Mémoire pour l’obtention du diplôme d’études spécialisées d’oncologie médicale

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Mémoire pour l’obtention du diplôme d’études
spécialisées d’oncologie médicale
Etude de la méthylation et de l’expression du gène CD70 sur une série de 40
tumeurs malignes du sein
Camille PETRAU
Née le 10/12/1985 à Rouen
Mémoire soutenu le 20 juin 2014 à Caen
Directeur de Mémoire : Monsieur le Docteur Florian Clatot
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TABLE DES MATIERES
INTRODUCTION .................................................................................................. 4
Epidémiologie du cancer du sein ............................................................................................ 4
Classification histologique ..................................................................................................... 4
Classification moléculaire ...................................................................................................... 5
Profils d’expression génomique ......................................................................................... 5
Classification par immunohistochimie ............................................................................... 6
Principaux facteurs pronostiques et prédictifs dans le cancer du sein ................................... 7
Cancer et système immunitaire .............................................................................................. 8
Immunosurveillance, échappement immunitaire et immunoediting .................................. 8
CD70 et cancer ................................................................................................................. 12
Définition de la méthylation ................................................................................................. 13
L’exemple de CD70 ............................................................................................................. 14
Objectif de l’étude ................................................................................................................ 15
MATERIELS ET METHODES ............................................................................... 16
Sélection des échantillons congelés ..................................................................................... 16
Extraction des acides nucléiques .......................................................................................... 16
Contrôle de la qualité des acides nucléiques ........................................................................ 16
Mesure de l'expression de CD70 .......................................................................................... 17
Transcription inverse ........................................................................................................ 17
PCR quantitative .............................................................................................................. 17
Analyse de la méthylation de la région promotrice de CD70 .............................................. 20
Etude de la méthylation de CD70 parmi les échantillons sélectionnés ............................ 20
Analyse Statistique ............................................................................................................... 24
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RESULTATS ....................................................................................................... 25
Caractéristiques des patientes ............................................................................................... 25
Mesure de l'expression de CD70 .......................................................................................... 26
Analyse de la méthylation de la région promotrice de CD70 .............................................. 26
DISCUSSION ..................................................................................................... 28
CONCLUSION ET PERSPECTIVES ....................................................................... 31
ANNEXES .......................................................................................................... 36
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INTRODUCTION
Epidémiologie du cancer du sein
Avec 53 000 nouveaux cas et 11 500 décès par an en France en 20111, le cancer du sein est
un problème majeur de santé publique. C’est aujourd’hui le cancer le plus fréquent dans les
pays occidentaux et le premier cancer féminin en France. Actuellement, l’âge moyen au
diagnostic est de 61 ans.
Cette maladie plurifactorielle au développement complexe est liée à l’interaction de
multiples facteurs environnementaux et génétiques. Son étiologie n’est que partiellement
connue mais on connaît le rôle clé des facteurs hormonaux. Les principaux facteurs de risque
actuellement bien établis sont le sexe féminin, l’âge, une histoire familiale de cancer du sein,
et notamment un terrain génétique lié à une mutation sur un des gènes de prédisposition au
cancer du sein (principalement BRCA1 et BRCA2), la nulliparité ou un âge tardif lors de la
première grossesse, une importante imprégnation oestrogénique (âge précoce des
premières règles, ménopause tardive, prise de traitement hormonal substitutif prolongé),
l’obésité post-ménopausique et la sédentarité. Il existe aussi un rôle prouvé de la
consommation régulière d’alcool et une influence probable de l’alimentation25.
Malgré une incidence croissante depuis 50 ans, due notamment au vieillissement de la
population et à l’augmentation des facteurs de risque liés au style de vie « occidental », la
mortalité spécifique a tendance à diminuer. L’amélioration des thérapeutiques et la
meilleure coordination des différents intervenants dans la prise en charge peuvent
probablement expliquer cette évolution3,6,7.
Il existe une grande hétérogénéité des cancers mammaires, dont l’évolution mais aussi les
traitements sont très différents. Une des classifications les plus utilisées actuellement est la
classification histologique, déterminée morphologiquement par les anatomopathologistes.
Classification histologique
Les carcinomes qui sont des tumeurs malignes épithéliales représentent 99% des tumeurs
malignes primitives du sein (1% de sarcomes et lymphomes). La classification histologique
des carcinomes mammaires a été établie en 1981 par l’OMS puis actualisée en 2013. Elle est
avant tout basée sur des critères morphologiques. Parmi les tumeurs épithéliales, les deux
types les plus fréquents sont le carcinome infiltrant de type non spécifique (canalaire) (40 à
75% des tumeurs primitives malignes mammaires selon les séries8) et le carcinome lobulaire
(5 à 15% des primitifs mammaires). A la différence du canalaire, il n’exprime pas la E-
cadhérine. Au-delà de cette classification histologique, établie à partir d’observations
microscopiques, les progrès en biologie moléculaire du cancer ont permis d’établir il y a près
de 15 ans une classification basée sur la biologie tumorale.
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Classification moléculaire
Profils d’expression génomique
La classification moléculaire a été proposée suite aux résultats d’analyses de données issues
d’études de micro-puces biomoléculaires, « micro-arrays », qui permettent d’analyser
l’expression de milliers de gènes simultanément. Les premiers travaux ont été menés par
l’équipe de Sorlie et Pérou9,10. Dans leur étude, les profils d’expression de 115 tumeurs du
sein ont été analysés sur un panel de 534 gènes et ont permis de classer les tumeurs
mammaires en 5 groupes : « luminal A », « luminal B », « HER2 », « basal-like » et « normal
breast-like » (cf. Figure 1). Ces sous-groupes sont associés à des évolutions cliniques et à des
réponses thérapeutiques différentes11. Les profils d’expression génomiques (« transcriptome
») sont actuellement à l’étude pour déterminer le pronostic des patientes en complément
des facteurs anatomo-cliniques actuellement disponibles12.
Figure 1 : Clustering mettant en évidence les différents sous-types intrinsèques : en orange,
les basal-like, en rose les HER2, en vert les normal-breast like, en bleu les Luminal ;
Perou et al., Nature, 2000.
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