet de corriger pour la sélection
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M/S hors série n" 1, vol. 24, janvier 2008
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Article disponible sur le site http://www.medecinesciences.org ou http://dx.doi.org/10.1051/medsci/2008241s123

en « retirant » l'information phénotypique apportée par l'index. Nous
avons comparé la fiabilité de ces deux méthodes à partir de familles simu-
lées sous différents modèles de maladie et sous différents schémas de
sélection. Nous avons montré que la méthode optimale dépend à la fois
du modèle génétique et des critères de sélection. Ainsi, nous avons montré
qu'il était préférable d'utiliser la Vraisemblance Prospective dans le cas
de maladies purement génétiques (i.e. sans cas sporadiques) et lorsque la
probabilité de sélection est grande. Par contre, la PEL est mieux adaptée
dans le cas de maladies partiellement génétiques (i.e. sous-entités mendé-
liennes) pour lesquelles les critères de sélection sont nécessairement plus
restrictifs pour avoir un taux de détection de mutations suffisant. Enfin,
nous avons appliqué ces méthodes sur des maladies correspondant aux
deux modèles génétiques considérés : 1) un échantillon de familles sélec-
tionnées sur l'existence d'au moins une femme atteinte de cancer du sein
avant 35 ans et porteuse d'une mutation BRCAI ou BRCA2 ; 2) un échan-
tillon de familles de neuropathie amyloïde liée à la transthyrétine d'origine
française ou portugaise, ces deux populations ayant des courbes de péné-
trance sensiblement différentes. Nous montrons que les résultats sont fran-
chement dépendants de la méthode utilisée. Cette étude et ses applications
montrent l'erreur que peut provoquer le choix d'une mauvaise méthode et
donc l'importance de ce choix pour l'estimation de la fonction de péné-
trance à partie de données familiales. Plante-Bordeneuve V, Carayol J,
Ferreira A, Adams D, Clerget-Darpoux F, Misrahi M, Said G, Bonaiti-
Pellie C : Genetic study of transthyretin amyloid neuropathies : Carrier
risks among French and Portuguese families. J Med Genêt 2003 ;40 :el20.
Weinberg W : Méthode und Fehlerquellen der Untersuchung auf mendles-
chen Zahlen beim Menschen. Arch Rass u Ges Biol 1912 ;9 :165-174.
Mots-clés : pénétrance, estimation, biais.
•P283 /115. L'ÉTUDE DES HOLOPROSENCÉPHALIES ISOLÉES
PAR CGH-ARRAY IDENTIFIÉ DES GAINS OU PERTES CHEZ
24 % DES PATIENTS ET REFLÈTE LA PART MAINTENANT
MAJORITAIRE DE CES ALTÉRATIONS GÉNOMIQUES DANS
LA PATHOLOGIE
C. Bendavid (1, 2), C. Dubourg (1, 2), J. Seguin (1), I. Gicquel (1), L.
Pasquier (1,4), V. Dupé (1), M.R. Durou (2), S. Jaillard (1,3), C. Henry
(3), J. Mosser (1), S. Odent (1, 4), V. David (1, 2)
(7) UMR 6061 CNRS-Université de Rennes 1-Rennes ; (2) Laboratoire de
Génétique Moléculaire-CHU Pontchaillou-Rennes ; (3) Laboratoire de
Cytogénétique-CHU Pontchaillou-Rennes ; (4) Service de Génétique Médi-
cale-Hôpital Sud-Rennes
L'holoprosencéphalie (HPE) est la plus fréquente des anomalies du déve-
loppement cérébral chez l'homme (1/16 000 naissances vivantes et 1/250
produits d'avortement) ; elle est généralement associée à des anomalies
faciales. Notre groupe s'intéresse aux patients atteints d'HPE avec un
caryotype normal. La génétique de l'holoprosencéphalie est complexe :
dans notre expérience, les mutations (18 %) et les délétions (8 %) dans les
quatre gènes principaux {SHH, ZIC2, SIX3 et TGIF) peuvent expliquer
environ 26 % des cas. L'étude systématique des régions subtélomériques
par MLPA a révélé 4 % de réarrangements complexes supplémentaires.
Afin d'identifier de nouveaux loci candidats et donc de nouveaux gènes
candidats, nous avons décidé d'étudier nos patients HPE par hybridation
sur puces pangénomiques CGH-Array Agilent 44K puis 244K qui sont
composées d'oligonucléotides indexant l'ensemble des gènes humains
connus et procurant une résolution moyenne de 75 Kb et 15 Kb respecti-
vement. 74 échantillons (47 fœtus et 27 enfants vivants), sans anomalies
caryotypiques, ont été testés en utilisant comme contrôle deux ADN mâle
ou femelle issus de donneurs uniques (non poolés). Sur ces 74 échantillons,
18 présentaient des réarrangements (24 %) concernant des loci candidats
HPE connus ou de nouveaux loci potentiels situés sur différents chromo-
somes mais avec une faible récurrence. Nous avons observé 11 délétions
isolées, 5 gains isolés et 2 gains et pertes associés, ces derniers suggérant
une translocation non équilibrée d'origine parentale. Certains patients pré-
sentaient déjà une mutation ponctuelle dans un des quatre gènes princi-
paux, parfois héritée d'un parent qui par contre n'avait pas d'altération
microdélétionnelle. Les anomalies détectées ont une taille très variable
allant de 100 kb à 16 Mb ; toutefois, les altérations génomiques n'ont pas
été retenues quand elles touchaient moins de trois sondes consécutives sur
la puce ce qui sous-évalue peut-être dans nos résultats les fréquences de
microréarrangements.Aucun des nouveaux loci candidats ne correspondait
à des régions concernées par des CNVs (variations du nombre de copies)
répertoriées à ce jour dans les bases de données des variations du génome
humain normal (TCAG database). Les rares régions redondantes étaient
situées sur les chromosomes 21q et 20p. La fréquence des microremanie-
ments génomiques est plus élevée chez les foetus (32 %) que chez les
nouveaux-nés (11 %), mais aucune corrélation n'a pu être établie entre la
taille des délétions et la sévérité des phénotypes HPE. Si on tient compte
des microdélétions précédemment identifiées dans les gènes HPE connus
(8 %) et dans les subtélomères (4 %), nos résultats montrent que les micro-
réarrangements pourraient être le mécanisme moléculaire majeur dans
l'holoprosencéphalie puisqu'ils représentent 36 % des cas au total. L'exis-
tence potentielle de nombreux nouveaux gènes candidats dans les vastes
régions couvertes par les anomalies identifiées renforce l'hypothèse de
l'origine multigénique de cette anomalie du développement cérébral.
