Gélose XLT4
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Gélose XLT4 DOMAINE D’UTILISATION La gélose XLT4 (Xylose-Lysine-Tergitol 4) est un milieu d’isolement utilisé pour la recherche des Salmonella, à l’exception de Salmonella Typhi et Paratyphi, notamment chez les mammifères. HISTORIQUE En 1991, Miller et Tate démontrèrent que l’utilisation de la gélose Xylose Lysine Tergitol 4 (XLT4) augmentait la fréquence de détection des Salmonella non-Typhi à partir de prélèvements d’origine avicole contenant une microflore secondaire importante, et que le milieu permettait une bonne différenciation entre Salmonella et Citrobacter. Le milieu décrit par ces auteurs incorporait le Tergitol 4 dans une base Xylose Lysine, modifiée pour inhiber un grand nombre de microorganismes (Proteus, Pseudomonas, Providencia) qui interféraient auparavant sur la détection des Salmonella. Des études ultérieures réalisées par Dusch et Altwegg établirent que le milieu XLT4 pouvait être employé pour la recherche des Salmonella, à l’exception de Salmonella Typhi et Paratyphi, dans les prélèvements cliniques. PRINCIPES - Le Tergitol 4 inhibe la croissance de la flore contaminante à Gram positif et de nombreux microorganismes à Gram négatif, notamment les Proteus. - Le xylose est fermenté par les germes entéropathogènes, à l’exception des Shigella qui sont ainsi différenciées des autres bactéries. Après avoir utilisé le xylose, les salmonelles décarboxylent la lysine (par l’intermédiaire de leur lysine-décarboxylase) en cadavérine, ce qui provoque une augmentation de pH. En milieu devenu alcalin, les colonies de salmonelles deviennent rouges en présence de l’indicateur de pH, le rouge de phénol. - La réduction du citrate ferrique ammoniacal par les germes pathogènes producteurs de sulfure d'hydrogène se manifestent par un noircissement qui est dû à l’apparition de sulfure de fer au centre des colonies. - Le milieu contient deux autres glucides : le lactose et le saccharose. La fermentation de l’un ou l’autre ou des deux se traduit par une acidification du milieu, provoquant l’apparition de colonies jaunes par virage du rouge de phénol. - Les germes non pathogènes qui ne décarboxylent pas la lysine produisent une acidification résultant des fermentations sucrées. L’abaissement de pH s’oppose au noircissement des colonies. 1/5 Biokar Diagnostics – Rue des Quarante Mines – ZAC de Ther – Allonne – B.P. 10245 – F60002 Beauvais Cedex – France Tél : + 33 (0)3 44 14 33 33 – Fax : + 33 (0)3 44 14 33 34 – www.biokar-diagnostics.fr PREPARATION - Mettre en suspension 59,0 g de milieu de base déshydraté (BK156) dans 1 litre d’eau distillée ou déminéralisée. - Ajouter 4,6 mL de supplément sélectif Tergitol 4 (BS039). - Porter lentement le milieu à ébullition sous agitation constante et l’y maintenir durant le temps nécessaire à sa dissolution. - Ne pas surchauffer. - Ne pas autoclaver. MODE D’EMPLOI Refroidir et maintenir le milieu à 44-47°C. Couler en boîtes de Petri stériles. Laisser solidifier sur une surface froide. Faire sécher les boîtes à l’étuve, couvercle entrouvert. A la surface des boîtes ainsi préparées ou du milieu pré-coulé (BM036) ramené préalablement à température ambiante, ensemencer en stries l’inoculum, à partir des milieux d’enrichissement utilisés pour la recherche des Salmonella. - Transférer parallèlement l’inoculum sur un autre milieu d’isolement sélectif tel que COMPASS® Salmonella Agar (BM066). - Incuber à 37 (± 2)°C pendant 24 à 48 heures. - LECTURE Les colonies de Salmonella typiques (H2S-positif) sont rouges à centre noir. Elles peuvent présenter un halo jaune après 24 heures d’incubation. En cas d’incubation prolongée, les colonies deviennent rouges à roses à centre noir ou entièrement noires. Les colonies de Salmonella H2S-négatif apparaissent rouges à roses, sans centre noir. Les Citrobacter, Klebsiella et Enterobacter cloacae produisent des colonies jaunes. La croissance d’Enterobacter aerogenes et Escherichia coli est partiellement inhibée; les colonies présentes sont de couleur jaune. Proteus, Pseudomonas, Providencia sont partiellement à complètement inhibées. Shigella présente une faible croissance et produit des colonies roses. FORMULE - TYPE du milieu complet (pouvant être ajustée de façon à obtenir des performances optimales) Pour 1 litre de milieu : - Peptone............................................................................................1,6 g - Extrait autolytique de levure.............................................................3,0 g - L-Lysine ...........................................................................................5,0 g - Lactose ............................................................................................7,5 g - Saccharose ......................................................................................7,5 g - Xylose ............................................................................................3,75 g - Chlorure de sodium..........................................................................5,0 g - Thiosulfate de sodium ......................................................................6,8 g - Citrate ferrique ammoniacal .............................................................0,8 g - Rouge de phénol.........................................................................80,0 mg - Tergitol 4 .......................................................................................4,6 mL - Agar agar bactériologique ..............................................................18,0 g pH du milieu prêt-à-l’emploi à 25°C : 7,4 ± 0,2. 