UNIVERSIDADE FEDERAL DO RIO GRANDE DO SUL

UNIVERSIDADE FEDERAL DO RIO GRANDE DO SUL
PROGRAMA DE PÓS-GRADUAÇÃO EM BIOLOGIA CELULAR E MOLECULAR
Avaliação da indução de autofagia em células de câncer de pulmão em
resposta ao tratamento com cisplatina.
Michelle de Souza Lima
Dissertação submetida ao Programa
de Pós-Graduação em Biologia
Celular e Molecular do Centro de
Biotecnologia da UFRGS como
requisito parcial para a obtenção do
título de Mestre.
Orientador: Prof. Dr. João Antonio Pêgas Henriques
Coorientador: Prof. Dr. Guido Lenz
Porto Alegre, maio de 2014.

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INSTITUIÇÕES E FONTES FINANCEIRAS
Esta dissertação foi desenvolvida no Laboratório de Reparação de DNA de
Eucariotos, situado no Departamento de Biofísica da Universidade Federal do Rio
Grande do Sul. O projeto foi subsidiado pela Coordenação de Aperfeiçoamento de
Pessoal de Nível Superior (CAPES), a qual concedeu a bolsa de mestrado e pelo
projeto PRONEX/FAPERGS/CNPq no 10/0044-3.

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AGRADECIMENTOS
Agradeço ao meu orientador, prof. João Antonio Pêgas Henriques, por ter me
recebido em seu laboratório em 2009 como aluna de iniciação científica e ter
acreditado em meu potencial até hoje. Obrigada de coração.
Ao meu coorientador, prof. Guido Lenz, por toda a atenção e pelas ótimas
ideias. É uma honra tê-lo como colaborador do meu trabalho.
Ao Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e Molecular e às
agências de fomento, CAPES e FAPERGS, pelas oportunidades.
Ao Luciano e à Sílvia, por serem tão atenciosos e prestativos.
Aos membros da banca examinadora pela colaboração.
À Diana, por toda a paciência e pelas puxadas de orelha quando necessário.
Muito obrigada por ter acreditado na minha capacidade e por todo o tempo
dedicado a me ensinar. Este trabalho não teria sido feito sem a colaboração da
Diana.
Às minhas queridas amigas Larissa, Bruna e Victória, pela companhia e pelas
risadas. O ambiente de trabalho é muito mais agradável com a presença de
vocês.
Às colombianas lindas, Grethel e Lyda. Aos meninos, Cristiano, André, Joel, e
Iuri. Às meninas que não estão mais no lab 210, mas que moram no meu
coração, Clara, Patrícia, Juliane, Ana, Renata e Fernanda. Às meninas do
Genotox, especialmente Miriana, Rose, Márcia e Nusha. À Aline, uma amiga para
todas as horas. Muito obrigada a todos vocês pelo carinho e amizade.
Aos meus pais, Marli e Genézio, e minha irmã, Luciane. Muito obrigada por
depositarem tanto amor e confiança em mim. Amo vocês.
Ao meu namorado/marido Paulo. Muito obrigada por ser o cara mais carinhoso
e paciente do universo. Sem o seu apoio nada disso teria acontecido. Amo-te,
meu nerd preferido.
Muito obrigada a todos!

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ÍNDICE
INSTITUIÇÕES E FONTES FINANCEIRAS................................................
AGRADECIMENTOS...................................................................................
LISTA DE ABREVIATURAS........................................................................
RESUMO.....................................................................................................
ABSTRACT..................................................................................................
1. INTRODUÇÃO.......................................................................................
1.1. Autofagia..........................................................................................
1.1.1. Regulação Molecular da Via Autofágica.................................
1.1.2. A Degradação Ocorre de Maneira Seletiva............................
1.1.3. Autofagia e sua Associação com a Tumorigênese................
1.1.4. Agentes Moduladores da Via Autofágica...............................
1.1.4.1. Rapamicina..................................................................
1.1.4.2. Cloroquina...................................................................
1.1.4.3. 3-Metiladenina.............................................................
1.2. Cisplatina.........................................................................................
1.2.1. Cisplatina no Tratamento contra o Câncer de Pulmão..........
2. OBJETIVOS...........................................................................................
2.1. Objetivo geral...................................................................................
2.2. Objetivos específicos.......................................................................
3. CAPÍTULO I - DNA Alkylation damage and autophagy induction ........
4. CAPÍTULO II - Autophagy induction in non-small cell lung cancer cells
contributes to cell death induced by cisplatin treatment.........................
5. DISCUSSÃO GERAL.............................................................................
6. CONCLUSÕES......................................................................................
7. PERSPECTIVAS....................................................................................
8. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS.......................................................
ANEXO I – Metodologia complementar..................................................
ANEXO II - Curriculum vitae...................................................................
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LISTA DE ABREVIATURAS
3MA
Akt/PKB
AMP
AMPK
AO
ATG
Atg
ATP
AVOs
Bcl-2
Bcl-xL
CDDP
CQ
DMEM
DMSO
DNA
DRAM
EDTA
FIP200
GβL
INCA
3-metiladenina (3-methyladenine)
proteína cinase B (kinase protein B)
adenosina monofosfato
proteína cinase ativada por AMP (AMP-activated protein kinase)
laranja de acridina (acridine orange)
genes relacionados à autofagia (autophagy-related genes)
proteínas relacionadas à autofagia (autophagy-related proteins)
adenosina trifosfato
organelas acídicas vacuolares (acidic vacuolar organelles)
proteína 2 de linfoma de células B (B-cell lymphoma 2)
proteína anti-apoptótica de linfoma de células B extra grande (B-cell
lymphoma-extra large)
cisplatina ou cis-diaminodicloroplatina (II)
cloroquina (chloroquine)
Dulbecco's Modified Eagle Medium
dimetilsulfóxido
ácido desoxirribonucleico (deoxyribonucleic acid)
gene modulador de autofagia induzido por dano (damage-regulated
autophagy modulator)
ácido etilenodiaminotetracético (ethylenediamine tetraacetic acid)
proteína de interação com a família FAK de 200 kD (FAK family-
interacting protein of 200 kDa)
subunidade β-like da proteína G (G protein β-subunit-like protein)
Instituto Nacional do Câncer