Mots-clés : holoprosencéphalie CGH array remaniements génomiques.
•P284 / 129. RECHERCHE D'UNE ASSOCIATION GÉNÉTIQUE
ENTRE LE GÈNE 1RF5 ET LA SUSCEPTIBILITÉ À LA POLYAR-
THRITE RHUMATOÏDE DANS LA POPULATION TUNISIENNE
A. Maalej (1), M. Ben Hamad (1), S. Marzouk (2), V. Hugo-Teixeira (3),
Z. Bahloul (2), H. Ayadi (1), E. Petit-Teixeira (3), F. Cornelis (3)
(1) Laboratoire de Génétique Moléculaire Humaine, Faculté de Médecine,
Avenue Majida Boulila 3029 Sfax, Tunisie ; (2) Service de Médecine
Interne CHU Hédi Chaker Sfax, Tunisie ; (3) Genhotel Laboratoire de
Recherche Européen pour la Polyarthrite Rhumatoïde, Université
d'Evry-val d'Essonne, ECRAF-Université Paris 7, 2 rue Gaston Crémieux,
CP 5727 91057, Evry, France
La polyarthrite rhumatoïde (PR) est une maladie inflammatoire chronique.
La susceptibilité à cette maladie auto-immune la plus fréquente est sous
le contrôle de facteurs génétiques et environnementaux. Dans cette étude
cas/contrôle, nous avons recherché une éventuelle association entre le gène
IRF5 et la susceptibilité à la PR dans la population tunisienne. Le poly-
morphisme rs2004640 a été analysé dans une série de 140 malades et
185 témoins d'origine tunisienne. Le génotypage a été effectué par la tech-
nique de PCR en temps réel avec sondes fluorescentes (TaqMan Applied
Biosystem). La comparaison entre cas et contrôles des fréquences alléli-
ques et génotypiques a été effectuée par le test chi2 et le test du risque
relatif du génotype. L'analyse statistique a montré une fréquence plus
élevée du génotype TT chez les malades (42,14 %) par rapport aux témoins
(31,35%) (chi2 = 5,91 ; p = 0,014; OR = 1,59; IC [1,01-2,51]). Par ail-
leurs, la même analyse réalisée dans le sous groupe de malades avec anti-
corps anti peptides citrullinés n'a pas montré une association plus signifi-
cative (chi2 = 3,94, p = 0,046; OR =1,54; IC [0,92 - 2,59]). En
conclusion, nos résultats suggèrent que le génotype TT est un marqueur
de prédisposition à la PR dans notre échantillon d'étude.
Mots-clés : polyarthrite rhumatoïde, gène de susceptibilité, association.
•P285 / 138. RÔLE DES INTERLEUKINES IL4 ET IL13 ET DE
LEUR RÉCEPTEUR DANS LA SUSCEPTIBILITÉ À LA SCLÉ-
ROSE EN PLAQUES
M.C. Babron (1), E. Genin (1), I. Cournu-Rebeix (2), H. Perdry (1), F.
Clerget-Darpoux (1), B. Fontaine (2)
(/) INSERM U535 and Univ. Paris-Sud, Villejuif, France ; (2) INSERM
U546 and Univ Paris Pierre et Marie Curie, Paris, France
La sclérose en plaques (SEP) est une maladie multifactorielle, dans laquelle
des facteurs tant génétiques qu'environnementaux interviennent. On
connaît peu les facteurs génétiques impliqués, à l'exception d'un facteur
du complexe HLA. Deux criblages du génome [Broadley et al, 2001 ;
Babron et al, 2004] ont suggéré la présence d'un facteur de risque dans
la région chromosomique 5q31. La localisation dans cette région des gènes
IL4 et IL13, codant pour des cytokines impliquées dans la réaction immu-
nitaire, en fait de bons candidats à la susceptibilité à la SEP. D'autre part,
dans des maladies multifactorielles comme la SEP, on soupçonne de plus
en plus l'implication de deux ou plusieurs variants appartenant à la même
voie métabolique. L'implication de la voie métabolique IL13-IL4 et leur
récepteur IL4R a ainsi été suggérée dans une autre maladie auto-immune,
le diabète insulino-dépendant [Bugawan et al, 2003]. Nous avons examiné
le rôle de cette voie métabolique dans un échantillon de 124 trios français
avec une nouvelle stratégie. Tous les polymorphismes génétiques de ces
trois gènes, IL4, IL13 et IL4R, ont été identifiées par séquençage [cf résumé
de Cournu-Rebeix et al.]. Nous nous sommes concentrés sur les 73 variants
les plus communs (fréquence allélique >10 %). Aucun d'eux, pris indivi-
duellement, ne montre d'association significative avec la SEP. Nous avons
ensuite examiné toutes les combinaisons de deux variants, l'un dans
1L4/IL13, l'autre dans IL4R. Parmi les 1 170 combinaisons évaluées,
6 combinaisons étaient significatives (p-value corrigée < 1 %). Ces combi-
naisons sont en cours de réplication dans un nouvel échantillon de malades.
