Détection moléculaire par RT-PCR de l'envahissement ganglionnaire dans les cancers du col utérin

DOSSIER
Détection moléculaire
par RT-PCR de l'envahissement
ganglionnaire dans les cancers
du col utérin
Molecular detection by RT-PCR in cervical cancer
V. Samouëlian(1, 2), E. Leblanc(1), M.C. Baranzelli(3), F. Revillion(2), F. Narducci(1), S. Taïeb(4),
B. Castelain(5), D. Querleu(6), J.P. Peyrat(2)
D
ix à 15 % des patientes atteintes d’un
cancer du col utérin ont une récidive alors
que leurs ganglions étaient histologiquement indemnes. Un envahissement ganglionnaire,
non diagnostiqué par l’examen anatomopathologique standard, pourrait être à l’origine de ces
récidives. En effet, la présence de micrométastases
ganglionnaires est un facteur de risque important
de récidives dans les cancers du col utérin (1).
Dès lors, il devient indispensable de disposer de
moyens fiables de diagnostic de l’envahissement
ganglionnaire. Le recours à l’immunohistochimie
(IHC) a amélioré la sensibilité du diagnostic des
micrométastases ganglionnaires tout en restant très
chronophage. Les techniques de biologie moléculaire (reverse-transcriptase PCR [RT-PCR]) se sont
révélées très sensibles pour mettre en évidence la
présence de cellules tumorales dans les ganglions,
mais peu spécifiques (2). Dans le but d’améliorer la
technique de détection moléculaire de l’envahissement ganglionnaire, nous avons testé et comparé
différents marqueurs de cellules épithéliales (CK19,
Mucine 1, HER1-4), de cellules cancéreuses du col
utérin (HPV16-E6) ou impliqués dans les phénomènes d’angiogenèse (VEGF et VEGF-C) et d’invasion tumorale (uPA et MMP9) [3]. Le but de la
présente étude était d’évaluer la sensibilité et la
spécificité de ces marqueurs pour diagnostiquer un
envahissement ganglionnaire dans les carcinomes
du col utérin.
Matériel et méthodes
Nous avons recueilli des échantillons de tumeurs
et de ganglions lomboaortiques de 21 patientes
présentant un cancer localement avancé du col
utérin (stades IB2 à IVA) sans adénomégalie sur
l’IRM préopératoire. Tous les ganglions lomboaortiques de plus de 0,5 cm ont été étudiés en histologie
(colorations standard et immunohistochimie) et en
RT-PCR (TaqMan®). Au total, 179 ganglions dont 17
histologiquement envahis (HPN) ont été étudiés.
Nous avons également examiné six prélèvements
de cols utérins sains provenant de patientes ayant
bénéficié d’une hystérectomie pour léiomyomatose
utérine. Les marqueurs utilisés en biologie moléculaire étaient : CK19, MUC1, HPV16-E6, HER1-4, uPA
MMP9, VEGF et VEGF-C, préalablement testés sur
des échantillons de tumeurs de carcinomes du col
utérin et des ganglions indemnes d’envahissement
métastatique (HNN) [3].
Résultats
Nous avons observé une expression significativement plus élevée de HPV16-E6 (p < 0,001), CK19,
uPA et MMP9 (p < 0,05) dans les tumeurs de col
utérin que dans les cols sains et de CK19, HPV16-E6
et MUC1 (p < 0,001) dans les ganglions histologiquement envahis que dans les ganglions indemnes.
HPV16-E6 n’était pas exprimé dans les tissus sains
1. Département de gynécologie.
2. Laboratoire d’oncologie moléculaire humaine. 3. Département
d’anatomopathologie. 4. Département d’imagerie médicale. 5.
Département de radiothérapie,
Centre Oscar-Lambret, 3, rue
Frédéric-Combemale, BP307, 59020
Lille Cedex.
6. Département de chirurgie,
Institut Claudius-Regaud, 20-24, rue
Pont-Saint-Pierre, 31052 Toulouse
Cedex.