2/5 Biokar Diagnostics – Rue des Quarante Mines – ZAC de Ther – Allonne – B.P. 10245 – F60002 Beauvais Cedex – France Tél : + 33 (0)3 44 14 33 33 – Fax : + 33 (0)3 44 14 33 34 – www.biokar-diagnostics.fr CONTRÔLE QUALITE - Milieu de base déshydraté : poudre rosâtre, fluide et homogène. - Milieu préparé (complet) : gélose rouge orangé. - Réponse culturale typique après 48 heures d’incubation à 37°C : Microorganismes Salmonella Typhimurium Salmonella Enteritidis Escherichia coli Enterococcus faecalis Staphylococcus aureus ATCC® 14028 CIP 82.97 ATCC 25922 ATCC 29212 ATCC 25923 Croissance Caractéristiques bonne, score 2 bonne, score 2 partiellement inhibée, score 0-1 inhibée, score 0 inhibée, score 0 colonies rouges à centre noir colonies rouges à centre noir colonies jaunes STOCKAGE / CONSERVATION Milieu de base déshydraté (sans Tergitol 4) : 2-30°C. - La date de péremption est mentionnée sur l’étiquette. - Milieu complet préparé en boîtes, avec supplément : 15 jours à 2-8°C, à l’abri de la lumière (à titre indicatif). Supplément sélectif Tergitol 4 : - Stocker entre 2 et 25°C, à l’abri de la lumière. - La date de péremption est mentionnée sur l’étiquette. Milieu complet pré-coulé en boîtes de Petri : - Stocker entre 2 et 8°C, à l’abri de la lumière. - La date de péremption est mentionnée sur l’ étiquette. PRESENTATION Code Milieu complet pré-coulé en boîtes de Petri (Ø 90 mm) : - Coffret de 20 boîtes BM03608 Milieu de base déshydraté (sans Tergitol 4): - Flacon de 500 g BK156HA Supplément sélectif Tergitol 4 : - Flacon de 50 mL BS03908 3/5 Biokar Diagnostics – Rue des Quarante Mines – ZAC de Ther – Allonne – B.P. 10245 – F60002 Beauvais Cedex – France Tél : + 33 (0)3 44 14 33 33 – Fax : + 33 (0)3 44 14 33 34 – www.biokar-diagnostics.fr SUPPORT PHOTO : Référence : [BK156HA + BS03908], BM03608 Domaine d’utilisation : Recherche des Salmonella, notamment chez les oiseaux et les mammifères. Salmonella Typhimurium Colonie caractéristique Couleur rouge à centre noir Gélose XLT4 Réf : BM03608 Incubation 24 heures à 37°C (surface) Colonies caractéristiques rouges avec un précipité noir au centre (production de H2S); les colonies deviennent totalement noires après incubation prolongée. 4/5 Biokar Diagnostics – Rue des Quarante Mines – ZAC de Ther – Allonne – B.P. 10245 – F60002 Beauvais Cedex – France Tél : + 33 (0)3 44 14 33 33 – Fax : + 33 (0)3 44 14 33 34 – www.biokar-diagnostics.fr REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES MILLER, R.G., TATE, C.R., MALLINSON, E.T., and SCHERRER, J.A.. 1991. Xylose-Lysine-Tergitol 4: An improved selective agar medium for the isolation of Salmonella. Poultry Science, 70 : 2429-2432. MILLER, R.G., TATE, C.R., MALLINSON, E.T., and SCHERRER, J.A.. Erratum. Xylose-Lysine-Tergitol 4: An improved selective agar medium for the isolation of Salmonella. Poultry Science, 71 : 398. TATE, C.R., MILLER, R.G., and MALLINSON E.T.. 1992. Evaluation of two isolation and two no-isolation methods for detecting naturally occurring Salmonellae from broiler flock environmental drag-swab samples. Journal of Food Protection, 55 : 964-967. DUSCH, H., and ALTWEGG, M.. 1995. Evaluation of five new plating media for isolation of Salmonella species. Journal of Clinical Microbiology, 33 : 802-804. WALLACE, H.A.. 1996. Evolution of Methods for the Detection of Salmonella in Foods. Journal of A.O.A.C. International, 79 : 4-12. XP CEN ISO/TS 11133-2 (V 08-104-2). Janvier 2004. Microbiologie des aliments. Guide pour la préparation et la production des milieux de culture. Partie 2 : Guide général pour les essais de performance des milieux de culture. NF U 47-102. Janvier 2008. Méthodes d’analyse en santé animale. Isolement et identification de tout sérovar ou de sérovar(s) spécifié(s) de salmonelles chez les mammifères. COMPASS® est une marque de SOLABIA S.A.S.. Les mentions portées sur l’étiquette sont prédominantes sur les formules ou les instructions décrites dans ce document. Les informations et les spécifications contenues dans cette fiche technique ont été établies à la date du 2009-06-04. Elles sont susceptibles d’être modifiées à tout moment, sans préavis. Code document : BK156/F/2003-03 : 9. 5/5 Biokar Diagnostics – Rue des Quarante Mines – ZAC de Ther – Allonne – B.P. 10245 – F60002 Beauvais Cedex – France Tél : + 33 (0)3 44 14 33 33 – Fax : + 33 (0)3 44 14 33 34 – www.biokar-diagnostics.fr