Cette étude a été financée par l'ARSEP.
Mots-clés : sclérose en plaques, interleukine, association.
M/S hors série n" 1, vol 24, janvier 2008

•P286 / 141. LE SEQUENÇAGE: UN OUTIL LOURD MAIS
ROBUSTE POUR L'IDENTIFICATION DES POLYMORPHISMES
ASSOCIÉS AUX MALADIES COMPLEXES
I. Cournu-Rebeix (1), M.C. Babron (2), E. Genin (2), L. Guillot-Noel (1),
F. Clerget-Darpoux (2), B. Fontaine (1, 3) et le « Réseau Français d'Étude
Génétique de la Sclérose en Plaques (REFGENSEP) »
(1) INSERM UMR S 546, Paris, France ; (2) INSERM UMR 535 ; Univ
Paris Sud, Villejuif-France ; (3) Fédération des maladies du système ner-
veux, Hôpital de la Pitié-Salpêtrière, Paris, France
Introduction : Le projet HapMap avait pour but de définir des sets de poly-
morphismes, répartis sur différents blocs haplotypiques au sein du génome
humain, pour les études d'association génétique. Cependant le débat sur
le choix des polymorphismes permettant l'identification de facteurs de
prédisposition existe toujours. De plus, à l'heure actuelle pour un gène
candidat donné, l'information concernant les variants génétique accessible
dans les bases de données est la plus part du temps incomplète. Il a été
montré que les gènes codant pour les cytokines étaient impliqués dans la
prédisposition à plusieurs maladies autoimmunes. Les interleukines 4 et
13 et leur récepteur IL4R ont en particulier été associées au diabète de
type I, à la polyarthrite rhumatoïde ou encore à la maladie cceliaque. Ces
gènes ont été partiellement étudiés dans la prédisposition génétique à la
sclérose en plaques avec des résultats contradictoires. Dans le but de réa-
liser une étude complète des polymorphismes bi-alléliques (SNP) des gènes
IL4, ILI3 et IL4R dans la prédisposition à la SEP, nous avons entièrement
séquence ces gènes (introns et exons) en collaboration avec le centre
national de séquençage (Pr Weissenbach, EVRY). Nous présentons ici les
résultats concernant les gènes IL4 et ILI3. Matériel et méthodes :
124 familles simplex (1 atteint de SEP et ses 2 parents) issus de la cohorte
REFGENSEP. Séquençage en forward et reverse de 42 couples d'amorces
répartis sur les gènes soit 31 248 séquences. Analyse de séquence : logiciel
ABI Prism®SeqScape v2.5. La lecture manuelle de 3 fragments pour
372 individus a permis de définir les critères de lecture automatique per-
mettant de détecter l'ensemble des polymorphismes et d'éliminer les
fausses variations. Paramètres de lecture définis : - seuil de détection 50 %
- analyse automatique de toutes les séquences pour le génotypage des SNP
connus - analyse automatique de toutes les séquences « propres » pour
l'identification de nouveaux SNP - lecture manuelle des séquences « non
propres » pour le génotypage des nouveaux SNP - vérification manuelle
pour tous les nouveaux SNP avec une fréquence inférieure à 1 %. Le logi-
ciel Haploview v3.2 a été utilisé pour le calcul du déséquilibre de liaison
entre SNP, le calcul des fréquences et l'identification des Tag SNP. Résul-
tats : parmi les 199 SNPs étudiés, 145 étaient informatifs. 82 étaient iden-
tifiés dans les bases de données, 63 ont été mis en évidence par notre étude.
54 SNPs présentaient une fréquence (MAF) supérieure à 5 %. Afin de
limiter le nombre de SNP à génotyper pour une étude d'association nous
avons identifié les SNPs permettant de capturer l'ensemble de l'informa-
tion sur le locus (TagSNPs). Nous avons identifié 16 TagSNPs représentant
les 54 SNP (MAF> 5 %). Au sein du cluster IL13-IL4, 30 SNP avaient été
génotypes dans le projet HapMap et étaient représentés par 9 TagSNPs.
Ces 9 TagSNPs ne capturaient l'information que de 36 des SNP de notre
étude. Conclusion : le séquençage systématique du locus IL13-IL4 nous a
permis de mettre en évidence 63 nouveaux polymorphismes non décrits
dans les bases de données. L'identification de TaqSNPs à partir de nos
résultats a montré qu'à partir des données HapMap, 17 % des SNPs infor-
matifs du locus n'auraient pas été pris en compte dans les analyses d'asso-
ciation. Une étude d'association (TDT individuel et de combinaison) entre
les gènes ILI3 et IL4 et la sclérose en plaques a été réalisée pour l'ensemble
des polymorphismes identifiés (Voir résumé, M.C. Babron et al).
Mots-clés : sclérose en plaques, interleukines, séquençage.
•P287 /163. PADI_4 UN HAPLOTYPE FONCTIONNEL ASSOCIÉ
À LA POLYARTRITIE RHUMATOÏDE DANS UNE POPULATION
FRANÇAISE
F. Gandjbakhch (1), I. Fajardy (2), S. Dubucquoi (3), B. Ferré (2) L. Cas-
tera (2), A. Lieven (2) B. Duquesnoy (1), E. Solau-Gervais (1)
( 1 ) Service de Rhumatologie, CHRU Lille ; (2) Centre de biologie et patho-
logie, pôle de biochimie, CHRU Lille ; (3) Centre de Biologie et Patho-
logie, service d'immunologie, CHRU Lille
Les gènes peptidyl arginine déiminase (PADIs) codent pour des enzymes
responsables de la déimination des résidus arginine. Des épitopes citrul-
linés sont à l'origine de l'apparition d'auto-anticorps spécifique de la
polyarthrite rhumatoïde (PR) : anti-Sa (vimentine), antifillagrine, anti-
fibrine anti-CCP (anticyclic citrullinated peptide). La spécificité de tels
anticorps pour la PR suggère un rôle important de la citrullination et font
des gènes PADI des candidats majeurs dans la susceptibilité et l'évolutivité
de la PR. Des SNP localisés dans l'intron 3 du gène : PADI 4 89 A/G et
PADI_4 90 C/T définissent un haplotype 89-90 GT décrit comme suscep-
tible dans des populations asiatiques atteintes de PR. Cette association n'a
pas été confirmée dans de récentes études européennes. Objectifs : Géno-
typer ces SNP dans une population française atteinte de PR et rechercher
l'existence (1) d'une association avec HLA-DR (2) une corrélation avec
la présence d'anticorps anti CCP2. Patients et méthodes 405 patients
atteints de PR et 179 témoins originaires de la région Nord Pas de Calais.