La Lettre du Gynécologue • n° 344 - septembre 2009 | 17
Mots-clés
Cancer du col utérin
Biologie moléculaire
Ganglions
RT-PCR
Keywords
Cervical cancer
Molecular biology
Nodes
RT-PCR
Références
bibliographiques
1. Marchiolé P, Buénerd A,
Benchaib M, Nezhat K, Dargent D,
Mathevet P. Clinical significance of
lympho vascular space involvement
and lymph node micrometastases
in early-stage cervical cancer: a
retrospective case-control surgicopathological study Gynecol Oncol
2005;97(3):727-32.
2. Van Trappen PO, Gyselman VG,
Lowe DG et al. Molecular quantification and mapping of lymph-node
micrometastases in cervical cancer.
Lancet 2001;357(9249):15-20.
3. Samouëlian V, Revillion F,
Alloy N, Lhotellier V, Leblanc E,
Peyrat JP. Measurement of mRNA
of 11 biomarkers by RT-PCR to
detect lymph node involvement in
cervical cancer. Int J Biol Markers
2008;23(2):74-82.
de col utérin ni dans les tumeurs de six patientes.
L’expression de plusieurs marqueurs était corrélée dans
les tumeurs et dans les HPN. Il s’agissait de HER3 avec
MUC1, HER2 et uPA, de HER1 avec HER2, ainsi que de
VEGF-C avec MMP9. Les expressions de HER1 et HER3
étaient corrélées dans les tumeurs, tout comme celles
de CK19 avec MUC1 et HER3 dans les HPN.
Concernant le diagnostic d’envahissement ganglionnaire, la sensibilité et la spécificité étaient respectivement de 82 % et 99 % pour CK19, de 76 % et 94 %
pour HPV16-E6, et de 100 % et 94 % en combinant la
détection de CK19 et HPV16-E6. En réexaminant en
IHC les 10 ganglions initialement "histologiquement
négatifs" exprimant CK19 et HPV16-E6, nous avons pu
mettre en évidence une micrométastase dans un cas
et des cellules tumorales isolées dans 2 cas, portant la
spécificité à 96 % pour la détection combinée de CK19
et HPV16-E6. HPV16-E6 n’était jamais exprimé dans
les ganglions des patientes pour lesquelles il n’était
pas exprimé dans les tumeurs.
Discussion
Nous avons donc observé un niveau d’expression des
marqueurs CK19, HPV16-E6 et MUC1 significativement plus élevé dans les ganglions histologiquement
envahis que dans les ganglions indemnes. La recherche
conjointe de CK19 et HPV16-E6 a permis de diagnostiquer un envahissement ganglionnaire avec une
excellente sensibilité et une très bonne spécificité. La
technique de RT-PCR a une meilleure sensibilité que
l’examen histologique, permettant le diagnostic de
micrométastases et de cellules tumorales isolées au
niveau des ganglions et offre par ailleurs l’avantage
d’être facilement automatisable. L’envahissement
ganglionnaire chez les patientes dont les tumeurs
n’exprimaient pas l’HPV16-E6 était diagnostiqué par
l’expression de CK19. L’utilisation combinée de CK19
et HPV16-E6 pourrait être proposée comme moyen
diagnostique de l’envahissement ganglionnaire dans
les cancers du col utérin. D’autres HPV oncogènes
pourraient également être recherchés. Plusieurs stratégies moléculaires de diagnostic de l’envahissement
ganglionnaire sont envisageables. Une première
stratégie pourrait consister à coupler la détection
de CK19, HPV16 et HPV18 lors du diagnostic moléculaire. Cela permettrait de couvrir plus de 70 % des
HPV-HR impliqués dans les cancers du col utérin.
Une autre stratégie serait de rechercher, en premier
lieu et pour chaque patiente, l’HPV-HR responsable
de la carcinogenèse sur un prélèvement au niveau de
la tumeur cervicale. La détection de l’envahissement
ganglionnaire serait ensuite réalisée en combinant
l’étude de CK19 et de l’HPV-HR identifié au niveau
de la tumeur.
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18 | La Lettre du Gynécologue • n° 344 - septembre 2009