Tous les patients répondent aux critères définis par le collège américain
de Rhumatologie. Après vérification des haplotypes par séquençage, les
SNP PADI_4 ainsi que le locus HLA-DRB1 sont génotypes par PCR-
RFLP. Les anticorps CCP2 sont dosés par une technique ELISA commer-
ciale. Résultats : Nous retrouvons une association positive de l'haplotype
susceptible PADI_4 89-90 GT (p = 0,02) et du génotype GT/GT (p = 0,05)
avec le trait phénotypique. Ainsi 22 % des patients PR sont homozygotes
GT contre 10 % des témoins. De plus L'haplotype GT et le génotype
GT/GT sont corrélés à la présence d'anticorps anti CCP2 (p = 0,03 et
p = 0,05 respectivement). Nous ne retrouvons pas d'association entre PADI
et les allèles susceptibles HLA DRB1 *0401-*0402 *0405 et DR10).
Conclusion : nos résultats confirment les données japonaises et coréennes
et suggèrent donc une implication du gène PADI_4 comme nouveau mar-
queur de susceptibilité et peut être d'évolution de la PR. Cette association
apparaît comme indépendante du système HLA.
Mots-clés : PADI_4, polyarthrite rhumatoïde, anti CCP.
•P288 / 164. INFLUENCE DES GÉNOTYPES DE FCGR3A-V212F
ET TNFRSF1B-M196R DANS UNE POPULATION DE PATIENTS
ATTEINTS DE POLYARTHRITE RHUMATOÏDE TRAITÉS PAR
INFLIXIMAB
C. Rooryck-Thambo (1), T. Barnetche (1, 2), C. Richez (2), A. Laleye (1),
T. Schaeverbeke (2), B. Arveiler (1)
(/) Laboratoire de Génétique Humaine, Université Victor Segalen Bor-
deaux 2, 33076 Bordeaux Cedex, France ; (2) Service de Rhumatologie,
CHU Bordeaux-Petlegrin, Place Amélie Raba Léon, 33075 Bordeaux
cedex, France
Introduction : Les anti-TNF alpha ont beaucoup modifié la prise en charge
de la Polyarthrite Rhumatoïde (PR). Malgré la démonstration claire de leur
efficacité, plusieurs études présentent des résultats discordants en terme de
réponse au traitement, avec la présence d'environ 40 % de patients non-
répondeurs. L'objectif de cette étude est de rechercher l'association de
deux SNPs, FCGR3A-V212F et TNFRSF1B-M196R, d'une part avec la
prédisposition à la PR et d'autre part avec la réponse à l'Infliximab. Patients
et Méthodes. La population d'étude est composée de 78 patients atteints
de PR, et 70 témoins sains. Les analyses d'association ont été réalisées en
comparant les fréquences alléliques et génotypiques entre les cas et les
témoins. Résultats. Aucune association n'a été mise en évidence entre la
prédisposition à la PR et les génotypes des deux SNPs étudiés. Une asso-
ciation significative a été retrouvée entre les porteurs de l'allèle
TNFRSF 1B-196R et une mauvaise réponse au traitement (OR = 3.825,
IC95 %= [1.30-11.44], p = 0.006). Conclusion. Ce travail constitue la pre-
mière étude retrouvant une association significative entre la réponse à
l'Infliximab et le SNP TNFRSF1B-M196R dans une population française
de patients atteints de PR. Des études de plus grande envergure doivent
être envisagées pour préciser le rôle exact joué par ce variant dans la
réponse au traitement.
Mots-clés : polyarthrite rhumatoïde, pharmacogénétique, anti-TNF.
•P289 / 174. L'ALLÈLE LONG DU MICROSATELLITE DU PRO-
MOTEUR DU GÈNE CD2BP1 EST ASSOCIÉ À LA MALADIE DE
CROHN ET AUX ABCÈS ASEPTIQUES DANS LA POPULATION
FRANÇAISE
M.F.J. André (1, 2), M.C. Cardoso (3), G. Grateau (4, 5), M. Chamaillard
(6, 7, 8), P. Blanc (3), N. Costedoat-Chalumeau (9), J. Henry-Berger (10),
B.S. Ramakrishna (11), M. Delpech (12, 13, 14), O. Aumaître (2, 15), I.
Creveaux (1,3, 15)
(/) Inserm, U384, Clermont-Ferrand; (2) CHU Clermont-Ferrand,
Hôpital Gabriel Montpied, Service de Médecine Interne ; (3) CHU Cler-
mont-Ferrand, Faculté de Médecine, Service de Biochimie Médicale et
Biologie Moléculaire ; (4) Assistance Publique, Hôpitaux de Paris, Hôpital
Tenon, Service de Médecine Interne ; (5) Université Paris 6 ; (6) Inserm,
U795, Lille ; (7) Université Lille 2 ; (8) CHRU Lille, Hôpital Huriez, Ser-
vice des Maladies de l'Appareil Digestif et de la Nutrition ; (9) Assistance
Publique, Hôpitaux de Paris, Hôpital Pitié-Salpêtrière, Service de Méde-
cine Interne ; (10) CNRS, UMR6547, Complexe Universitaire des Cézeaux,
Aubière ; (II) Department of Gastrointestinal Sciences, Christian Médical
Collège and Hospital, Vellore, India ; (12) Institut Cochin de Génétique
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M/S hors série n° 1, vol. 24, janvier 2008

Moléculaire, Hôpital Cochin, Paris ; (13) Assistance Publique - Hôpitaux
de Paris, Hôpital Cochin, Laboratoire de Biochimie et Génétique Molé-
culaires ; (14) Université Paris Descartes ; (15) Université Clermont 1,
UFR Médecine
Introduction : Le syndrome des abcès aseptiques (AA) est une maladie
rare, caractérisée par la survenue d'abcès purement stériles dans des
organes profonds. Les antibiotiques sont sans effet alors que la corticothé-
rapie améliore rapidement les symptômes et fait disparaître les abcès. Dans
57 % des cas, les AA sont associés à une maladie de Crohn (MC) qu'ils
peuvent précéder, et dans 20 % des cas à une dermatose neutrophilique
(DN). Le Pyoderma gangrenosum qui est une forme de DN sporadique est
une des composantes d'un syndrome de transmission autosomique domi-
nante qui associe une Arthrite Purulente aseptique et une Acné sévère
(PAPA syndrome ; OMIM 604416). Le PAPA syndrome est associé à des
mutations sur le gène CD2BP1 (chromosome 15). Objectifs : Les simili-
tudes cliniques entre les AA et le PAPA syndrome soulèvent l'hypothèse
d'une implication de la CD2BP1 dans la physiopathologie des premiers.
Nous avons donc voulu chercher si des variations de séquences sur ce gène
pouvaient être associées aux AA. Patients et méthodes : Dix neuf patients
Français avec AA dont 9 ayant une MC ont été étudiés. Les 15 exons du
gène ont été amplifiés par PCR puis testés par dHPLC seuls ou mélangés
avec un témoin afin de détecter des hétéroduplexes. Ces derniers ont été
ensuite séquences. L'analyse des polymorphismes du microsatellite a été
effectuée par PCR et électrophorèse sur séquenceur automatique. Les fré-
quences des différents allèles du microsatellite ont été comparées à celles
de 118 contrôles Français, 86 patients Français et 40 patients Indiens ayant
une MC. L'analyse du promoteur du gène a été effectuée avec Genomatix
suite. Résultats : Un microsatellite (CCTG)n a été mis en évidence dans
la région promotrice du gène et une nouvelle délétion de 3 pb au début de
la région 3' non transcrite. Aucune mutation n'a été retrouvée dans la
séquence codante mais des SNP connus ont été retrouvés dans les parties
introniques. Concernant le microsatellite, trois allèles ont été mis en évi-
dence quelle que soit la population. L'allèle le plus long, (CCTG)7, était
significativement associé aux AA en comparaison à des contrôles Français
(p = 0,0154). Cette association était aussi retrouvée avec la MC seule
(p = 0,0351 ) chez les Français mais pas chez les Indiens. Conclusion : Le
microsatellite du promoteur de CD2BP1 est possiblement impliqué dans
la pathogénie des AA et de la MC. Il pourrait être un gène modificateur
de la MC. Des études fonctionnelles complémentaires sont nécessaires
pour apprécier si les différents allèles modifient l'expression du gène.
Mots-clés: CD2BP1 /PSTPIP1, microsatellite polymorphism, Crohn
disease.
•P290 / 179. XERODERMA PIGMENTOSUM : ANALYSE CLI-
NIQUE ET MOLÉCULAIRE SUR PEAU NOIRE À MAYOTTE
C. Nava (1), A.C. Malbrunot (1), P. Munier (1), J.C. Hébert (2), A. Mun-
nich (3), F. Cartault (1)
(/) Laboratoire de Génétique, Unité INSERM U781, CHD Félix Guyon,
La Réunion ; (2) Service de Pédiatrie, Centre Hospitalier de Mamoudzou,
Mayotte ; (3) Unité INSERM U78I, Hôpital Necker, Paris
Le Xeroderma Pigmentosum (XP) est une génodermatose autosomique
récessive rare, caractérisée par une hypersensibilité aux UV et une prédis-
position aux cancers cutanés. Ce phénotype est dû à une mutation dans
l'un des 7 gènes impliqués dans la forme classique du XP (XPA à G),
conduisant à l'altération d'une voie de réparation de l'ADN lésé après
exposition aux UV : la voie NER (Nucleotide Excision Repair) ou à une
mutation du gène XPV (XP Variant) induisant un défaut de la polymérase
éta et conduisant à un phénotype moins sévère. Cette maladie a été iden-
tifiée dans toutes les populations. Elle est plus fréquente au Moyen-Orient,
en Afrique du Nord et au Japon (1/100 000) qu'en Europe ou aux Etats-
Unis (1/1 000 000). Alors que le XP est rare et particulièrement mal connu
chez les patients à peau noire, Mayotte, collectivité départementale fran-
çaise appartenant géographiquement à l'archipel des Comores dans l'Océan
Indien, comprend la plus grande cohorte de patients mélanodermes atteints
de XP (21 cas recensés : 1/10 000). Objectif : Le but de notre étude était
de caractériser les spécificités cliniques et génétiques du XP chez les
patients Mahorais. Patients et Méthodes : Parmi les 21 patients, 10 étaient
décédés au début de l'étude. Pour les 11 autres, un suivi prospectif en
consultation multidisciplinaire (généticien, ophtalmologue, neuro-pédiatre,
ORL, dermatologue) a débuté en avril 2007 et sera poursuivit jusqu'en
2009. L'analyse en biologie moléculaire a pu être réalisée chez 15 patients
(les 11 vivants + 4 décédés pour lesquels de l'ADN avait été conservé).
Compte tenu de la forme clinique de XP chez ces patients, nous avons
débuté la recherche de mutation par l'étude du gène XPC, par séquençage
bi-directionnel. Nous avons étudié le transcrit par RT-PCR. Résultats :
Tous nos patients présentaient une atteinte cutanée et ophtalmologique
précoce et sévère. L'âge médian aux premiers symptômes était de 6 mois.
6/11 avaient présenté au moins un cancer cutané avec un âge médian au
premier cancer de 4,2 ans, soit 3,8 ans avant l'âge médian rapporté dans
la littérature. Aucun patient ne présentait de signes neurologiques. Nous
avons identifié chez tous nos patients la mutation G>C à -lpb dans
l'intron 11 du gène XPC à l'état homozygote, aboutissant à l'abolition d'un
site accepteur d'épissage. L'étude de l'ARNm a permis d'identifier au
moins 3 isoformes : conservation de l'intron 11, délétion des 44 premières
paires de bases de l'exon 12 et délétion de la totalité de l'exon 12. Dis-
cussion : Alors que les mutations de XPC ne sont habituellement pas récur-
rentes, tous nos patients présentent la même mutation traduisant l'effet
fondateur et la consanguinité liés à l'insularité. Cette homogénéité géné-
tique est corrélée à une homogénéité clinique : tous les patients présentent
une atteinte cutanée et ophtalmologique sévère et précoce, liée aux facteurs
environnementaux, aux difficultés de prise en charge et peut-être à l'alté-
ration de la protéine elle-même causée par une mutation au niveau d'un
site d'épissage. La forme clinique du XP chez nos patients étant similaire
à celles des autres patients africains rapportés (Sénégal, Afrique du Sud,
Nigeria, Cameroun), cette mutation serait à rechercher en priorité chez
eux.
Mots-clés : Xeroderma pigmentosum à Mayotte, gène XPC, anomalie
d'épissage.
•P291 / 181. IMPLICATION DU BIAIS DE LTNACTIVATION DU
CHROMOSOME X (XCI) DANS LA PRÉDISPOSITION FÉMININE
À LA POLYARTHRITE RHUMATOÏDE
G. Chabchoub (1), E. Uz (2), A. Maalej (1), C.A. Mustapha (2), M. Ben
Hamad (1), S. Marzouk (3), Z. Bahloul (3), T. Ozcelik (2) et H. Ayadi (1)
( 1 ) Laboratoire de Génétique Moléculaire Humaine, Faculté de Médecine
de Sfax, Tunisie ; (2) Department of Molecular Biology and Genetics, Bil-
kent University, Faculty of Science, Ankara, Turkey ; (3) Service de méde-
cine interne, CHU Hédi Chaker de Sfax. Tunisie
La polyarthrite rhumatoïde (PR) est une affection auto-immune fréquente,
elle affecte 0,5-1 % de la population générale avec une nette prédominance
féminine (le rapport femme/homme est de 3/1). Le biais de l'inactivation
du chromosome X est l'une des hypothèses pour expliquer cette prédomi-
nance féminine. Ce biais a été recherché chez 106 femmes atteintes de PR
ainsi que 97 femmes contrôles d'origine Tunisienne. L'analyse moléculaire
a été réalisée par digestion de l'ADN par deux enzymes de restriction Rsal
et Hpall suivie d'une amplification par PCR et migration sur gel de polya-
crylamide 8 %. L'analyse densitométrique a été effectuée par le programme
MultiAnalyst version 1.1 (Bio-Rad, Hercules, California). L'étude statis-
tique a été effectuée avec le Test Chi2 et le test exact de Fisher. L'analyse
de ces données a montré un biais d'inactivation (supérieur à 90 %) chez
les femmes atteintes de PR comparés aux femmes contrôles (22,4 % vs
8,7 % ; p = 0,03). L'analyse de sous groupes de malades présentant une
érosion, nodules et autres maladies auto-immunes n'a pas montré une dif-
férence significative (p > 0.05). De même l'analyse de sous groupes de
patients avec anticorps anti immunoglobuline (RF) et anticorps anti pep-
tides citrullinés (CCP) n'a pas montrée une association significative. En
conclusion, nos résultats suggèrent que le biais de l'inactivation du chro-
mosome X pourrait expliquer la prédominance féminine chez les femmes
atteintes de PR.
Mots-clés : inactivation du chromosome X, récepteur des androgenes,
polyarthrite rhumatoïde.
•P292 /187. EFFET PARENTAL DES VNTR DU GÈNE DE L'INSU-
LINE SUR LE POIDS DE NAISSANCE DANS UN CONTEXTE
FAMILIAL DE DIABÈTE DE TYPE 1
I. Fajardy (1), F. Vasseur (3), A. Vambergue (2), M. Vandersippe (1), C.
Stuckens (2), J. Weill (2), J. Rousseaux (1), P. Fontaine (2)
(/) Centre de Biologie et de Pathologie, CHRU Lille ; (2) Centre de dépis-
tage du prédiabète de type 1, Clinique Marc Linquette, CHRU Lille ; (3)
EA2694 et Pôle de Santé Publique CHRU Lille
Le gène de l'insuline situé au locus IDDM2, comprend notamment (1) des
VNTR (motifs répétés de 14 à 15 bases) en amont du site de transcription,
(2) des SNPs identifiés par RFLP tels que -23 HphI et + 1127 Pstl. Le
nombre de répétitions des VNTR définit 3 sous classes : IS (23-45)
IL(45-63) et III (> 140) identifiant des haplotypes de susceptibilité au
diabète : VNTR IS-HphI (+) -Pstl (+) et des haplotypes protecteurs :
VNTRIII - Hphl(-) Pstl (-). Par ailleurs il existe des résultats discordants
dans la littérature concernant l'association entre INS VNTR et le poids de
naissance. Objectif : Analyser la transmission des allèles INS VNTR dans
des familles avec sujet diabétique de type I, et rechercher une association
avec le poids de naissance. Matériel et méthodes 240 familles, dont 66
M/5 hors série n" 1, vol. 24, janvier 2008

avec père atteint, 70 avec mère atteinte et 104 avec 1 enfant atteint. Les
poids de naissance sont ajustés selon le terme, le sexe et le rang de nais-
sance. L'association entre facteur génétique et phénotype a été analysée
par la méthode TDT (Abecassis et al, 2000). L'analyse haplotypique a été
réalisée au moyen du logiciel Xbat. Résultats (1) Nous ne retrouvons pas
de prédominance des sous classes IS dans notre groupe de sujets diabéti-
ques. (2) La transmission des VNTR par les parents diabétiques ne montre
pas de distorsion particulière. (3) L'analyse de la provenance des VNTR
révèle une moindre transmission essentiellement maternelle des VNTR de
classe III chez les enfants diabétiques (transmis 5 % non transmis 30 %
p < 10-6). (4) La même analyse réalisée chez les enfants non diabétiques
montre un excès de transmission des VNTR IL paternels (transmis 66 %,
non transmis 46% p = 0.001). (5) L'haplotype VNTR IL- Hphl (+) est
associé à un poids de naissance plus élevé dans l'ensemble de la popula-
tion, (p = 0,03). Nous montrons que cet effet est paternel et est porté par
l'allèle Hphl(+). Conclusion Notre étude confirme l'implication de INS
VNTR dans la susceptibilité au diabète de type 1 avec des profils de trans-
mission différents selon le statut clinique. L'association retrouvée entre
INS VNTR II- Hphl (+) et le poids de naissance indépendamment du
diabète pourrait être en rapport avec l'empreinte parentale paternelle au
locus IGF2 impliqué dans la croissance fœtale et proche du gène de
l'insuline.
Mots-clés : diabète de type 1, INS-VNTR, poids de naissance.
•P293 / 192. ASSOCIATION DES VARIANTS DE L'EXON 1 DE
LA MANNOSE BINDING LECTINE (MBL) À LA MALADIE DE
CROHN. INDÉPENDANCE PAR RAPPORT AUX ASCA (ANTI-
CORPS ANTI-MANN ANE DE SACCHAROMYCES CEREVISIAE)
I. Fajardy (1), J.F. Colombel (4), J. Branche (4), N. Francois(3), G. Top-
Rossini (1), M. Chamaillard (4), D. Poulain (2, 3), B. Sendid (2, 3)
(/) CBP, Biochimie-CHRU Lille ; (2) INSERM U799 ; (3) Parasitologie-
Mycologie, Pôle de Microbiologie, CHRU Lille ; (4) Service de gastroen-
térologie, CHRU Lille
La MBL est une protéine plasmatique de la famille des lectines impliquée
dans la défense immunitaire innée. Elle reconnaît et lie spécifiquement des
polysaccharides présents à la surface de multiples micro-organismes
conduisant à leur destruction. Il existe une différence interindividuelle dans
les taux plasmatiques de MBL expliquée en partie par l'existence de poly-
morphismes situés dans le premier exon (codons 52, 54, 57) du gène de
la MBL ainsi que dans le promoteur (-221 C/G). On définit ainsi dans
ces 2 régions des allèles sauvages appelés A et Y et l'ensemble des allèles
mutés O et X respectivement. Les génotypes XA/O et O/O seraient res-
ponsables d'un taux faible circulant de la protéine MBL. Peu d'études ont
concerné la relation entre variants MBL et anticorps anti-Saccharomyces
cerevisiae (ASCA) et les résultats retrouvés sont discordants. Objectifs :
rechercher une association entre les variants décrits de la MBL et la sus-
ceptibilité à la maladie de Crohn (MC) dans une population française et
rechercher un lien avec la présence et le taux d'ASCA. Patients et Méthodes
45 patients atteints de Crohn et 150 témoins sont génotypes au niveau de
l'exon 1 et delà réion promotrice du gène de la MBL par PCR-DGGE et
PCR-SSP. Résultats : Nous retrouvons une association positive et signifi-
cative restreinte aux variants de l'exon 1 à l'état hétérozygote A/O (fré-
quences MC 0.51 vs Témoins 0.26). Cette association est portée majori-
tairement par le variant 52 C223T, Arg52Cys (fréquences MC 0.2 vs 0.06
témoins). Les mutations retrouvées ne sont associées ni au statut ni à
l'amplitude des titres d'ASCA. Conclusion : Nous confirmons l'implica-
tion du gène de la MBL dans la susceptibilité à la MC. Le fait que cette
association soit indépendante des ASCA qui ont les mêmes cibles que la
MBL suggère l'intervention de facteurs génétiques agissant en synergie.
Mots-clés : MBL, ASCA, Crohn.
•P294 / 202. DIAGNOSTICS OF HUMAN SYNDROMES OF HIGH
RADIOSENSITIVITY : A NEW APPROACH
I.M. Spivak, N.M. Pleskach, N.V. Smirnova, A.N. Shatrova, V.M.
Mikhelson
Institute of Cytology, Russian Academy of Sciences
Protein kinase ATM (ataxia-telangiectasia mutated) is the key protein in
global cell response. In causes of mutations in both allèles of the ATM
gene, either disease with complicated pleiotropic fenotype ataxia-telan-
giectasia (AT) is developed, or Louis-Bar syndrome, characterized by mul-
tiple neurological anomalies, high probability of tumors, accelerated aging,
and utmost sensitivity to action of ionizing radiation (Spivak, 1999 ; Lands-
dorp, 2000 ; Shiloh, 2003). Although AT is the most fréquent syndrome
of the hereditary increased radiosensitivity, heterozygous occurrence of
this disease is broader than could be supposed, judging by its probability
(1 case in 200,000 newborn), reaching the level of 2 to 10 percent in
various populations. The heterozygous carnage of this mutation does not
lead to AT but is connected with an extremely elevated risk of early mali-
gnant tumors of varied etiology. Data accumulated by présent time, concer-
ning the rôle of the ATM protein in régulation of cell response to DNA
damage allow to propose radiobiological approaches to définition of this
carriage. Flow cytometry and indirect fluorescence method were applied
for discrimination of this carriage by blood relatives of AT-patient in our
study. Checkpoint-control and G2-arrest after gamma-irradiation was
absent in the AT-cells and decreased in AT-carriers cells. Two proteins
(p53, and phosphorylized form of variant histone H2AX) have been chosen
for immunofluorescence study. No spécifie fluorescence of the P53 pro-
tein, was observed in nuclei of intact cells, both by healthy donor, and ail
those patients having ataxia-telangiectasia, as well as hétérozygote carriers
of the aforementioned disease. In 0.5 hour after being irradiated in dose 5
Gy, bright spécifie green fluorescence appears in cells of healthy donor,
corresponding to stabilization of the P53 protein, while in 1.5 hour after
irradiation return to intact state is starting. In cells of patients with AT, as
well as their blood relatives-strong heterozygous carriers of the disease
(parents), such spécifie nucleus fluorescence appears not earlier than in 1
hour, and stays on the same level as 1.5 hour after irradiation, i.e. altération
of time and stabilization character of the P53 protein, compared to cells
from healthy donor, occurs. Altérations in number of foci of the phospho-
rylized form of variant histone H2AX in cells of AT patients, and their
blood relatives, were studied. Judging by nucleus focuses of the gamma-
H2AX, the number of double-strand breaks in cells after being irradiated,
or subjected to action of mutagens is detected, and what is the dynamics
of their consolidation, taking place as part of activation of DNA repair
processes, and global cell response to DNA damage. Practically no spécifie
foci, containing gamma-H2AX, were observed in nuclei of intact cells of
healthy donor. At the same time, foci are well pronounced in intact nuclei
of cells of AT patients, and heterozygous carriers of this disease. However
the altérations in cell cycle control and the quantitative différences in P53
stabilization after gamma-irradiation, and gamma-H2AX foci formation
were found in cells of members of AT families. Thèse peculiarities may
serve as additional markers, contributing to detailed diagnosis of ataxia-
telangiectasia on cell level, and the détection of carriage of this disease in
dubious cases (e.g. by sisters and breathers of patient).
Mots-clés : ataxia-telangiectasia, histone H2AX, P53.
•P295 / 211. DÉVELOPPEMENT D'UNE QMPSF FACILITANT LA
DÉTECTION DES MICROREMANIEMENTS GÉNOMIQUES
CHEZ DES PATIENTS ATTEINTS D'AUTISME
A.-L. Mosca (1, 2), P. Saugier-Veber ( 1, 3), A. Goldenberg (3), C. Thauvin
(2), V. Drouin-Garraud (3), A. Rosier (4), N. Lagarde (5), P. Brun (4), F.
Joly (5), F. Bonnet-Brilhault (6), F. Mugneret (7), C. Andres (6), D. Cam-
pion (1), M. Tosi (1), L. Olivier-Faivre (2), T. Frébourg (1, 3)
(/) Inserm U614, Faculté de Médecine et de Pharmacie, Institut Hospi-
talo-Universitaire de Recherche Biomédicale de Rouen ; (2) Service de
Génétique, CHU de Dijon ; (3) Service de Génétique, CHU de Rouen ; (4)
Centre de Ressource Autisme de Haute Normandie, CH du Rouvray ; {5)
Centre de Ressource Autisme de Bourgogne, CHU de Dijon ; (6) Inserm
U619, Faculté de Médecine et CHU de Tours ; (7) Laboratoire de Cyto-
génétique, CHU de Dijon
L'autisme est une affection neuro-psychiatrique caractérisée par des défi-
cits des interactions sociales et de la communication, associés à un réper-
toire de comportements restreints, répétitifs et stéréotypés. Un enfant sur
1 000 est atteint d'autisme avec 4 fois plus de garçons que de filles. Plu-
sieurs arguments épidémiologiques plaident en faveur de l'importante
composante génétique de l'autisme. Actuellement, le diagnostic d'une
maladie génétique monogénique incluant des signes autistiques, comme le
syndrome de l'X Fragile, est porté chez 15 % des sujets autistes. En outre,
10 à 15 % des sujets autistes présentent des anomalies du caryotype, en
particulier des délétions et duplications interstitielles (15qll-ql3, 22qll)
et des remaniements subtélomériques. L'objectif de cette étude est le déve-
loppement d'une méthode de génétique moléculaire, reposant sur le prin-
cipe de la QMPSF (Quantitative Multiplex PCR of Short Fluorescent Frag-
ments), facilitant la détection de micro-remaniements génomiques à
l'origine d'autisme. Nous avons modélisé 2 QMPSF, l'une explorant 16
régions chromosomiques déjà impliquées dans l'autisme et l'autre explo-
rant 14 gènes, candidats par leur fonction dans la synaptogenèse et par leur
implication dans des études de liaison et d'association répliquées. Nous
avons inclus 107 patients dont le diagnostic d'autisme a été validé par le
centre de ressource autisme de trois régions, Rouen, Tours et Dijon. Au
terme d'un bilan génétique, ces patients sont répartis en deux cohortes : la
première cohorte correspond à des syndromes autistiques, l'autisme étant
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